SET COLORAIE GRAM

SET COLORAIE GRAM-METODA CLASICPrincipiul metodei

Germenii GRAM (+)si GRAM (-) sunt colorai neselectiv de violetul de genian (cristalul violet).Adaugarea de iod formez un complex de cristal voilet iod in peretele celular al bacteriilor. Decolorantul, aflat in componena setului, extrage lipidele din peretele celular al germenilor GRAM (-). n acest fel, creste poroyitatea peretelui, ceea ce permite migraia colorantuluiiar bacteriile devin incolore.Germenii GRAM(+) sunt deshidratai, producndu-se o reducere a porozitaii peretelui celular. Drept urmare, complexul colorant este prins ca ntr-o capcan i bacteriile rmn colorate.Recolorarea germenilor GRAM (-) se efectueaz cu fucsin.

Compunerea setului:

Soluie violet de genian 1 x 250 mlSoluie Lugol 1 x 250 ml Soluie decolorare 2 x 250 mlSoluie de fuxin 1 x 250 ml

Prelevarea i pregatirea probelor pentru analiz

Coloniile bacteriene se recolteaz cu o ans steril, se suspend ntr-o pictur de ap distilat i se etaleaz pe lam.Probele de lichide se ntind direct pe lame degresate, cu ajutorul unei pipete Pasteur.Probele de paste,creme, geluri etc se etaleaz direct pe lame cu ajutorul unor spatule sterile.

Fixarea frotiurilor:

Fixarea se efectueaz prin trecerea lamei prin flacr, cu atenie, evitndu-se nclzirea excesiv care are efecte negative la colorare.

Pregtirea setului pentru lucru:

Soluia de fucsin se dilueaz de 10 ori. Pentru aceasta se ia 1 ml.soluie de fucsin i se amestec cu 9 ml. ap distilat. Soluia diluat este valabila 12 ore.Pentru lucrul soluia de decolorare se transfer n flacoane cu gtul suficient de larg pentru a permite accesul lamelor.

Tehnica de lucru:

Frotiul fixat se imersez un minut n soluia de violet de genian i se spal bine cu ap distilatSe imerseaz 2 minute n soluia de Lugol i se spal cu ap distilatSe imerseaz n soluia de decolorare ori de cte ori este necesar, pan ce noriide substane colorate nu se mai degaj din prile groase ale frotiului Se imerseaz un minut n soluia de fucsin diluat i se spal cu ap distilatSe scurge excesul de lichid prin pamponare cu hrtie de filtruSe examineaz la microscop cu obiectivul de imersie.

Intrepretarea rezultatelor:

Germenii GRAM (+) apar colorai in purpuriu-violet, iar cei GRAM (-) se coloreaz in portocaliu roz sau rou.

Erori posibile:

Tratamentul pacienilor cu medicamente antibacteriene poate face ca germenii GRAM (+) s apar ca GRAM (-). Rezultatele pot fi afectate i de folosirea unor culturi bacteriene vechi sau de nclzirea excesiv a frotiului la flacr.