microscopie optica - biologie celulara lp1
-
Upload
otilia-popa -
Category
Documents
-
view
238 -
download
7
Transcript of microscopie optica - biologie celulara lp1
Microscopul Optic
Biologia celulara = stiinta fundamentala care se ocupa cu studiul celulei ca unitate structurala si functionala a oricarui organism viu
Microscopul optic = dispozitiv cu ajutorul caruia se pot examina structuri cu dimensiuni mult sub puterea de rezol 12212t1921m utie a ochiului uman
Componenete microscop optic :
1. SURSĂ DE LUMINA
2. CONDENSOR
3. DIAFRAGMĂ
4. MASA
5. DISPOZITIV DE DEPLASARE A LAMEI
6. REVOLVER
7. OBIECTIVE
8. SISTEM DE PRISME
9. OCULAR
10. MACROVIZA
11 MICROVIZA
Modul de formare al imaginii la MO :
Obiectivul formeaza o imagine marita , reala si rasturnata a obiectului
Ocularul- are ca obiect imaginea data de obiectiv si va forma imaginea finala mult marita , rasturnata si virtuala , la infinit deci nu necesita efort de acomodare
Performantele MO sunt :
Puterea de marire
Puterea de rezolutie
PUTEREA DE MARIRE :
Puterea de marire = produsul dintre puterea de marire a obiectivului si cea a ocularului
Puterea de marire maxima x1500 ori
Puterea de marire - ×4, ×10 ;- ×20, ×40 – diagnostic histologic ;- ×60, ×100 – diagnostic citologic
PUTEREA DE REZOLUTIE =Cea mai mica distanta dintre doua puncte la care acestea pot fii percepute distinct
De ea depinde claritatea si bogatia în detalii a imaginii
Depinde de lentila obiectivului
FORMULA LUI ABBÉ :
d=l/ n sinα
l= lungimea de unda a radiatiei electromagnetice ( 0,55 µm)
n= indicele de refractie al mediului dintre preparat si obiectiv
a= ½ din aperura unghiulara a obiectivului
Limitarile puterii de rezolutie a microscopului optic in practica
l este o constanta naturala ce nu poate fi influentata (0,55)
Mediul dintre preparat si obiectiv este de obicei aer (n = 1)
Obiectivul cu imersie – intre obiectiv si preparat se interpune o picatura de lichid cu un indice de refractie supraunitar, cum este uleiul de cedru (n=1,51)
Apertura unghiulara maxima teoretica este 180 , deci a=90, limita teoretica maxima a sin a=1
Rezolutia maxima a microscopului optic= 0,2m
STUDIUL CELULELOR VII NECOLORATE
1.MICROSCOP CU CÂMP ÎNTUNECAT
2. M. CU CONTRAST DE FAZĂ
3. M. CU INTERFERENŢĂ
4. M. TIP NOMARSKI
5. MICROSCOPUL RANVERSAT
1.MICROSCOP CU CÂMP ÎNTUNECAT
PRINCIPIU – exista un diafragm in condensor care selecteaza doar lumina laterala iar imaginea finala este formata de catre razele reflectate de componentele din preparat
2. M. CU CONTRAST DE FAZĂ
PRINCIPIU
- lumina care trece prin medii cu indici de refractie diferiti îsi modifica directia si viteza
- micoscopul transforma aceste diferente în diferente de intensitate luminoasa
3. M. CU INTERFERENŢĂ
PRINCIPIU
- mai foloseste înca o raza de lumina care nu traverseaza tesutul analizat ,dar interfera cu raza provenita de la sursa de lumina
- ofera informatii despre densitatea obiectului analizei
4. M. TIP NOMARSKI
Un tip modificat al microscopului cu contrast de faza, oferind imagini aparent tridimensionale
5. MICROSCOPUL RANVERSAT
- pentru examinarea celulelor din flacoane sau placi Petri
- obiective sub masuta
- sursa de lumina deasupra
MICROSCOPUL CU FLOURESCENTA
LUMINISCENTA = proprietatea unor substante de a emite lumina atunci cand sunt stimulate luminos =FOTOLUMINISCENTA
FLUORESCENTA – proprietatea unei substante de a emite radiatii lumioase doar in timpul stimularii
FOSFORESCENTA –proprietatea unei substante de a emite radiatii lumioase si dupa incetarea stimularii
TERMOFLUORESCENTA = proprietatea unor substante de a emite lumina atunci cand sunt stimulate termic.
Aplicatii practice MICROSCOP CU FLOURESCENTA:
1.AUTOFLUORESCENŢA
capacitatea tesuturilor vii de a absorbi radiatii luminoase cu o anumita lungime de unda si de a o emite ulterior alte radiatii, cu o alta lungime de unda, mai mare
2. FLUORESCENTA SECUNDARA – dupa marcare cu compusi fluorescenti :
a. Acridine orange – ADN-verde/ ARN-rosu
b. Quinacrina – cromozomi = bandare
MICROSOPUL CU FLORESCENTA
IMUNOFLUORESCENŢA : punerea în evidenta a diferitilor antigeni cu ajutorul unor anticorpi specifici marcati cu un compus fluorescent IZOTIOCIANAT DE FLUORESCEINA (FITC)
-2 tipuri: directa si indirecta
IMUNOFLOUESCENTA DIRECTA=Ag + Ac specific marcat
IMUNOFLOURESCENTA INDIRECTA Ag + Ac specific + Ac sec. marcat
- are o sensibilitate mai mare ca metoda a—se foloseste in cazul in care antigenele se gasesc in cantitate mica in tesut
4.SONDE FLUORESCENTE , molecule care detecteaza concentratia i.c. a ionilor , a rad. liberi , a variatiilor de pH i.c. si isi modifica proprietatile in functie de valorilor acestora.