Nr.6 (306), 2008

66

cilor de familie n depistarea persoanelor cu factori de risc (cardiovascular i diabet zaharat de tipul 2 componente ale SM), ntru luarea msurilor preventive precoce, din motivul c acetia sunt factori de risc modificabili.

Bibliografie1. ACE. American College of Endocrinology Task Force on the Insulin Resistance

syndrome: American College of Endocrinology Position Statement on the Insulin Resistance Syndrome, in Endocr. Pract., 2003:236-252.

2. Al-Shaibani H., El-Batish M., Sorkhou I. et al. Prevalence of insulin resistance syn-drome in a primary health care center in Kuwait. Fam. Med., 2004; 36(8):540.

3. Alberti K.G., Zimmet P., Shaw J. IDF Epidemiology Task Force Consensus Group. The metabolic syndrome a new worldwide definition. Lancet, 2005(366):1059-1062.

4. Beck-Nielsen H. General characteristics of the insulin resistance syndrome: prevalence and heritability. European Group for the study of Insulin Resistance (EGIR). Drugs, 1999; 58 Suppl. 1: p. 7-10; discussion 75-82.

5. Bloomgarden Z. T. Definitions of the Insulin Resistance Syndrome: The 1st World Congress on the Insulin Resistance Syndrome. Diabetes Care, 2004; 27(3):824-830.

6. Ford E. S. Prevalence of the metabolic syndrome defined by the International Diabe-tes Federation among adults in the U.S. Diabetes Care, 2005; 28(11):2745-2749.

7. Ford E. S. Risks for All-Cause Mortality, Cardiovascular Disease, and Diabetes Associated With the metabolic Syndrome. Diabetes Care, 2005(28):17691778.

8. Grundy S. M. Metabolic Syndrome: A Multiplex Cardiovascular Risk Factor. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2007;92(2):399-404.

9. Grundy S. M., Cleeman J. I., Daniels S. R. et al. Diagnosis and Management of the Metabolic Syndrome: An American Heart Association/National Heart, Lung, and Blood Institute Scientific Statement. Circulation, 2005; 112(17):2735-2752.

10. Guerrero-Romero F., Rodriguez-Moran M. Concordance Between the 2005 Inter-national Diabetes Federation Definition for Diagnosing Metabolic Syndrome With the National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III and the World Health Organization Definitions. Diabetes Care, 2005; 28(10):2588-2589.

11. Hu G., Qiao Q., Tuomilehto J. et al. Prevalence of the metabolic syndrome and its relation to all-cause and cardiovascular mortality in nondiabetic European men and women. Arch Intern Med, 2004; 164(10):1066-1076.

12. IDF. The IDF consensus worldwide definition of the metabolic syndrome. 2005 [cited: http://www.idf.org/webdata/docs/MetSyndrome_FINAL.pdf].

13. Levine J. H. Managing multiple cardiovascular risk factors: state of the science. J. Clin. Hypertens. (Greenwich), 2006; 8(10 Suppl. 3):12-22.

14. McLaughlin T., Abbasi F., Lamendola C., Reaven G. Heterogeneity in the Preva-lence of Risk Factors for Cardiovascular Disease and Type 2 Diabetes Mellitus in Obese Individuals. Effect of Differences in Insulin Sensitivity. Arch. Intern. Med., 2007 (167):642-648.

15. Wang J., Ruotsalainen S., Moilanen L. et al. The metabolic syndrome predicts cardiovascular mortality: a 13-year follow-up study in elderly non-diabetic Finns. Eur. Heart. J., 2007; 28(7):857-864.

16. WHO. Definition, diagnosis and classification of diabetes mellitus and its com-plications: report of a WHO consultation. Part 1: diagnosis and classification of diabetes mellitus. 1999; Geneva: WHO.

17. WHO. Global Database of Body Mass Index. 2008 [cited 2008 10.07]; Available from: http://www.who.int/bmi/index.jsp?introPage=intro_3.html.

18. Zanchetti A., Hennig M., Baurecht H. et al. Prevalence and incidence of the metabolic syndrome in the European Lacidipine Study on Atherosclerosis (ELSA) and its relation with carotid intima-media thickness. J. Hypertens., 2007; 25(12):2463-2470.

Ghenadie Curocichin, dr., confereniarCatedra Medicina de FamilieUSMF Nicolae TestemianuClinica Universitar de Asisten Medical PrimarMD-2004 ChiinuStr. 31 august 1989, 137A, of. 302Tel/fax: 205226E-mail: curoc@usmf.md ; curoc@mednet.md

Recepionat 03.09.2008

Recuperarea defectului de dimensiune critic al osului parietal la iepure prin grefe compozite

V. Nacu

Laboratorul Inginerie Tisular i Culturi Celulare, Catedra Chirurgie Operatorie i Anatomie Topografic Catedra Ortopedie, Traumatologie i Chirurgie n Campanie, USMF Nicolae Testemianu

Critical Rabbit Parietal Bone Defect Reconstruction by Composite GraftsThe aim of the study was to evaluate grafts containing autogenous bone marrow cells or allogenous cord blood cells with allogenic demineralized

bone or collagen sponge to stimulate bone formation in critical rabbit parietal bone defects. The experimental research was carried out on 40 adult male rabbits 12-13 months old. The animals were divided into four experimental groups: the first as control injected with a nutritional medium; the second collagen sponge with autologus bone marrow cells; the third decalcified bone matrix and allogenous umbilical cord blood cells; the fourth morselized autogenous cortico-cancelous bone from the iliac crest. The ability of morphoinductive grafts to stimulate bone formation in the parietal bone defect was evaluated histologically, radiologically and by the use of Computed Tomography at 15, 30, 60, 120 and 180 days after surgery. The treatments given to Group 2 combination grafts of collagen sponge with autologus bone marrow cells and to Group 3 decalcified bone matrix with allogenous umbilical cord blood cells were both shown to promote the healing process in critical parietal bone defects. Pending future research these materials may be found to be alternatives for use in the reconstruction of bone defects in the cranial vault. Compared to autogenous cancelous bone these materials are more compatible with the recipients and provide active and uniform osteogenesis in the bone defect.

ey words: bone marrow cells, cord blood cells, bone regeneration.

67

STUDII CLINICO-TIINIFICE

IntroducereEste cunoscut faptul c oasele bolii craniene dispun de

capaciti minore de regenerare la diferite animale, inclusiv la om, la care se consider c procesul reparator osos e totalmente stagnat n caz de defecte ale oaselor bolii craniului [1, 10].

Regiunea craniofacial este specific din punct de vedere anatomic i estetic, ceea ce face ca ingineria tisular, grefarea n aceat regiune s reprezinte unele probleme specifice ei [2]. Se tie c defectele oaselor bolii craniene nu regenereaz spontan i necesit plastie cu auto-, alo-, xenogrefe sau cu implanturi din diferite materiale (titan, aur, platin, materiale din plastic etc.). De asemenea, sunt anumite cerine vizavi de materialele utilizate pentru substituirea acestor defecte: a) materialele utilizate, cu sau fr componente biologice, trebuie sa fie apte de a-i ndeplini funcia de protecie acolo unde sunt plasate; b) grefele utilizate necesit s fie compatibile cu esuturile recipientului, capabile s se adapteze n regiunea plasat i chiar s creasc sau s fie nlocuite cu un esut propriu de calitate corespunztoare [6].

Obiectivele studiului vizat sunt de a stabili capacitatea de osteoformare a grefelor compozite: spongie de colagen cu autocelule osteomedulare; aloos demineralizat cu celule om-bilicale i autoosul morcelizat spongios din aripa osului iliac, n procesul de regenerare, n defect critic al osului parietal (os plat) la iepure i analiza comparativ a eficacitii utilizrii acestor materiale.

Material i metodeStudiul experimental a fost efectuat pe 40 de animale

experimentale mature, iepuri Shinshila, masculi, la care, sub anestezie general (intramuscular a fost administrat Calipsol + Seduxen (cte 50 mg/kg)) ulterior s-a produs, cu o frez, un defect circular cu diametrul de 10 mm care include grosimea integral (ambele lamele corticale) a osului parietal, fr a fi lezat pahimeningele cerebral. Ulterior, animalele au fost repartizate n 4 loturi experimentale: lotul I lotul-martor, n care, dup suturarea etan a esuturilor moi, defectul a fost su-plinit cu un mediu nutritiv DMEM (Dulbecco Modified Eagle Medium); lotul al II-lea a fost utilizat spongie de colagen i celule din mduv osoas (CMO); lotul al III-lea matrice osoas demineralizat (MOD) cu celule ombilicoplacentare (COP) i n lotul al IV-lea s-a folosit autoos morcelizat spon-gios din aripa osului iliac.

Animalele au fost ntreinute n condiii similare, n conformitate cu cerinele Comisiei Naionale de Etic pentru studiul clinic al medicamentelor.

Celulele osteomedulare i autoosul au fost obinute prin rezecia aripilor oaselor iliace, dup care, prin frmiare, s-a cptat osul corticospongios mrunit. A fost prelucrat corespunztor protocolului: tripsinizare cu sol. 0,25% de tripsin (Sigma), la 100C, i centrifugare la 800 de turaii. A fost obinut suspensia celular osteomedular care, ulterior, dup numrarea celulelor a fost plasat n cutii de cultur Petri (NUNC) cu diametrul de 60 mm, cantitatea de celule a constituit 0,25 x 106/ml i au fost cultivate pe mediu nutritiv DMEM cu 10% ser bovin fetal (SBF). Dup ce a fost obinut cantitatea necesar de celule i au fost create grefele compozite, animalelor li s-a realizat un defect n osul parietal, suplinit cu grefe, corespunztor loturilor experimentale. Dup intervenia chirurgical, animalele au fost excluse din experiment peste 15, 30, 60, 120, 180 de zile. Ele au fost eutanaziate prin ad-ministrarea intravenoas a 3 ml soluie de eter.

Dup secionarea craniului, a fost colectat calota lui i pstrat n sol. Formol de 10%, pH 7,4. Pn la efectu-area seciunilor histologice, piesele anatomice au fost supuse investigaiilor radiologice i tomografiei computerizate. Ulterior, dup demineralizare au fost incluse n parafin i au fost efectuate seciuni cu grosimea de 5 mkm. Seciunile histologice au fost colorate cu hematoxilin-eozin, apoi supuse cercetrilor morfologice.

Rezultate Examinarea seciunilor histologice a relevat c, n lotul

martor, la 15 zile pe marginea osului rezecat se determin fragmente osoase minuscule n destruciune; lacune os-teocitare goale caracteristice necrozei marginale a osului. Zona defectului este invadat de elemente, caracteristice hematomului, cu celule polimorfe i cu unele asemntoare fibroblastelor. Totodat, n unele locuri, de la marginile de-fectului osos, se formeaz trabecule reticulofibroase care-i au originea n lamelele osoase ale osului parietal, mai pronunate pe poriunea lamelei craniene externe acoperite de periost, fapt care se datoreaz osteogenezei periostale. esutul nou format acoper, ca un manon, marginile defectului osos. Pe alocuri se evideniaz vase sangvine n defect, mai multe fiind plasate lng marginea defectului osos. Restul spaiului este

,

, (10 ) . 40 (). : () ; ; - . 15, 30, 60, 120 180 , . , . , , - .

: , , .

Nr.6 (306), 2008

68

suplinit de esutul conjunctiv lax. Trabeculele osoase noi se conin preponderent respectiv marginii osului, dar i ataate la fragmentele de autoos morcelizat i de aloos demineralizat (fig. 1c). Radiologic ct i prin tomografia computerizat, aria defectului osos n toate loturile se contureaz bine, dimensi-unile nu sunt modificate (fig. 2, 4).

La 30 de zile, pentru lotul-martor, drept surse pentru dezvoltarea neoosului sunt fragmentele marginale de os rmase dup crearea defectului, elementele periostale i endo-stale ale marginii osoase. Se poate meniona faptul c din dura mater nu se observ o activitate proliferativ evident. O activitate major o are osteogeneza din partea periostului adiacent galea aponeurotica. Neoesutul format nconjoar, ca un manon, marginea osoas. n lotul I, n mijlocul defectului se determin esut conjunctiv lax srac n vase sangvine. n lotul n care s-a inoculat autoos spongios, aceste particule sunt nconjurate de celule polinucleate, macrofage. Adiacent particulelor osoase, de asemenea i n centrul defectului, sunt trabecule reticulofibroase osoase care nu au o legtur direct cu manonul de la marginea defectului. Trebuie de menionat o neoangiogenez intensiv n loturile experimentale 2, 3, 4 i o invazie extensiv celular n defectul osos de la marginile defectului i dinspre dura mater. n aceste loturi formarea esutului reticulofibros osos este mai pronunat comparativ cu lotul-martor, o parte din defect fiind acoperit de un strat fin de esut reticulofibros.

Dup 60-90 de zile, n lotul-martor, pe marginea osului lezat s-a format un strat de esut lamelar, ceva asemntor cu o plac terminal care micoreaz dimensiunile defectului (fig. 2, 4); respectiv defectului osos se identific esutul con-junctiv fibros, dens. Drept surse pentru dezvoltarea esutului osos n lotul-martor, au fost marginile defectului cu elemente

ale endostului, periostului i ale dura mater. n celelalte loturi procesul de regenerare decurge mai lent, comparativ cu termenul precedent, dar este n ascensiune. n acest ter-men nu mai sunt depistate particule de MOD i spongie de colagen cu CMO, care au stimulat procesul reparator osos n defectul osului parietal. n toate cazurile, trabeculele osoase se vizualizeaz pe tot spaiul defectului osos. Lipsete placa terminal asemntoare celei din lotul-martor. Nu se mai vizualizeaz n defect particule de MOD.

n unele locuri se mai stabilesc fragmente mici de autoos spongios, care sunt nconjurate de trabecule osoase proces de substituie cu os nou (fig. 3 c). Totodat, pe perimetrul defectului esutul neoformat este mai opac comparativ cu centrul defectului. Pe piesele histologice se determin ele-mente caracteristice matricei extracelulare un produs al elementelor celulare osteoblastice (fig. 3 a, c).

La 120 de zile activitatea procesului reparator este mai lent n toate loturile experimentale, dar nu se determin formarea lamelelor terminale la marginea osului, i esut osos spongios continuu pe suprafaa defectului. n lotul-martor defectul rmne completat de un strat de esut fibros fin, plasat pe ntreaga arie a defectului. n loturile 2, 3, 4 trabeculele osoase nou formate fuzioneaz ntre ele, inclusiv i pe marginea osului lezat, ceea ce genereaz, n final, n-chiderea defectului osos (fig. 2, 4). Pe lamele histologice, se atest os spongios imatur, cu osteocite integrate n lacune i cu osteoblaste ancorate pe faa exterioar a esutului osos. n multiple secvene regeneratul este reprezentat din exterior i interior, se contureaz lamelele osoase, aflndu-se n evoluie, esutul osos spongiform imatur i esut spongios maturizat, cu interconectarea trabeculelor osose. esutul reticulofibros osos se supune restructurizrii cu formarea esutului carac-

Fig. 1. Piese histologice la 15 zile de la demararea experimentului: a) lotul cu MOD+COP; b) lotul n care au fost utilizate spongia de colagen cu CMO; c) autoos din aripa osului iliac; d) mediu nutritiv (DMEM) (martor). Particulele de MOD n acest termen sunt intacte, dar sunt nconjurate de elemente celulare (a).

Particulele de os corticospongios sunt nconjurate de celule polimorfe (c); multiple celule sunt i n defectul suplinit cu spongie de colagen (b), n lotul-martor esut conjunctiv lax cu puine elemente celulare (d).

69

STUDII CLINICO-TIINIFICE

teristic osului parietal. Astfel, are loc restabilirea arhitectonicii caracteristice structurii osului spongios. Nu se observ o difere considerabil n rspunsul inflamator ntre loturile expermentale i la diferite intervale de timp.

Peste 180 de zile, n lotul-martor defectul rmne n pofida faptului c dimensiunile lui s-au micorat, ceea ce confirm c defectul circular cu diametrul de 10 mm este unul critic i nu regenereaz fr intervenie din exterior (fig. 2, 4, 5c). n defect este numai un strat de esut fibros fin, fr eviden de formare

a esutului osos. esut fibros este ceva mai mult, comparativ cu termenul precedent. Defectele substituite cu material complex (spongie de colagen cu CMO) sunt nchise, regeneratul are conexiuni osoase evidente cu marginea osului recipientului (fig. 5 a, b, d). Piesele histologice, colorate cu hematoxilin i eozin, au confirmat integrarea corticalei osului recipient i a osului nou format din defect. n osul nou format pot fi observate insulie de mduv osoas (fig. 5 b, d). Aceasta este caracteristic pentru toate cazurile, demonstrnd o biocompatibilitate, osteconductibilitate a

Fig. 2. Radiografii ale osului parietal de iepure la 15, 30, 60, 120, 180 de zile de la derularea experimentului. Loturile experimentale I, II, III, IV.

Fig. 3. Seciunile histologice la 60 de zile. Particulele de MOD n acest termen nu se depisteaz n regenerat (a), totodat, sunt n curs de asimilare particulele de os corticospongios (c). n lotul cu spongie de colagen, difuz, pe toat suprafaa sunt plasate insulie

de neoos n formare (b), n lotul-martor esut conjunctiv lax cu o structur neomogen (d), x 200.

Nr.6 (306), 2008

70

spongiei de colagen, MOD i osteoinductibilitate a CMO i COP prezente n grefele utilizate.

Pentru a analiza regeneratul osos, a fost utilizat tomogra-ful computerizat roentgen, care ne furnizeaz o informaie mai ampl despre regenerat i despre posibilitatea de a determina densitatea i forma lui exact. Tomografia computerizat permite a studia structura regeneratului interfragmentar i n termene incipiente de formare.

Scanarea a fost efectuat prin mijlocul defectului i prin poriunea intact a osului, ceea ce a servit ca reper pentru studiul comparativ. Parametrii regeneratului au fost apreciai n uniti Haunsfild (HU) de la - 900 pn la +3000 HU. Prelucrarea seciunilor regeneratului a fost efectuat n regim de reconstrucie multiplanic, n planuri sagital i frontal. Din reprezentarea grafic a indicilor densitii osoase (HU), n mijlocul defectului osului parietal, prin efectuarea tomografiei computerizate (fig. 4), se determin o cretere constant a densitii n toate loturile experimen-tale pe durata experimentului, cu excepia lotului-martor. Nu este o diferen semnificativ n densitatea esutului nou format n loturile experimentale III, IV i V (fig. 6). Totodat, ceva mai mare este densitatea la 180 de zile, n cazul folosirii autoosului corticospongios din aripa osului iliac. Analiza statistic a indicilor de scanare tomografic la nivelul defectului, executata n diverse termene de la efectuarea lui i plastia cu grefe celulare compozite sunt reprezentate n tabelul 1.

Discuiin actuala relatare este abordat un subiect ce se refer la

ingineria tisular n medicina regenerativ a reconstruciei oa-selor craniene. n particular, a fost testat capacitatea grefelor compozite: spongia de colagen cu autocelule osteomedulare,

Fig. 4. Tomogramele computerizate ale osului parietal la iepure la 15, 30, 60, 120, 180 de zile de la derularea

experimentului: lotul-martor mediu nutritiv DMEM; lotul 2 spongie de colagen cu autocelule osteomedulare; lotul 3 material compozit MOD cu COP; lotul 4 autoos morcelizat

spongios din aripa osului iliac

Fig. 5. Piese histologice la 180 de zile de la demararea experimentului: a) lotul cu MOD+COP; b) lotul n care au fost utilizate spongia de colagen cu CMO; d) autoos din aripa osului iliac; c) mediu nutritiv (DMEM). Se constat o diferen semnificativ

n structura histologic a defectului osos, unde a fost inoculat mediul nutritiv, i celelalte loturi.

71

STUDII CLINICO-TIINIFICE

Fig. 6. Reprezentarea grafic a indicilor densitii osoase (HU) n mijlocul defectului osului parietal prin efectuarea tomografiei computerizate. Se determin o cretere constant a densitii osoase n toate loturile pe durata experimentului, cu excepia

lotului martor. Nu este o diferen semnificativ n densitatea esutului nou format n loturile experimentale.

Tabelul 1Indicii de scanare tomografic la nivelul defectului osului parietal, la iepure, dup inocularea materialelor

Loturile experimentaleZile dup operaie

15 30 60 120 180

Lotul I. Lotul-martor, mediu nutritiv DMEM, (martor negativ) 225,1 478,2* 1752,5** 206 30,9 24536,8Lotul II. Spongie de colagen cu autocelule osteomedulare 574,4 12214.2* 24128.7** 362 46,5 540 57,6*Lotul III. Material compozit MOD + COP 10612,1 24433.2* 294 45.1 39878.4** 56398.3 Lotul IV. Autoos morcelizat spongios din aripa osului iliac (martor pozitiv) 12415,9* 28641.0* 354 47.2 43991.7* 667 23,4**Os intact 88625,6 85125,7 84233.4 80539.9 83927,3

* - p < 0,05; ** - p < 0,01

aloosul demineralizat cu celule ombilicale i autoosul morceli-zat spongios din aripa osului iliac de a stimula osteoformarea n defectul critic al osului parietal.

Materialele, care pot servi drept suport pentru celule, citochine, factori de cretere, sunt repartizate n cinci gru-puri mari: os demineralizat, materiale din colagen, polimeri resorbabili (biodegradabili) sintetici, materiale din calciu fosfat i din alte materiale care mai pot servi ca suport. Osul demineraliat reprezint practic o carcas de colagen de tip I, caracteristic lui, lipsit de elementele celulare i cele minerale, dar coninnd elemente ale matricei extracelulare care, n afar de colagen, conine i diveri factori de cretere i de dezvoltare inductori morfogenetici, i este un suport foarte bun pentru grefele celulare, citochine etc. [ 4, 9].

Este cunoscut faptul c celulele mduvei osoase, plasate n structuri tridimensionale contribuie la formarea esutului osos. Totodat, nu a fost elucidat pn acum capacitatea celulelor din complexul ombilicoplacentar de a produce os n defectele critice ale osului parietal.

Revascularizarea grefei autologice are loc treptat, n primele dou luni dup utilizare fiind observat angiogenez activ la suprafaa grefonului, astfel la finele acestui termen grefonul este totalmente vascularizat. Oricum, dimensiunile autogrefei, care poate fi colectat, sunt limitate, locul donator

sufer n colectarea transplantului din cauza traumatismului, fapt care nu poate fi subestimat. Autogrefa, de asemenea, necesit timp suficient pentru integrare complet n loja recipient i pentru restabilirea biomecanicii la nivelul grefrii, inclusiv a regiunii donatoare [4].

Multitudinea grefelor i a substituenilor osoi utilizai actulmente pentru suplinirea defectelor osoase craniene reflect starea actual a lucrurilor: pn n prezent nu exist un preparat unanim acceptat, care ar satiface cerinele n acest domeniu. Alogrefele formalinizate, utilizate la noi, nu satisfac cerinele vizavi de aceste materiale plastice [1]. Necesitatea demineralizrii alogrefelor survine n urma constatrii fap-tului c alogrefele, dup transplantare, sunt supuse resorbiei i nlocuirii cu esut osos propriu recipientului. Procesul de demineralizare decurge lent i neuniform; fiind dependent de dimensiunea grefei, poate dura decenii sau toat viaa pacientului [5, 10]. n cazul grefelor demineralizate, chiar din debut ncepe o invadare a grefei, de la periferie spre centru, cu neovase i cu elemente celulare noi. n defectele craniene, nlocuirea grefelor demineralizate, compacte, cu os nou, de asemenea, poate dura din cauza suprafeei reduse de contact al grefonului cu osul recipient, care are loc numai la periferia lui. Utilizarea grefei din os cortical, frmiat i demineralizat, mai mobil, higroscopic, contacteaz bine cu marginile osului

Nr.6 (306), 2008

72

recipient, faciliteaz proliferarea celular i revascularizarea decurge mai uor comparativ cu grefele compacte, integrale.

Pentru a amplifica capacitile osteoinductorii ale grefei osoase demineralizate i ale spongiei de colagen, matricea osoas demineralizat a fost mbogit cu grefe celulare.

Probabil transplantarea celular are avantaje n raport cu terapia genic i cu cea peptidic, din considerente c celulele au o aciune mai fin asupra esuturilor. Celula este aceea care dispune de capacitatea de a controla nivelul optim necesar n factorii de cretere pe care-i secret, pentru a dirija procesul morfogenetic n focarul patologic [7].

Celulele fetale au captat atenia transplantologilor prin faptul c esuturile embrionare nu au un sistem imun matur, ceea ce micoreaz probabilitatea complicaiilor dup transplantare. La acest tip de celule pot fi atribuite i celulele obinute din sngele ombilical. Ele dispun de un grad mare de proliferare i sunt capabile s formeze colonii de celule, care particip la regenerarea organului [3, 8]. Concomitent cu celulele stem, se administreaz i un complex de citochine i de factori de cretere care stimuleaz regenerarea esuturilor. Anume aceste capaciti ale esutului fetal i sistemul imun imatur asigur un efect terapeutic adecvat, far agresivitate imun a celulelor transplantate fa de recipient [8].

Proliferarea celulelor n esuturile care se rennoiesc este coordonat de diferite mecanisme ce acioneaz la nivel de celul, esut i organism. Ele susin o anumit intensitate de proliferare, difereniere i de eliminare a celulelor ce asigur homeostaza, adic constantele mediului intern. Toate aceste procese sunt strict reglamentate n timp i se manifest prin anumit vitez de parcurgere a etapelor de via a celulei i de numrul de celule care prolifereaz. Activitatea de proliferare presupune coordonarea n timp a procesului de producere a factorilor reglatori ai multiplicrii celulelor din organism i ai proceselor care au loc la nivelul ciclului mitotic celular. Ieirea n mas a celulelor, n faza mitotic de proliferare sub acionea factorilor reglatori ai mitozei, formeaz un val de proliferare, care sincronic traverseaz toate etapele de dez-voltare, asigurnd ritmul necesar al mitozelor i, dup aceasta, diferenierea final. Acest sistem necesit o reglare perfect, deoarece cea mai mic dereglare a echilibrului n numrul celulelor proliferative i cele ce se difereniaz poate genera schimbri patologice n structura i n funcia organului [8].

Confirmarea experimental a imunogenitii sczute a celulelor stem embrionare i celor fetale ofer o larg perspectiv n utilizarea lor pentru transplantare [8].

Actualmente, dou strategii de baz sunt utilizate n ingineria tisular: creterea celulelor in vitro pe transplant i invadarea matricei i regenerarea cu celulelegazd sau alogene.

Tehnologia ingineriei tisulare i celulare include mai multe etape:

1. obinerea materialului autologic destinat separrii din el a celulelor mezenchimale necesare pentru transplantare;

2. cultivarea celulelor in vitro, pentru obinerea cantitii necesare de celule i diferenierea lor n direcia necesar prin utilizarea factorilor de cretere;

3. alegerea suportului adecvat (spongie sau alte structuri tridimensionale care servesc drept matrice pentru celule i le permit proliferarea n direcia necesar);

4. transplantarea celulelor sau a materialului mixt (com-pozit).Anumite condiiile locale n care se desfoar proce-

sul de reparaie a osului, irigarea sangvin, oxigenarea etc. determin direcia de dezvoltare a acestui esut granular n cartilaj, n esuturi osos sau fibros. Osul nou format are puni extraosoase ct i intraosoase, de o calitate mai joas. De aceea restabilirea lui este un proces de durat (luni de zile), care finalizeaz cu remodelarea osoas prin formarea de os lamelar plasat din interior i din exterior, delimitndu-l pe cel spongios.

ConcluziiCulturile celulare inoculate, n defectul critic al osului

parietal la iepure, induc osteoregeneza n oasele craniene care, n mod normal, dispun de surse modeste de regenerare.

Apogeul n procesul de regenerare este atins n perioada 30-60 de zile i sunt probabile dou cai n mecanismul de aciune a culturilor celulare, utilizate n procesul de regene-rare: a) celulele inoculate stimuleaz celulele recipentului pentru difereniere osteoblastic, b) celulele inoculate se implic nemijlocit n procesul de osteogenez prin proliferaie i prin difereniere n celule osteoprogenitoare care, la rndul lor, se pot diferenia n osteoblaste. n lotul n care s-a utilizat spongia de colagen cu CMO, defectul este suplinit totalmente i refacerea osului este deplin, cu un grad puin mai avansat comparativ cu loturile III i IV.

Ingineria tisular poate fi considerat viitorul tiinei medicale i baza medicinii regenerative n transplantologie i n terapia tisular.

Aceste cercetri au fost posibile de efectuat prin su-portul financiar acordat de Direcia tiin USMF Nico-lae Testemianu (postdoctorat), proiectul instituional 06.420.049A i grantul nr. 117 IND, 08.819.09.01F.

Bibliografie1. Bajurea A. Cranioplastie combinat cu biomateriale osteoinductive la

copii. Teza dr..m., Chiinu, 1995, 163 p.2. Buckholz R. W. Clinical experience with bone graft substitutes. J. Orthop.

Trauma., 1987: 260-262. 3. Chailakhyan R. K., Gerasimov Yu. V., Chailakhyan M. R. Cell technologies:

from fundamental investigations to practice. Materials of XIV international conference and debating scientific club, New information technologies in medicine, biology, pharmacology and ecology. Ukraina, Krim 31 mai 9 june 2006, p. 92-93.

4. Gazdag A. R., Lane J. M. Glaser D. et al. Alternatives to autogenous bone graft: Efficacy and indications. J. Am. Acad. Orthop., Surg. 3, 1995: 1-8.

5. Glowacki J. Mulliken J. B. Demineralized bone implants. Clin. Plast. Surg., 12, 1985: 233.

6. Herring S., Ochareon P. Bone special problems of the craniofacial region. Orthod. Craniofacial. Research. 8; 2005; p.174-182.

7. Fleming J. E., Cornell C. N., Muschler G. F., Bone cells and matrices in orthopedic tissue engineering. Orthop. Clinics of North America, 31; (2000); p 357-374.

8. Majumar A., Ferber I., Lebcowschi J. et al Human Embryonic stem cells possess immue-priviliged properties. Stem. Cells, 2004; 22: 448-456.

Viorel Nacu, dr., confereniarCatedra Chirurgie Operatorie i Anatomie TopograficUSMF Nicolae TestemianuChiinu, bd tefan cel Mare, 165Tel.: 205242E-mail: nacu_viorel@yahoo.com

Recepionat 28.10.2008