Ecologia Patrogenilor vlad

7/26/2019 Ecologia Patrogenilor vlad

1/11

ECOLOGIA PATOGENILOR AGROECOSISTEMELOR

Fitopatogenii, mai ales n zonele temperate, au un ciclu de via discontinuu, o faz cu activitateintens este succedat de o laten n care, datorit condiiilor neprielnice, i reduc total activitatea

metabolic sau se transform n diferite forme de rezisten pn la apariia condiiilor favorabile.Factorii ecologici care acioneaz asupra fitopatogenilor sunt:

- nutriia mineral a plantelor (metabolismului unei plante poate fi modificat ca urmare a

influenei ngrmintelor i microelementelor!

-p"-ul!- temperatura!- umiditatea etc.

1. INFLUENA SUBSTRATULUI DE CRETERE ASUPRA UNOR AGENIFITOPATOGENI

LUCRAREA PRACTIC NR.1:#entru a se pune n eviden influena substratului nutritiv asupracreterii i dezvoltrii la ciupercile fitopatogene, va fi montat o e$perien, dup cum urmeaz:

%te un izolat fungic apartinnd speciilor Alternaria ...................i Fusariu s!lani.va fi cultivat pe mai multe medii de cultur cu compoziie diferit (tabelul &.

'abelul &C!"!#i$ia e%iil!r %e &ultur' &e "!t (i utili#ate "entru a %eterina in(luen$a su)stratului %e

&re*tere asu"ra un!r a+en$i (it!"at!+enir.

crt.

)ediul de cultur %ompoziie

mediu de cultur

#t. &**ml de mediu

& #+ g #+

&***ml ap

/ )al-gar () /*g e$tract de

mal

/*g agar&***ml ap

p-gar ( &0-/0g agar &***ml ap de

robinet

1 %orn )eal gar (%) &2g %)

&***ml ap

0 3ima 4ean gar (34 /g 3)

&***ml ap

Metod, in&u)are "e %i(erite e%ii %e &ultur' -in "un&t &entralM!% %e lu&ru: +up topire mediile de cultur se repartizeaz n vase #etri (diametrul 5 0

cm, n medie 0ml6 vas. 7asele #etri, astfel pregtite, sunt nsmnate central cu inoculul

patogen, reprezentat de discuri miceliene cu diametrul 5 8mm, prelevate de la periferia culturilorpure, n vrst de o sptmn, i apoi sunt introduse n termostat la /1*%.

Aten$ie/+iscul micelian va fi depus pe mediul de cultura cu partea cu miceliu n 9os.nfluena substratului de cretere asupra creterii miceliene a izolatului patogen testat se

estimeaz n comparaie cu un martor stabilit la nceperea e$perienei (mediu #+.;bservaiile se efectueaz la , 0 i 2 zile de la nsmnare, e$periena se poate considera

nc


2/11

2 izolate , 5 medii , in 30 de vase petri sterile

%alculati volumul din fiecare mediu de cultura ce trebuie preparat pentru a se monta

aceasta e$perienta (cu o mar9a de &*> n plus=

PDA: 2 izolate x 1mediu x 3 repetitii = 30 ml pda

Malt Aar : 2 izolate x 1 mediu x 3 repetitii = 30 ml ! M A"

Apa Aar: 2 izolate x 1 mediu x 3 repetitii = 30 ml !A A"

#orn Meal Aar : 2 izolate x 1 mediu x 3 repetitii = 30 ml !#MA"

$ima %ean Aar : 2 izolate x 1 mediu x 3 repetitii = 30 ml !$%A"

Observaii, creterea micelian (diametrul coloniei! morfologia coloniei (miceliu aerian6ras!prezen6absen de spori...etc

Rezutate,cretere micelian, rata de cretere6ziInter"retarea re#ultatel!r

nfluena compoziei mediului de cultur asupra creterii i dezvoltrii agenilor patogenise evalueaz prin msurarea creterii miceliene (diametrul coloniilor. +iametrele medii ale celor

repetiii sunt comparate cu cele ale martorului (un mediu standard, calculndu-se astfelprocentul de in


3/11

E8e"lu %e &al&ul,

;. INFLUENA TEMPERATURII ASUPRA CRETERII UNOR AGENIFITOPATOGENI

LUCRAREA PRACTIC NR.!: #entru a se pune n eviden influena temperaturii asupracreterii i dezvoltrii la ciupercile fitopatogene, va fi montat o e$perien, dup cum urmeaz:

%te un izolat fungic apartinnd speciilor .................................................... i...................................................va fi cultivat pe mediile de cultur (#+, ), , %), n condiii

diferite de temperatur (respectiv la *%, &0*% i /1*%.

Metod, in&u)are "e %i(erite e%ii %e &ultur' -in "un&t &entral *i


4/11

#rin urmare, pentru e$periena & i / vom pregti cte

Observaii, creterea micelian (diametrul coloniei! morfologia coloniei (miceliu aerian6ras!prezen6absen de spori...etc

Rezutate,cretere micelian, rata de cretere6zi

Inter"retarea re#ultatel!r

nfluena compoziei mediului de cultur asupra creterii i dezvoltrii agenilor patogenise evalueaz prin msurarea creterii miceliene (diametrul coloniilor. +iametrele medii ale celor

repetiii sunt comparate cu cele ale martorului (un mediu standard la o temperatur de /1 *%,calculndu-se astfel procentul de in


5/11

STRESSUL OSMOTIC I STRESSUL O=IDATI> LA CIUPERCILEFITOPATOGENE

n timpul ciclului lor evolutiv, ciupercile fitopatogene sunt confruntate cu diferite tipuri de stress,ca de e$emplu, stressul osmotic i stressul o$idativ i pentru a coloniza cu succes planta gazd ele trebuies-i dezvolte rspunsuri de adaptare eficace.

?tressul osmotic este, de obicei, indus de mediul e$tern sau de substane $enobiote n timp cestressul o$idativ este generat n principal n timpul interaciunii patogen-plant gazd. %a rspuns la

aceste dou tipuri de stress, ciupercile dezvolt mecanisme de protecie care implic, n principal, sintezai acumularea de polioli (alcooli, precum glicerolul. #e de o parte, glicerolul constituie un osmoprotector

implicat n rspunsul ciupercilor la stressul osmotic.

?. INFLUENA STRESSULUI OSMOTIC ASUPRA CRETERII MICELIENE AUNOR AGENI FITOPATOGENI

LUCRAREA PRACTIC NR.":#entru a se pune n eviden influena stressului osmotic asupracreterii i dezvoltrii la ciupercile fitopatogene, va fi montat o e$perien, dup cum urmeaz:

%te un izolat fungic apartinnd speciilorAlternaria sp. i%otr(tis )inereava fi cultivat pe mediulde cultur #+ n care se include o substan test generatoare de stress osmotic, la o temperatur optim

de cretere de /1*%.

Mole)ule test eneratoare de stress osmoti): a%l, sorbitol

#on)entra*ii test: a%l: / @ 1 A>B @ solutie stoc &*>

?orbitol: *.1 -*.8 A)B @ solutie stoc 0)

Metod, in&lu%erea !le&ulel!r test+enerat!are %e stress !s!ti&


6/11

%alculati volumul din mediu de cultura (#+ ce trebuie preparat pentru a se montaaceasta e$perienta, cu o mar9a de &*> n plus=

nu se uita varianta martor cu repetiii pentru fiecare izolat fungic, respectiv C vase pt. /izolate.

Dfectul moleculelor test generatoare de stress osmotic asupra creterii miceliene aizolatului patogen testat se estimeaz n comparaie cu un martor cultivat pe mediu #+.

;bservaiile se efectueaz la , 0 i 2 zile de la nsmnare, e$periena se poate consideranci 4 C( 8 >(D$. %oncentraia soluiei stoc este &*>, concentraia ce urmeaz a fi testat este />, iar

volumul de mediu ce trebuie obinut este de * ml.

&*> $ 7i 5 /> $ *ml

7i 5 /> $ *ml 6 &*> 5 Cml n conc. &*> va fi ncorporat n /1 ml mediu de cultur #+7 mediu de cultur 57f - 7 molecul test (Cml 5 *ml @ Cml 5 /1 ml

TABEL CENTRALI@ATOR

'ulpinapatogen

)oleculatest

%onc.?ol.stoc

%oncentraia 7ol.ecesar(ml

r.vase#etri

)ediu)ml

Ater#aria$otr%tis

a%l &*> /> Cml C /1

1> ........ ........ ........

T!tal lNaCl

19 5 .......... 5 5

?orbitol 0) *,1) /,1ml C /2,C


7/11

*,8) 1,8ml C /0,/

T!tal ls!r)it!l

M 5 :;l 5 5

Inter"retarea re#ultatel!r

ciunea moleculelor test generatoare de stres osmotic se evalueaz prin msurarea

creterii miceliene (diametrul coloniilor. +iametrele medii ale celor repetiii sunt comparate cucele ale martorului, calculndu-se astfel procentul de in


8/11

. INFLUENA STRESSULUI O=IDATI> ASUPRA CRETERII MICELIENE A UNORAGENI FITOPATOGENI

LUCRAREA PRACTIC NR.&:#entru a se pune n eviden influena stressului o$idativ asupracreterii i dezvoltrii la ciupercile fitopatogene, va fi montat o e$perien, dup cum urmeaz:

%te un izolat fungic apartinnd speciilor .......................................................................... i

.............................................................. va fi cultivat pe mediul de cultur #+ n care se include osubstan test generatoare de stress o$idativ, la o temperatur optim de cretere de /1 *%.

Mole)ule test eneratoare de stress oxidativ:

menadiona (menadione sodium bisulfite )?4

apa o$igenat ("/;/

#on)entra*ii test: menadiona: *,/0 - & Am)B @ solutie stoc &**m)

apa o$igenat: *,20 -&,0 A>B @ solutie stoc >

Metod, in&lu%erea !le&ulel!r test+enerat!are %e stress !8i%ati6


9/11

nu se uita varianta martor cu repetiii pentru fiecare izolat fungic, respectiv C vase#etri. T!tal.

n &a#ul n!stru "ute (!l!si art!rul %in e8"erien$a "re&e%ent'.Me%iu %e &ultur' PDA , ...... 6ase Petri 8 l7 6as 4 ......... l

T!tal e%iu %e &ultur' PDA -"t. &ele e8"erien$e, .....l .....l....l 4 .........l:6! "re+ati .................l

#entru calculul volumului de soluie stoc ce trebuie ncorporat n mediul de cultur #+,se va folosi formula:

Ci 8>i 4 C( 8 >(D$. %oncentraia soluiei stoc este &*m), concentraia ce urmeaz a fi testat este &m),

iar volumul de mediu ce trebuie obinut este de * ml.

&*m) $ 7i 5 & m) $ *ml7i 5 &m) $ *ml 6 &*m) 5 ml n conc. &*m) va fi ncorporat n /2 ml mediu de

cultur #+

vem nevoie de , 20 ml menadion &*m) (dar noi vom prepara 0 ml.

&**m) $ 7i 5 &* m) $ 0ml

7i 5 &*m) $ 0ml 6 &**m) 5 *,0ml n conc. &**m) vor fi adugai peste 1,0 ml apsteril n vederea obinerii celor 0 ml menadion n conc.- de &*m).

#entru e$perien vom pregti &* ml menadion &*m) (ml ap steril &ml menadion &**m).

Observaii,creterea micelian (diametrul coloniei

Rezutate,inB

Ta)el &entrali#at!r'ulpina

patogen

)olecula

test

%onc.

?ol. stoc

%oncentraia 7ol.

ecesar(ml

r.

vase#etri

)ediu

)ml

Ater#aria$otr%tis

menadiona &*m) *,/0 m) *,20ml C /,/0ml

& m) ml C /2ml

T!tal lena%i!na

19M 5 ?:l 5 5

apa o$igenat > *,20> 2,0ml C //,0

&,0> &0ml C &0

T!tal l a"a!8i+enat'

? 5 ;;:l 5 5


10/11

Stru&tura ra"!rtului1. s&!"

;. aterial *i et!%' -aterial )i!l!+i& (un+i&: aterial )i!l!+i& 6e+etal: !le&ule test:

&!n&entra$ii

?. re#ultate !)$inute -+ra(i&e sau ta)ele

. %is&u$ii -inter"retarea re#ultatel!r

. &!n&lu#ii

. Bi)li!+ra(ie

Re#ultate

Eezultate privind influena substratului nutritiv asupra creterii miceliene a unor ageni fitopatogeni

+ata nsmnrii:

+ata notrilor:

)ediul de

cultura

%ompoziie #atogen test %retere miceliana

AmmB

Eata cretere

Amm6ziB

Eezultate privind influena temperaturii i a substratului nutritiv asupra creterii miceliene a unor agenifitopatogeni

)ediul de

cultura

%ompoziie #atogen test 'emperatura %retere

micelianaAmmB

Eata cretere

Amm6ziB

Eezultate privind influena stressului osmotic asupra creterii miceliene a unor ageni fitopatogeni

'ulpina

patogen

)olecula

test

%oncentraia +iametrulcoloniei

AmmB

nB

Ater#aria a%l &>/>

1>

8>

?orbitol *,1)*,8)

)artor

$otr%tis a%l &>/>


11/11

1>

8>

?orbitol *,1)

*,8)

)artor

nB

%m A>B 5 (+ colonie martor @ + colonie varianta test6+ colonie martor $ &**

Gnde + 5 diametrul coloniei

Eezultate privind influena stressului osmotic asupra creterii miceliene a unor ageni fitopatogeni

'ulpina

patogen

)olecula

test

%oncentraia +iametrul

colonieiAmmB

nB

Ater#aria

)artor

$otr%tis

)artor

?uccesH

Ecologia Patrogenilor vlad

Documents

Transcript of Ecologia Patrogenilor vlad