Proceduri coloană de cromatografie

Coloane de cromatografie pot fi mari sau mici, în funcție de cantitatea de material care

trebuie să fie încărcat pe coloană. In poza de mai jos sunt trei coloane de sticlă, din care două

sunt utilizate în laboratoarele didactice organice chimie la CU.

Coloane

Coloana pipetă Pasteur de pe stânga este utilizată pentru gravitate microscară și microscara

procedurilor rapidă cromatografie pe (aproximativ 10-125 mg de material); aceste proceduri

de obicei, nu necesită un mijloc de control al fluxului de solvent indusa gravitațional prin

coloană. În Chimie organica laboratoare didactice de la CU, coloana cel mai frecvent folosit

este pipeta Pasteur. Ei lucrează bine în cadrul procedurilor de flash cromatografie în coloană

microscara pentru că un bec pipetă se potrivește convenabil pe partea de sus a le servi drept o

sursă de aer sub presiune (în cazul în care becul este stors). Procedurile microscară sunt

folosite la CU Boulder ori de câte ori posibil pentru a reduce la produse chimice de deșeuri.

Coloana din mijloc este utilizat pentru cromatografia pe coloană gravitate în câteva de cursuri

de laborator majors chimie "(chim 3361 și 3381). Notă bucata de tub flexibil care a fost

adăugat la partea de jos a column.To control al fluxului de solvent, o clemă de strângere va fi

pus pe tubulatura flexibilă în partea de jos. Această coloană este fabricat din 10 ml pipetă de

sticlă de unică folosință și pot separa aproximativ o 1 g de material.

Coloana din dreapta este singurul care este de fapt fabricat ca o coloană cromatografică. Notă

robinetul în partea de jos. Aceasta este pentru a controla fluxul de solvent prin coloană,

importantă pentru aplicațiile cromatografiei pe coloană cu gravitate. Coloane cromatografice

mult mai mare sunt disponibile decât acest lucru. Dimensiunea angajat depinde de cantitatea

de material care trebuie separat. Coloane Flash scară largă arata aceasta coloană, dar au o

conexiune standard de conicitate în partea de sus, astfel încât acestea pot fi conectate la o

sursă de aer sub presiune.

Procedura de microscară Flash coloana de cromatografie

Cromatografie rapidă microscară este metoda principala utilizată în organice laboratoarele

didactice chimie, pentru că este atât de ușor și ecologic. Metoda este limitată doar de faptul că

se poate separa numai cantități mici de probă. Acesta funcționează cel mai bine pentru 25 mg

sume, desi deja este împins pentru a separa amestecurile 125 mg în cazul în care TLC Rf anii

ale componentelor amestecului diferă cu cel puțin 0,20. In cromatografie rapidă microscara,

coloana nu are nevoie de nici o clemă de strângere sau un robinet în partea de jos a coloanei

pentru a controla fluxul, nici nu nevoie de conexiuni cu aer sub presiune în partea de sus a

coloanei. In schimb, fluxurile de solvenți foarte încet prin coloană datorită gravitației până

când se aplică o presiune a aerului în partea superioară a coloanei cu un bec obișnuit Pasteur

pipetă.

Pasul 1: Pregătirea coloana

Conectați o pipetă Pasteur cu o cantitate mică de bumbac; utilizați un băț de lemn aplicator

să-l indeasa ușor. Aveți grijă să nu folosiți nici prea mult de bumbac sau ambalaj prea strâns.

Trebuie doar suficient pentru a preveni adsorbant de la scurgerea.

Adăugați uscat adsorbant silicagel, 230-400 mesh. De obicei, vasul este etichetat "pentru

cromatografie rapidă." O modalitate de a umple coloana este să-l inversa în borcan de

silicagel și lingura l ...

... Apoi se tasează înainte de pune mâna mai mult afară.

Un alt mod de a umple coloana este de a turna gel în coloană folosind un pahar de 10 ml.

Indiferent de metoda se utilizează pentru a umple coloana, trebuie să-l indeasa pe partea de

sus bancă a ambala silicagel. Puteți folosi, de asemenea, un bec pipetă pentru a forța aerul în

coloană și ambalaj silicagel.

Când ambalate în mod corespunzător, silicagelul umple coloana chiar sub liniuță de pe

pipeta. Acest lucru lasă un spațiu de 4-5 cm pe partea de sus a adsorbantului pentru adăugarea

de solvent. Fixați coloana umplută în siguranță, la un stand inel cu ajutorul unei cleme trei

componente mici.

Etapa 2: Pre-elua coloana

Adăugați hexan (sau alt solvent, conform specificațiilor procedura) în partea de sus a gelului

de silice. Solventul curge încet coloanei; pe coloana de mai sus, acesta a curs în jos până la

punctul marcat printr-o săgeată.

Monitorizarea nivelului de solvent, atât pe măsură ce curge prin gel de silice și nivelul din

partea de sus. Dacă nu sunteți în grabă, puteți lăsa meniurile de nivel superior de gravitate,

dar asigurați-vă că nu merge sub partea de sus a silicei. Din nou, săgeata marchează cât de

departe solventul a curs pe coloana.

Puteți accelera procesul prin utilizarea unui bec pipetă pentru a forța solventul prin gel de

silice. Publicați becul pipetei pe partea de sus a coloanei, stoarce becul, iar apoi scoateți becul

în timp ce acesta este încă stors. Trebuie să fii atent să nu pentru a permite bec pipetă pentru a

extinde înainte de ao scoate din coloană, sau va desena gel de silice solvent și în bec.

Când nivelul de solvent de jos este în partea de jos a coloanei, procesul de pre-eluție este

finalizată și coloana este gata să se încarce.

Daca nu sunt gata pentru a încărca proba ta pe coloană, este bine să părăsească coloana la

acest moment. Doar asigurați-vă că nu merge uscat - să păstreze nivelul de solvent superior

deasupra partea de sus a silice (așa cum se arată în imagine din stânga), prin adăugarea de

solvent, dacă este necesar.

Etapa 3: Se încarcă proba pe coloana de silicagel

Două metode diferite sunt folosite pentru a încărca coloana: umed și uscat. In metoda umedă,

proba de purificat se dizolvă într-o cantitate mică de solvent, cum ar fi hexan, acetonă, sau alt

solvent. Această soluție este încărcat pe coloană. Uneori solventul ales este mai polar decât

solvenții de eluare. În acest caz, dacă utilizați metoda umedă de coloană încărcare, este foarte

important să utilizați doar câteva picături de solvent pentru a încărca proba. Dacă utilizați

prea mult solvent, solventul de încărcare va interfera cu eluare și, prin urmare, separarea

amestecului. În astfel de cazuri, se recomandă metoda uscată din coloana încărcare.

Coloana din stânga se incarca prin metoda umedă.

Odată ce proba este în coloană, solvent de eluție proaspăt se adaugă în partea de sus și sunteți

gata pentru a începe procesul de eluare.

Pentru metoda uscată, în primul rând se dizolvă proba de analizat în cantitatea minimă de

solvent și se adaugă aproximativ 100 mg de silicagel.

Se agită amestecul până se evaporă solventul și doar o pulbere uscată rămâne.

Publicați pulberea uscată pe o bucată de hârtie pliată cântărire ...

... Și se transferă la partea de sus a coloanei pregătit.

Adaugă solvent de eluție proaspăt la început. Acum sunteți gata pentru a începe procesul de

eluare.

Etapa 4: Se eludează coloana

Forța solventul prin coloană apăsând pe partea de sus a pipeta Pasteur cu un bec pipetă.

Vigoare numai solventul la foarte de sus a silicei: nu lăsați siliciul merge uscat. Adaugă

solvent proaspăt ca este necesar.

Benzile colorate se va deplasa în jos a coloanei ca compusul este eluat.

De îndată ce compusul colorat începe să elua, paharul de colectare este schimbat. Procesul

este complicat dacă compusul nu este colorat. În astfel de experimente, fracțiuni de

dimensiuni egale sunt colectate succesiv și cu grijă marcat pentru analize ulterioare.

Etapa 5 (Opțional): Elute coloana cu al doilea solvent de eluție

Dacă se separă un amestec de unul sau mai mulți compuși, în acest moment ai putea schimba

solvent de eluție la un sistem mai polar, determinată anterior prin TLC. Eluarea s-ar proceda

ca la pasul 4.

Pasul 6: Analiza fracțiunile

În cazul în care fracțiunile sunt colorate, puteți combina pur și simplu ca-colorate fracțiunile,

deși TLC înainte este, de obicei recomandabil combinație. Dacă fracțiile nu sunt colorate,

acestea sunt analizate prin TLC (de obicei). Odată ce compoziția de fiecare fracțiune este

cunoscută, fracțiunile conținând compusul dorit (e) sunt combinate.

Procedura de Gravity coloana de cromatografie

Coloane Gravity sunt utilizate numai în majors cursuri de laborator organic la CU Boulder

(Chem 3361/3381). Coloane de greutate mult mai lent pentru a rula decât coloane Flash

microscara. De asemenea, ele sunt mult mai greu de a ambala cu adsorbant. Există două

metode comune de împachetare o coloană gravitate: metoda suspensie și metoda ambalaj

uscat. Ambele aceste proceduri au fost scrise pentru coloane de mijloc de mai sus; va trebui

să varieze cantitatile dacă utilizați o coloană diferită.

În metoda suspensie de umplutura coloanei, se amestecă adsorbantului cu solventul și apoi se

toarnă această pastă în coloană pregătit. Natura suspensiei este un pic diferit, în funcție de

dacă utilizați silicagel sau alumină; unele suspensii sunt mai ușor de a lucra cu decât altele.

Această procedură a fost scris pentru reziduuri de alumină. Avantajul metodelor tulbureală

este eliminarea bulelor de aer de la formarea în coloana în care pachete.

Postați o bucată de vată de sticlă în partea de jos a coloanei, iar presați ușor vata de sticlă în

jos cu o baghetă de sticlă. Atașați coloana la un stand inel și asigurați-vă că coloana este fixat

în siguranță, în poziție verticală. Adăugați o clemă de strângere în partea de jos a coloanei și

închide clema. Se umple coloana aproximativ jumătate de drum cu un solvent nepolar, cum ar

fi hexan. Se cântăresc 8 g de alumină într-un pahar. 15 ml de hexan într-un balon Erlenmeyer

de 125 ml și se adaugă lent pulbere de alumină, un pic la un moment dat, în timp ce vartej.

Utilizați o pipetă Pasteur a amesteca suspensia, apoi pipeta repede suspensia pe coloana

(puteti turna în schimb, dacă preferați). Publicați un vas Erlenmeyer în coloana, deschideți

clema de strângere, și lăsați lichidul să se scurgă în ea. Deplasare pentru a transfera suspensia

în coloană până la adăugarea tuturor alumina. Adăugați mai multe hexani ca este necesar;

hexanii colectate în vasul Erlenmeyer poate fi re-utilizat pentru a adăuga mai mult de alumină

în coloană. Când ați terminat de ambalare, se scurge excesul de solvent până când ajunge

doar la nivelul superior al aluminei. Închideți clema de strângere. Coloană dvs. este acum

ambalat și gata de utilizare. Uneori se adaugă o cantitate mică de nisip în partea de sus a

coloanei pentru a împiedica deranjat când este adăugat solvent proaspăt.

Metoda uscat-pack este mai ușor, dar poate duce la bule în coloana. Obțineți o coloană goală,

conectați-l cu o mică bucată de vată de sticlă, și aplică o pinchclamp la partea de jos a

coloanei. Fixați coloana în poziție verticală, închideți pinchclamp, și umple coloana cu

solvent. Folosind o pâlnie uscat, se presară 8 g de alumină în solvent, și se lasă solventul să se

scurgă din coloană pentru a preveni debordant. Să sedimenteze alumină și apăsați ușor

coloana, astfel încât alumina va ambalaj bine în coloană. Se scurge solventul până când

nivelul de solvent este doar chiar cu suprafața aluminei.

Încărcarea și cromatografice gravitație eluarea coloane: Proba de analizat se dizolvă într-o

cantitate foarte mică de solvent și se adaugă la partea superioară a coloanei. Clema pinch este

deschisă și solventul este lăsat să se scurgă doar la partea superioară a coloanei. Se adaugă o

cantitate mică de solvent de eluție și se lasă să se scurgă până când amestecul este un pic în

adsorbant, apoi coloana este umplut în partea de sus cu solvent de eluare. Coloana este acum

gata pentru a rula - continua adăugarea de solvent în partea de sus și colectarea fracțiilor în

partea de jos până compușilor elua în partea de jos. Dacă este cazul, modificați eluare

solventul la un solvent mai polar în timpul procesului de eluare. Nu lăsați niciodată meniurile

nivel de solvent sub partea de sus a adsorbantului. Procesul este întreruptă atunci când

compusul (e) dorit este (sunt) din coloană.