Examenul de laborator al puroiului. Identificarea S .aureus

Obiective:1.Definirea termenilor :puroi, supuraţie.2. Precizarea agenţilor etiologici implicaţi în producerea supuraţiilor.3. Explicarea modalităţilor corecte de prelevare şi transport al puroiului.4. Enumerarea etapelor diagnosticului de laborator al puroiului.5. Descrierea testelor de identificare ale stafilococilor.

1. Puroi=exudat fibrinos care conţine leucocite şi microorganismul implicat. Supuraţie =formarea puroiului.

2. Etiologie ( câteva exemple)Staphylococcus aureusStreptococcus pyogenesEscherichia coliKlebsiella spp.Enterobacter spp.Pseudomonas aeruginosa

3. Prelevarea din colecţii purulente.-se recoltează prin puncţie aspiraţie cu un ac suficient de gros adaptat unei seringi etanşe.- “seringa anaerobă”- pentru anaerobi- asigură supravieţuirea ~30 minute.-puroiul se transportă la laborator în maxim 1-2 ore ( nu şi pentru anaerobi)-se utilizează medii de transport – permite supravieţuirea câteva ore.

4 .A. Examenul macroscopic :-consistenţa (cremos, cazeos)-culoare ( galben, albastru verzui)- miros

B. Examen microscopic:- coloraţie Gram şi/sau Ziehl NeelsenExamenul citologic :- prezenţa leucocitelorExamnul bacterioscopic : -se apreciază semicantitativ prezenţa bacteriilor

Foarte rare : 1/50-100 câmpuri Rare 1/10-20 câmpuri Numeroase 1-10/câmp

- categoria microscopică

C. Cultivarea probelor Izolări calitative din puroi şi probe biopsiceMedii utilizate : geloză sânge. MaConkey, bulion tioglicolatIncubare : 37 grade, 5-10% CO2, 24-48 ore.

D. Identificarea agentului etiologicE. Antibiograma.

Identificarea S. aureus

Caractere microscopice : coci gram pozitivi, dispuşi izolat, în perechi, scurte lanţuri, grămezi, imobili, nesporulaţi.

Caractere de cultivare : colonii S mari, rotunde, bombate, pigmenate diferit (portocaliu, galben, alb).-pe geloză sânge sunt frecvent hemolitice,- cresc pe medii cu sare ceea ce permite izolarea din produse patologice contaminate .

Testul catalazeiPrincipiu: Catalaza este o hemoproteină care descompune peroxidul de hidrogen în apă şi oxigen. Bacteriile care o produc se protejează astfel de efectele letale ale peroxidului de hidrogen apărut ca metabolit final în metabolismul aerob al carbohidraţilor. Interpretare: pozitiv :apariţia bulelor de gaz până la efervescenţă negativ: absenţa bulelor

Pentru S aureus -testul catalazei pozitiv

Testul coagulazeiPrincipiu peste 96% din tulpinile de S aureus coagulează plasma prin:-activarea unui factor plasmatic similar trombinei: coagulaza liberă-acţiunea directă asupra fibrinogenului: coagulaza legată de peretele celular.Interpretare:

pentru testul pe lamă pentru coagulaza legată : pozitiv- aglutinare în 15-20 secnegativ : absenţa aglutinării în 2-3 minute ( necesită confirmare)

pentru testul în tub pentru coagulaza liberă:pozitiv : coagulare , indiferent de gradul ei ( în masă, văl de fibrină)negativ :absenţa cheagului

LizotipareaPrincipiu:are la bază fenomenele de lizogenie şi de specificitate a receptorilor faţă de anumiţi bacteriofagi.Utilitate- în studiile epidemiologice

Coci gram pozitivi

Testul catalazei

(+) Genul Staphylococcus Genul Streptococcus (-)

Testul coagulazei

(+) S. aureus (-) Stafilococi coagulază negativi

Sensibilitatea la Novobiocină

S- S.epidermides R- S .saprophyticus

În sală se gasesc: Cultură S.aureus Frotiuri stafilococ puroi Testul catalazei :apa oxigenată, pipetă, beţişoare, lame Testul coagulazei : martor pozitiv, martor negativ, tulpina de testat Antibiograma, tabel de interpretare, rigle.