Testul pentru identificarea anticorpilor anti-HCV

Principiul metodeiEste un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti-HCV din ser, care ajută la

diagnosticul infecţiei cu virusul hepatitic C.Se bazează pe principiul reacţiei imunoenzimatice, determinându-se anticorpii

anti-HCV în ser. Antigenele sintetice şi recombinate HCV sunt folosite pentru identificarea specifică a anticorpilor anti-HCV cu înaltă specificitate. Testul durează 3 min. Anticorpii anti-HCV nu reacţionează cu IgM, iar IgG este marker pentru HCV.

Formarea unui spot mare (Ref. A) şi o linie cu 3 spoturi mici indică un rezultat pozitiv sau negativ. Cele 3 spoturi mici servesc ca un control intern. Spotul central mic indică un control slab pozitiv şi cele 2 spoturi laterale indică un control intens pozitiv. Acestea apar după ce reacţia imunoenzimatică este completă.

Reactivi25 de teste (fiecare plăcuţă imunocromatografică este pentru un test)2 flacoane cu soluţie conjugată de aur coloidal

Material biologicRecoltarea probelor nu necesită pacientului o pregătire specială.

Recoltarea sângelui se face într-o eprubetă fără anticoagulant. Se foloseşte numai ser.

Modul de lucru-Se aduc toţi reactivii, plăcuţa, probele şi orice alte materiale necesare la temperatura camerei înainte de efectuarea testului-Se adaugă 10 picături de soluţie conjugat în spaţiul de reacţie de pe plăcuţă-Se adaugă 30 l ser peste soluţia conjugat şi se agită-Folosind o pipetă se transferă toată soluţia din spaţiul de reacţie respectiv peste pre-filtrul care acoperă spaţiul în care se găseşte hârtia imunocromatografică-Se lasă ca probele să fie absorbite complet de pre-filtru-Se aşteaptă să apară spoturile de control înainte de a continua următoarea etapă.-Se adaugă 10 picături de soluţie conjugat peste prefiltru-Se lasă să se absoarbă toată soluţia-Se îndepărtează prefiltrul plăcuţei-Se citeşte rezultatul

Interpretarea rezultatelorNegativ: dacă numai cele 3 spoturi mici de pe linia de control sunt vizibile.

Uneori datorită concentraţiei crescute a probei poate să apară şi un spot superior liniei de control, mai puţin intens colorat

Pozitiv: spotul superior şi linia de control sunt vizibileSlab pozitiv: spotul superior apare mai puţin intens, dar este însoţit de linia de

controlNeconcludent: când apare doar spotul central şi linia de control nu apare sau când

atât spotul central cât şi linia de control nu apare. În acest caz se recomandă repetarea testului.

Testul pentru identificarea anticorpilor anti-Helicobacter pylori

Principiul testuluiEste un test vizual, rapid, pentru identificarea calitativă a IgG specifice anti-

Helicobacter pylori în serul uman. Acest kit este utilizat pentru diagnosticul infecţiei cu Helicobacter pylori la

pacienţi cu simptome gastro-intestinale. Testul este conceput pentru detectarea anticorpilor specifici anti-Helicobacter

pylori din serul uman. Folosirea corectă a testului permite detectarea infecţiei cu Helicobacter pylori la pacienţi simptomatici. Această informaţie poate fi folosită în urmărirea de către medic a evoluţiei bolii.

Testul este destinat detectării infecţiei prin interpretarea vizuală a culorii apărute în dispozitivul de testare, care este o fază solidă de tip “sandwich” colorată prin conjugare într-o reacţie imună neenzimatică. Membrana a fost acoperită cu antigen de Helicobacter pylori în zona benzii testului şi cu anticorpi de capră anti-şoarece în regiunea benzii de control. În timpul testului, serul diluat al pacientului este lăsat să reacţioneze cu conjugatul colorat (antigenul de Helicobacter pylori – coloidul de aur conjugat), care a fost precolorat în conţinutul din interiorul casetei. Amestecul va circula in membrana cromatografică prin capilaritate. Când anticorpii specifici, adică IgG sunt prezente în probă, va apărea o bandă colorată cu complexele antigen-anticorp. Pe de altă parte, o bandă colorată va apare intotdeauna în zona de control. Această bandă de control este un indicator al utilizării corecte a testului. O culoare distinctă apărută în regiunea benzii-test indică un rezultat pozitiv, iar absenţa benzii colorate în regiunea testului reprezintă un rezultat negativ

ReactiviDispozitivul testului: Fiecare casetă conţine o bandeletă de testare cu antigen

Helicobacter pylori, acoperită cu agentul colorant.Soluţia de diluţie: fosfat tamponat salin, cu Tween 20 şi conservant

Material biologicSângele recoltat prin flebotomie este colectat intr-o eprubetă fără anticoagulant.

Se lasă sângele să se coaguleze. Se separă serul prin centrifugare. Serul se păstrează la 2-80C până la 2 săptămâni. Serul poate fi păstrat la –200C până la 1 an.

Modul de lucru-Inainte de testare, plăcuţa-test şi proba de ser a pacientului se aduc la temperatura camerei (20-300C).-Se scoate plăcuţa-test din punga de protecţie -Se etichetează testul cu numele sau numărul de identificare al pacientului-Se pipetează 20 l din proba de ser în 180 l soluţie de diluţie -Se adaugă în dispozitivul de testare 3-4 picături de soluţie peste 20 l ser-Se citeşte rezultatul în 5 min

Interpretarea rezultatelor

Negativ: când apare o singură bandă roşie în zona benzii de control. Nu apare nici o bandă roşie în zona benzii de testare

Pozitiv: în afara benzii de control, apare o bandă roşie în regiunea liniei de testareNeconcludent. Cînd nu apare nici o bandă în nici una din regiuni, procedura de

testare a fost probabil nerespectată sau reactivii au fost probabil alteraţiMajoritatea subiecţilor care prezintă infecţia cu Helicobacter pylori au nivelurile

de IgG crescute. Se estimează că Helicobacter pylori este prezent la 50% din populaţia globului. Incidenţa anticorpilor anti-Helicobacter pylori este în funcţie de vârstă, rasă, zona geografică, starea clinică. O parte relativ mare de pacienţi care au valori pozitive ale nivelurilor de anticorpi sunt asimptomatici, deşi sunt infectaţi cu Helicobacter pylori. Nivelurile de anticorpi nu se corelează cu severitatea simptomelor clinice

ObservaţiiKiturile trebuie să fie păstrate la frigider (2-80C) sau la temperatura camerei (15-

300C) în punga de garanţie cu 1g deshidratant pentru păstrarea valabilităţii.Kitul este folosit numai pentru diagnosticul in vitro. A nu se folosi după data

expirării. A nu se deschide punga casetei cu teste până nu sunteţi gata să efectuaţi testul. Serurile icterice, lipemice, hemolizate sau contaminate pot furniza rezultate

eronate.

Testul imunologic pentru identificarea antigenului de Chlamydia

Principiul metodeiTestul este imunologic, calitativ, rapid, bazat pe principiul imunocromatografiei. Principiul testului constă în plasarea probei într-un tub de reacţie ce conţine

soluţia A. După 2 min se adaugă în tub soluţia de extracţie B. După ce s-a realizat extracţia, se adaugă 3 picături (aprox. 200 l) din proba obţinută în locaşul pentru probă al casetei-test. În caseta-test, în regiunea benzii de testare, membrana se acoperă în prealabil cu anticorpi monoclonali anti-antigen specific lipopolizaharidic (LPS), iar în regiunea benzii de control, cu anticorpi de capră anti-şoarece. În timpul testării, proba va reacţiona cu particulele de aur coloidal care au fost acoperite cu anticorpi monoclonali anti-Chlamydia, complexul rezultat difuzând lateral în membrană prin capilaritate. Dacă proba conţine antigenul de Chlamydia, pe membrană în regiunea bandă a testului, se va forma o bandă colorată ce conţine complexul anticorp Chlamydia-anticorp particulă de aur coloidal. Dacă antigenul de Chlamydia nu este prezent, nu se va forma nici o linie în regiunea bandă a testului. Întotdeauna, indiferent de prezenţa Chlamydiei, va apărea în regiunea de control o bandă colorată, servind drept control.

ReactiviFiecare kit conţine tot ce este necesar pentru efectuarea a 20 probe

20 casete-test/kit1 fiolă soluţie de extracţie A: sticluţă picurătoare de plastic (12 ml) cu hidroxid de sodiu 0,2 M1 fiolă soluţie de extracţie B: sticluţă picurătoare de plastic (12 ml) cu acid clorhidric 0,2 M20 aplicatoare sterile

1 fiolă control pozitiv (1 ml): Chlamzdia inactivată termic, în tampon, azidă de sodiu 0,1%1 fiolă control negativ (1 ml): Streptococ grupa B inactivat, în tampon, azidă de sodiu 0,1%20 de tuburi de extracţie1 ambalaj

Material biologicCalitatea probelor recoltate are o mare importanţă. Detectarea antigenului de

Chlamydia cere ca tehnica de recoltare prin care se obţine material celular să fie altfel decât pentru lichidele biologice (viguroasă şi suficientă).

Recoltarea probei de la nivelul zonei endocervicale-Se foloseşte aplicatorul din kit. Înainte de recoltarea probelor se înlătură excesul de mucus din zona endocervicală cu un tampon de vată-Se introduce aplicatorul steril în canalul endocervical, trecând de joncţiunea scuamocilindrică, până când cea mai mare porţiune a aplicatorului nu mai este vizibilă. Aceasta permite recoltarea de celule cilindrice sau cuboidale, care sunt principalele sedii ale Chlamydiilor în organism. -Se roteşte ferm aplicatorul 10-15 sec., apoi aplicatorul poate fi scos cu atenţie, fără a contamina proba cu celule exocervicale sau vaginale.Ca o alternativă, probele endocervicale pot fi recoltate cu ansa citologică. Nu se folosesc ansele citologice la pacientele însărcinate. După curetarea exocervixului cu aplicatorul, se introduce ansa citologică în canalul endocervical, depăşind joncţiunea scuamocilindrică.-Se lasă pe loc 2-3 sec., se roteşte ansa citologică de două ori, apoi se retrage ansa fără să se atingă pereţii vaginului.-Se introduce aplicatorul sau ansa în tubul de extracţie numai dacă testul se efectuează imediat.

Recoltarea probei de la nivelul uretrei-Se recomandă pacientului să nu urineze cu cel puţin o oră înainte de recoltarea probei. Aplicatorul sau ansa citologică se pot folosi şi pentru recoltarea probei uretrale. -Se introduce aplicatorul în uretră circa 2-4 cm. Se roteşte timp de 3-5 sec., apoi se retrage. -Se introduce aplicatorul în tubul de extracţie, dacă proba trebuie testată imediat. Dacă nu este posibilă determinarea imediat, proba pacientului poate fi introdusă într-un tub uscat pentru păstrare sau transport. Proba poate fi păstrată 4-6 ore la temperatura camerei (15-300C) sau 24-72 de ore la frigider (2-80C). Proba nu se congelează. Toate probele vor fi aduse la temperatura camerei înainte de testare.

Recoltarea probelor de urină la bărbaţiPrima urină de dimineaţă este de preferat, deoarece probabilitatea identificării

prezenţei antigenului de Chlamydia este cea mai mare.-Se recomandă pacientului să recolteze minimum 20-40 ml din prima urină din ziua analizei într-un container steril şi fără conservant. Dacă probele de urină nu pot fi testate imediat, acestea trebuie păstrate la frigider până la 24 de ore.

Modul de lucruToţi reactivii şi probele trebuie aduse la temperatura camerei înainte de începerea

analizei Probele urinare trebuie centrifugate pentru a colecta toate particulele ce pot

conţine celule cu Chlamydia-Se centrifughează urina (minimum 15 ml) timp de 10 min.-Se înlătură cu atenţie supernatantul -Se adaugă 5 picături de soluţie de extracţie A în tub şi se amestecă sedimentul cu o pipetă de unică folosinţă, până la omogenizarea suspensiei-Se lasă 2 minute la temperatura camerei-Se transferă suspensia într-un tub de extracţie folosind o pipetă de unică folosinţă-Se adaugă 5 picături de soluţie de extracţie B-Se scoate testul din folia protectoare şi se pune pe o suprafaţă plană, uscată şi curată-Se etichetează testul-Se adaugă 3 picături (200 l) din proba obţinută în caseta de testare-Se aşteaptă să apară benzile colorate.

Rezultatul testului trebuie să fie citit în 10 min după adăugarea extractului de suspensie. În funcţie de numărul de microorganisme de Chlamydia prezente pe aplicator unele rezultate pozitive pot deveni vizibile după numai 1 min. Totuşi pentru a confirma rezultatele negative este necesar un timp de reacţie de 10 min. Rezultatele nu se interpretează după 15 min.

Interpretarea rezultatelorNegativ: în regiunea test nu apare nici o bandă colorată clar şi distinct în roz.

Aceasta arată că nu a fost detectat antigenul de ChlamydiaPozitiv: în afară de banda roz din regiunea control a testului apare o altă bandă roz

clar prezentă în regiunea test. Aceasta indică că proba conţine antigen de ChlamydiaNeconcludent: dacă nu apare nici o bandă în regiunea control, analiza trebuie

repetată. Aceasta indică o posibilă eroare în efectuarea testului. În acest caz se poate recolta o probă nouă sau dacă nu a trecut mai mult de o oră de la recoltarea probei, se poate efectua încă o determinare pe aceeaşi probă.

ObservaţiiSe prelucrează toate probele chiar dacă conţin agenţi infecţioşi. După terminarea testării, se aruncă aplicatoarele numai după autoclavarea

acestora la 1200C, cel puţin 20 min. Ca o alternativă, aplicatoarele pot fi tratate cu soluţie de hipoclorit de sodiu 0,5-1,0% o oră înainte de a fi aruncate. Persoanele care efectuează testul, trebuie să poarte îmbrăcăminte de protecţie cum ar fi halat şi mănuşi de unică folosinţă în timpul recoltării şi testării probelor.

Nu se mănâncă, nu se bea, nu se fumează în aria unde sunt prelucrate probele şi reactivii kitului.

Soluţia de extracţie A conţine hidroxid de sodiu. Soluţia de extracţie B conţine acid clorhidric. Dacă una dintre cele două soluţii vine în contact cu pielea sau cu ochii, se recomandă spălarea cu multă apă. Se evită orice contact al mâinilor cu nasul sau ochii în timpul recoltării şi testării probelor.

Controlul pozitiv şi negativ din kitul de testare conţine azidă de sodiu (NaN3) 0,1%, care în contact cu plumbul şi cuprul ţevilor poate forma azidă metalică explozivă. După îndepărtarea reactivilor se spală sistemul de scurgere cu un volum mare de apă.

Se recomandă folosirea aplicatoarelor ori anselor citologice pentru obţinerea probelor endocervicale.

Nu se amestecă reactivii sau componentele din loturi sau kituri diferite. Nu se schimbă dopurile sticlelor între ele. Nu se foloseşte kitul după expirarea datei indicată pe cutie. La fel ca în cazul tuturor testelor, diagnosticul definitiv nu trebuie să se bazeze doar pe rezultatul unui singur test şi acesta trebuie coroborat cu datele clinice.

Kitul se va păstra la temperatura camerei (15-200C).

Testul pentru evidenţierea Staphylococcus aureus

Principiul metodeiPrincipala deosebire dintre Staphylococcus aureus şi alte tipuri de stafilococi este

existenţa unui factor de aglutinare. Staphylococcus aureus determină aglutinarea hematiilor învelite cu fibrinogen.

ReactiviReactiv T 2x2 mlhematii de oaie învelite cu fibrinogenReactiv C 2x2 mlhematii de oaiePicător 4 buc

Material biologicSe folosesc colonii bacteriene considerate de Staphylococcus aureus

Modul de lucru-Se agită bine reactivii-Se deschid flacoanele şi se pun picătoarele-Se pune o picătură de Reactiv T (test) şi o picătură de Reactiv C (control) la fiecare capăt al lamei de sticlă-Folosind o ansă, se amestecă coloniile bacteriene cu fiecare picătură-Se înclină uşor lamela

Interpretarea rezultatelorReacţie pozitivă: suspensia din probă aglutinează în primele 15 sec, în timp ce

suspensia de control rămâne fin dispersată: Rezultatul este Staphylococcus aureus prezentReacţie negativă: atât suspensia din probă cât şi cea de control rămân fin

dispersate, chiar după 1 min. Rezultatul este Staphylococcus aureus absent.Reacţia echivocă: atât suspensia din probă cât şi cea de control au semne de

aglutinare. În acest caz trebuie făcute testele clasice pentru identificare

ObservaţiiReactivii nedesfăcuţi sunt stabili la 2-80C până la data de expirare tipărită pe cutie.

Testul imunochimic pentru detectarea sângelui ocult în probele de fecale

Principiul metodeiHemoglobina umană din probele de fecale reacţionează cu un amestec de

anticorpi monoclonali/policlonali. În caz de reacţie pozitivă apar două linii roz în zonele T şi C. Dacă nu există hemoglobină apare o singură linie vizibilă în zona de control C

Sensibilitatea testului: 0,03 mg Hb/g de materii fecale, 0,2 mg Hb/ml de soluţie.

ReactiviStripsuri pentru test 5 buc.Tuburi colectoare (tampon) 5 buc.

Materialul biologicRecoltarea probelor

-Se colectează materii fecale într-un recipient curat şi uscat-Se deşurubează capacul tubului colector şi se scoate beţişorul aplicator-Se recoltează 3 probe de materii fecale folosind beţişorul aplicator-Se înlătură excesul de probă de pe beţişorul aplicator, ştergându-l cu un material absorbant-Se introduce beţişorul aplicator înapoi în tubul colector.Proba astfel pregătită poate fi păstrată la 20-300C o săptămână

Modul de lucru-Se scoate strip-ul de test din ambalaj-Se amestecă bine proba în tubul colector -Se taie vârful tubului colector şi se aruncă primele 2-3 picături de probă-Se poziţionează vertical tubul colector şi se dispersează 4 picături pe suprafaţa marcată S-Se aşteaptă 5 min. şi se citeşte rezultatul

Interpretarea rezultatelorPozitiv: apar linii colorate în zonele T (test) şi C (control)Negativ: o linie colorată este vizibilă numai în zona C (control)Neconcludent: nu există linie colorată nici în zona T nici în zona S. Testul trebuie

repetat

Observaţii-Pentru obţinerea rezultatului real nu sunt necesare restricţii dietetice-Probele nu trebuie colectate în timpul ciclului menstrual sau dacă pacientul suferă de hemoroizi sau hematurie (rezultatul apare fals-pozitiv)-Tratamentul cu medicamente care pot cauza iritaţii gastro-intestinale trebuie întrerupt cu cel puţin 2 zile înainte de recoltarea probei-Testul este specific pentru hemoglobina umană. Până la 500 g/ml nu s-au observat interferenţe cu hemoglobina de pasăre, vacă, porc, capră, cal, iepure.

Testul RPR carbon

Principiul metodeiReactivul RPR Carbon este o suspensie stabilizată cu cristale de colesterol

marcate cu cardiolipin lecitină şi particule de mangal (pentru îmbunătăţirea interpretării rezultatelor). Reactivul are rolul de antigen faţă de anticorpii prezenţi în organismul persoanelor infectate cu Treponema pallidum.

Reactivi1 flacon cu reactiv latex de 3 ml1 flacon cu control pozitiv de 1 ml1 flacon cu control negativ de 1 ml1 set de plăcuţe pe care se efectuează testul1 flacon pipeta pentru reactivul latex

Material biologicSe foloseşte ser clar, obţinut prin centrifugarea sângelui recoltat fără

anticoagulant. Probele pot fi păstrate la 2-80C maximum 48 de ore înainte de efectuarea testului. Pentru o perioadă mai lungă, serul trebuie păstrat congelat.

Serurile hemolizate, lipemice sau contaminate pot da erori la interpretarea rezultatelor.

Modul de lucru-Se aduc reactivii şi probele la temperatura camerei, înainte de folosire-Se agită uşor reactivul pentru dispersarea particulelor-Se pune câte o picătură din controlul pozitiv şi negativ în câte un cerculeţ al plăcuţei-Se pune câte o picătură (50 l) de ser nediluat din fiecare probă în câte unul din cercurile plăcuţei-Se adaugă o picătură de reactiv RPR Carbon, ori se pipetează 20 l de reactiv în fiecare cerculeţ folosit-Se amestecă ambele picături, fără să se disperseze pe toată suprafaţa cercului-Se roteşte plăcuţa manual ori cu un rotor mecanic de 80-100 rpm, 8 min. -Se citeşte prezenţa aglutinării vizibile cu ochiul liber. O aglutinare nespecifică poate apare dacă testul este citit mai târziu de 8 min.Testul semicantitativ-Se poate efectua o diluţie succesivă cu soluţie salină izotonică-Titrul serului este diluţia cea mai mare care produce reacţia pozitivă

Interpretarea rezultatuluiRezultat pozitiv: prezenţa unor nori cenuşii pe albul plăcuţeiRezultat negativ: lipsa unei reacţii de floculare uniforme şi a unei culori cenuşii Sifilisul este o boală cu transmitere sexuală, cauzată de Treponema pallidum.

ObservaţiiReactivii conţin azidă de sodiu ce se poate combina cu Pb şi Cu putând deveni

explozibili.

Controlul pozitiv şi negativ din ser uman a fost testat folosind metoda licenţiată FDA şi s-a demonstrat că nu reacţionează cu anticorpii faţă AgHBs şi HIV. Oricum, toate probele umane pot fi considerate potenţial infectate.

Se pune reactivul de RPR Carbon în sticluţa specială înainte de folosire. Acesta trebuie foarte bine omogenizat, reactivul se agită bine înainte de folosire. Nu se folosesc decât picăturile care sunt puse perpendicular pe suprafaţa plăcuţei. Dacă nu se foloseşte sticluţa picurătoare, atunci se foloseşte pipeta automată pentru 20 l. Sensibilitatea acestui test depinde de volumul picăturii. Reactivul şi controalele se păstrează la 2-80C.

Testul pentru depistarea precoce a sarcinii

Principiul metodeiTestul hCG (Gonadotrofina corionică umană) este un test calitativ, o reacţie

imună în două straturi pentru determinarea hCG în urină. Membrana a fost acoprită cu anticorpi de capră anti-hCG în regiunea benzii de test şi anticorpi de capră anti-şoarece în regiunea benzii de control. În timpul testului urina pacientei este lăsată să reacţioneze cu anticorpii monoclonali anti-hCG coloraţi cu coloidul de aur aplicat pe bandeleta de test. Mixtura va migra în membrană prin capilaritate. Absenţa benzii colorate în regiunea benzii testului indică rezultatul negativ. Pentru controlul procedurii în regiunea de control va aparea întotdeauna o bandă colorată în prezenţa hCG în proba de urină.

ReactiviBandeletele de testare: bandeletă acoperită cu anticorpi anti-hCG de capră şi

anticorpi monoclonali anti-hCG de şoarece în coloid de aur uscat.

Material biologicRecoltarea probeiOrice probă de urină este bună pentru testare, dar prima urină de dimineaţă este

cea mai indicată, deoarece conţine cele mai mari concentraţii de hCG. Probele de urină pot fi recoltate într-un recipient curat, de plastic sau de sticlă.

Dacă probele nu pot fi prelucrate imediat, acestea pot fi păstrate la frigider (2-80C) până la 72 de ore.Nu este necesar să adăugăm prezervant probei de urină. Proba de urină trebuie lăsată la temperatura camerei înainte de efectuarea reacţiei.

Probele de urină tulbure trebuie centrifugate sau filtrate înainte de folosire. Probele cu precipitate vizibile trebuie lăsate să se decanteze şi pentru testare se va folosi numai supernatantul clar.

Modul de lucru-Se scoate bandeleta de testare din ambalaj-Se introduce bandeleta în urină, cu vârful săgeţii orientat spre urină. Nu se depăşeşte linia max (maximum)-Se poate lăsa bandeleta în urină sau se poate să o scoatem după min 3 sec şi să o lăsăm pe o suprafaţă curată, uscată, neabsorbantă (ex: marginea recipientului cu urină)

-Se aşteaptă să apară banda colorată. Dependent de concentraţia de hCG din proba de urină, rezultate pozitive pot fi obsevate în 10-30 sec. Pentru confirmarea rezultatului negativ sunt necesare 5 min. pentru reacţie.Nu se interpretează rezultatele după 30 min.

Interpretarea rezultatelorNegativ: doar o singură bandă colorată apărută în zona de control. Nu apare nici o

bandă colorată în regiunea de testarePozitiv: benzi distincte colorate apar în regiunea de control şi în regiunea de

testare. Intensitatea culorii în regiunea de testare poate fi variabilă.Incorect: nici o bandă vizibilă sau nici o bandă vizibilă în regiunea de testare. Se

repetă testul

ObservaţiiKitul de testare poate fi păstrat la temperatura camerei (20-300C) într-un container

uscat până la data expirării. Bandeletele testului trebuie păstrate departe de umezeală, căldură şi razele soarelui. Capacul containerului de păstrare trebuie să conţină desicant pentru păstrarea bandeletelor uscate. Imediat după utilizare se repune cu grijă capacul.

În anumite situaţii, altele decât sarcina, incluzând boala trofoblastică şi neoplasmele netrofoblastice, se pot produce niveluri ridicate de hCG. Aceste diagnostice trebuie luate în considerare dacă tabloul clinic le sugerează. Dacă probele de urină sunt prea diluate, pot să nu conţină niveluri semnificative de hCG. Dacă se menţine suspiciunea de sarcină trebuie repetat testul la 48-72 ore. Ca pentru toate testele diagnostice, un diagnostic clinic definitiv nu se poate baza pe un singur test şi trebuie pus numai de către medic după evaluarea datelor clinice şi de laborator.

Testul FSH pentru diagnosticul menopauzei

Principiul metodeiTestul FSH pentru diagnosticul menopauzei este un test calitativ. o analiză

imunologică de tip sandwich prin care se determină concentraţia hormonului foliculo-stimulant (FSH). Pe linia de test a membranei au fost fixaţi anticorpi anti-FSH, pe linia de control s-au fixat anticorpi de capră anti.FSH de măgar. În timpul testului, FSH din urina de la pacientă reacţionează cu conjugatul colorat în auriu (coloid de anticorp monoclonal anti-FSH) care se află sub formă preuscată pe banda de test. Amestecul migrează spre partea superioară a membranei cromatografice prin capilaritate. Dacă proba testată conţine FSH (în concentraţie semnificativă) va apărea în regiunea de test a membranei o linie colorată şi care reprezintă complexul conjugat anticorp FSH-FSH. În acelaţi timp va apărea o linie de culoare slabă în regiunea de control a membranei. Această linie de control reprezintă o referinţă a intensităţii culorii, echivalentă cu aprox. 25 mui/ml FSH. Dacă intensitatea liniei de test este egală sau mai puternică decât cea a liniei de control, atunci rezultatul este pozitiv

Reactivi

20 de casete de test cu membrana marcată cu anticorp de captură anti-FSH şi anticorp monoclonal anti-FSH colorat

Material biologicProba de urină trebuie să fie recoltată într-un vas curat şi uscat. Poate fi folosită

urina din orice moment al zilei, totuşi se recomandă urina de dimineaţă, deoarece conţine concentraţia maximă diurnă de FSH. Probele de urină pot fi păstrate la frigider (2-80C) cel mult 72 ore înaintea efectuării testului. Dacă probele au fost ţinute la frigider înainte de a efectua testul, acestea vor fi aduse la temperatura camerei.

Acele probe de urină unde se observă o precipitare, se filtrează sau se centrifughează sau se lasă să se sedimenteze până se vor obţine eşantioane clare care vor fi testate.

Modul de lucru-Înainte de efectuarea testului, casetele de test, probele pacientelor, controalele şi probele de referinţă trebuie să fie aduse la temperatura camerei (20-300C).-Se scoate caseta de test din punga de protecţie (adusă în prealabil la temperatura camerei, pentru a evita formarea condensului pe membrana test în momentul deschiderii)-Se va înscrie pe fiecare casetă de test numărul de identificare al pacientului sau al controalelor-Se îndepărtează capacul de plastic roz pentru a avea liber vârful absorbant. -Se apasă cu degetul mare pe caseta de test, astfel încât vârful absorbant să fie direcţionat în jos.-Se introduce vârful absorbant în urină timp de 10 sec.-Se reacoperă caseta cu capacul roz şi se lasă pe o suprafaţă plană cu fereastra de test în sus şi se aşteaptă până se obţine rezultatul-Se citeşte rezultatul după minimum 3 min. (max. 10 min)

Interpretarea rezultatelorNegativ: intensitatea culorii liniei de test este mai mică decât cea a liniei de

controlPozitiv: intensitatea culorii liniei de test este egală sau mai mare decât a liniei de

controlDacă nici linia de test, nici linia de control nu apar pe membrana casetei, atunci se

elimină testul respectiv. Acest lucru s-a datorat fie unei proceduri neadecvate în timpul etapelor de testare, fir deteriorării reactivilor casetei. Se recomandă a se repeta testul 5-7 zile mai târziu (preferabil de recoltat urina la aceeaşi oră) pentru a determina dacă nivelul de FSH este încă ridicat

ObservaţiiKitul se păstrează la frigider (2-80C) sau la temperatura camerei (până la 300C) în

punga de plastic cu desicant.

Testul LH de ovulaţie

Principiul Testul este rapid şi uşor de folosit. Testul este calitativ, putând preciza când are

loc o secreţie de hormon luteinizant şi când este probabilă ovulaţia. Pentru început trebuie determinată durata ciclului menstrual. Aceasta reprezintă numărul de zile cuprins între prima zi a ciclului şi ziua premergătoare apariţiei ciclului. Dacă ciclul este mai scurt de 21 zile ori mai lung de 38 zile, trebuie consultat medicul.. Dacă nu se cunoaşte durata ciclului, se începe testarea din a 11-a zi a ciclului, făcând o medie a celor 28 de zile. Se efectuează un test la fiecare a 5-a zi a perioadei sau după ce secreţia de LH a fost detectată

Material biologicNu se foloseşte prima urină de dimineaţă, deoarece LH este sintetizat în cursul

nopţii şi va apare în urină mai târziu, în timpul zilei. Perioada cea mai bună pentru colectarea urinei este între orele 10.00-18.00. Se colectează urina la aceeeaşi oră în fiecare zi.

Modul de lucru-Se lasă casetele test, proba de urină şi soluţia de control să atingă temperatura camerei (18-300C)-Se extrage urina cu ajutorul unui picurător pentru urină-Se adaugă 5 picături de urină în acest loc-Se lasă lichidul să migreze -Se aşteaptă să se coloreze şi să apară benzileDepinzând de concentraţia de LH, rezultatele pozitive pot fi observate după aprox 40 sec. Confirmarea rezultatelor negative este după ce a avut loc reacţia completă (10 min)

Interpretarea rezultatelorNu se secretă LH: apare o singură culoare în regiunea de control sau banda este

strălucitoareSecreţie de LH: dacă apar 2 benzi colorate vizibile şi banda test este egală ca

intensitate cu banda de control, atubnci cu siguranţă ovulaţia va avea loc în următoarele 24-48 ore.

Test neconcludent: nu este nici o bandă vizibilă. Se recomandă repetarea testului.

Durata 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38ciclului (zile)

Testul trebuie 6 6 7 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 efectuat în ziua

Determinarea crioproteinelor

PrincipiulIncubarea serului la 40C timp de 24 ore, după care se urmăreşte prezenţa unui

precipitat în ser (crioproteine). Serul cu crioprecipitat se centrifughează, apoi sedimentul este spălat la rce de mai multe ori, solubilizat la 370C, după care este testat în dubla difuzie cu antiseruri monospecifice anti-imunoglobuline.

Prezenţa crioproteinelor reprezintă un semn de disproteinemie ce se manifestă în anumite situaţii patologice (ex. afecţiuni autoimune).