Post on 25-Dec-2019
Test imunoabsorbant de tip sandwich Sanwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assays – S-ELISAs GeneQuence E. coli O157:H7, format
microalveolar
Fiecare kit contine alveole placate cu anticorpi specifici substantei tinta. Mostrele si probele de control sint adaugate in alveolele corespunzatoare. Pe parcursul incubarii, substanta tinta formeaza legaturi cu anticorpii. Alveolele se spala pentru a elimina materialul nelegat. Apoi, se adauga in alveole, conjugat enzimatic (anticorpi legati chimic de o enzima). In timpul incubarii, conjugatul formeaza legaturi cu deja legata substanta tinta, formind un sandwich. Cantitatea de conjugat care formeaza legaturi in alveola, este direct proportionala cu cantitatea substantei tinta. Alveolele se spala din nou, pentru a elimina conjugatul nelegat. Se adauga un substrat, care isi schimba culoarea in prezenta conjugatului. In timpul incubarii, culoarea vireaza proportional cu volumul conjugatului din alveola. Rezultatul se citeste vizual, in format screening. In format cantitativ, rezultatul se obtine prin masurarea schimbarilor de culoare cu ajutorul unui reader, si compararea cu o curba standard.
1. Microalveolele sint placate cu anticorpi specifici substantei tinta. 2. Mostra si proba de control sint adaugate in alveolele corespondente. 3. Se adauga conjugat, care formeaza legaturi cu deja legata substanta tinta 4. Se adauga substrat pentru colorare. 5. Rezultatul se citeste vizual sau cu un reader - cu cat mai albastru cu atit mai multa substanta tinta
a fost detectata.
Cum functioneza testele Neogen ?
alveola
anticorpi
Mostra sau
control
conjugat
substrat
pozitiv
negativ
Hibridizare “sandwich” ADN ( sistemele de testare in format alveolar GeneQuence, mai
putin GeneQuence E. coli O 157:H7 )
Fiecare test contine sonde ADN ( captura si detectare ), specifice ARN ribosomial al organismului tinta, si o faza placata solida ( microalveola ). O parte din cultura de preimbogatire este plasata intr-o eprubeta de test. Se adauga reactiv lizina, care rupe peretele celular, eliberind moleculele tinta de acid nucleic. O parte din mostra lizata este transferata in microalveola, peste care se adauga reactivul sonda. Reactivul sonda este compus din: 1) sonda captura oligonucleotida, specifica secventelor rARN al organismului tinta si etichetata la capatul 3 cu poly dA (acid polydeoxyadenylic); 2) sonda detector oligonucleotida, de asemenea specifica secventelor organismului tinta si etichetata la capatul 5 cu enzima HRP ( peroxidaza din hrean ). Reactia de hibridizare se petrece pe parcursul unei ore. Daca rARN-tinta este prezent in mostra, ambele sonde vor hibridiza cu secventele complementare lor din moleculele tinta. Complexul rezultat este capturat pe faza solida placata cu poly dT, complementara portiunii poly dA a sondei de captura. Sonda nelegata se spala, dupa care se adauga substrat HRP. Dupa o scurta incubare, culoarea albastra va indica prezenta sondei detector hibridizate in interiorul complexului, deci, prezenta rARN din organismul tinta. Rezultatul se determina prin citirea absorbantei cu ajutorul unui spectrofotometru la 450 nm. O valoare mai mare decit cea prestabilita indica un rezultat pozitiv.
Cum functioneza testele Neogen ?
Perete celular
Reactiv lizina
ARN ribosomial
Sonda detector Sonda captura
Microalveola
placata cu Poly dT
HRP –
peroxidaza hrean
Destinatie Sistemul automat GeneQuence este capabil sa execute analize simultane pe patru placi. Combinat cu testele genetice GeneQuence, sistemul detecteaza rapid patogeni in materii prime, produse finite si mostre prelevate din mediu. Datorita sistemelor automate de incarcare si a productivitatii mari, este capabil sa testeze 372 mostre simultan. Proiectul modular permite flexibilitatea configurarii si faciliteaza imbunatatirea si repararea. Doar incarcati mostrele si asteptati. In functie de
patogenul tinta, rezultatele sunt disponibile in maximum 2 ore.
Avantajele sistemului GeneQuence • Sistem procesare automata patru placi, multiple
analize simultan
• Inregistrare date/rezultate pentru arhivare, studiere si tiparire
• Proiect modular care permite configurare flexibila in pas cu nevoile dumneavoastra
• Rezultate reproductibile care elimina variabilitatea
• Manopera redusa, doar incarcati mostrele imbogatite
• Software intuitive, usor de utilizat si de asimilat
• Inclusivitate si exclusivitate excelenta pentru toate tintele
• Consolidare platforma, testeaza toti patogenii pe un singur system ( E. coli O157:H7, Salmonella,
Listeria, Listeria monocytogenes )
Cum se comanda 6600 Sistem automat GeneQuence 6601 Varfuri reactivi ( 4 X 108 ) 6602 Eprubete reactivi ( 24 pachete ) 6603 Varfuri mostra ( 4 X 108 )
6700 GeneQuence Salmonella, pana la 93 teste 6708 GeneQuence Listeria, pana la 93 teste 6709 GeneQuence L.monocytogenes, pana la 93 teste 6716 GeneQuence E.coli O157:H7, contine 96 alveole
acoperite cu anticorpi, pana la 94 teste
Pipetare
Incarcare placi
in incubator
Bacterii din alimente
Sistem automat GeneQuence Detectie patogeni
Incarcare
reactivi
Destinatie Testarea produselor din carne pentru prezenta
E. coli O157:H7
Testul De tip ELISA, utilizeaza anticorpi specifici
E. coli O157:H7. Mostrele de control si cele
testate se adauga microalveolelor. Dupa prima
incubare, microalveolele se spala cu o
solutie tampon si se adauga conjugat. Dupa a
doua incubare, se adauga substrat care
coloreaza in albastru. A treia incubare se
face dupa adaugarea solutiei de stopare care
schimba culoarea din albastru in galben.
Rezultatul se obtine prin compararea
densitatilor optice ale mostrei testate cu
mostrele de control positive si negative.
Procedura 1.Preimbogatiti mostrele.
2.Transferati 5 ml. mostra preimbogatita in
eprubeta de sticla.
3.Pasteurizati in baie de apa fiarta timp de 10
minute.
4.Raciti mostrele la temperature camerei.
5.Adaugati 100 microlitri control negative in
prima microalveola.
6.Adaugati 100 microlitri control pozitiv in a
doua microalveola.
7.Adaugati 100 microlitri mostra preimbogatita in
a treia microalveola, repetati pentru fiecare
mostra.
8.Incubati 20 minute la temperature camerei.
9.Spalati de 5 ori cu solutie de spalare. Uscati
prin scuturare pe un prosop fara bumbac.
10.Adaugati 100 microlitri conjugat enzymatic in
fiecare microalveola. Incubati 10 minute la
temperature camerei.
11.Repetati pasul 9.
12.Spalati fiecare alveola o singura data cu apa
distilata si uscati prin scuturare pe un prosop
fara bumbac.
13.Adaugati 100 microlitri substrat in
fiecare alveola.
14.Incubati 10 minute la temperature
camerei.
15.Adaugati 100 microlitri solutie stopare
in fiecare microalveola.
16.Citi densitatea optica la 450 nanometri.
Cititi cu atentie instructiunile din
pachet.
Cum se comanda 6716 GeneQuence E. coli O157:H7 – contine
96 alveole anticorpi pentru pana la 94
teste
9758 Reveal, mediu vrac 20 ore – 500 gr./60 teste.
9759 Reveal, mediu vrac 8 ore – 20 sticlute/20 teste.
9765 Reveal, mediu vrac 8 ore – 500 gr./56 teste
9770 Reveal, mediu 20 ore – 20 sticlute/20 teste.
9779 Reveal, mediu vrac – modificat 8 ore – 624 gr./56 teste
Pentru a utiliza alte medii de cultura, va
rugam sa consultati lista Accumedia.
Specificatii produs Sensibilitate 1 CFU/25 grame
Timp testare 1.3 ore, dupa
imbogatire 8-20 ore
Numar teste/kit pana la 94
Materiale necesare testului
1. Incubator 35 – 37 grade Celsius 2. Mediu preimbogatire Reveal 8 ore E.
coli O157:H7 sau Reveal 20 ore E. coli
O157:H7
3. Reader strip sau microplaca, 450 nanometri
4. Recipient spalare, cu strangere si varfuri fine, sau spalator strip-uri
sau microplaci
5. Pipete 100 microlitri si varfuri 6. Eprubete 13 X 100 mm.- sticla 7. Baie de apa la 100 grade Celsius 8. Balanta analitica. 9. Apa distilata
Bacterii din alimente
Pentru E. Coli O 157:H 7
Destinatie GeneQuence Listeria monocytogenes detecteaza
Listeria monocytogenes in mostre alimentare si de
mediu.
Testul Hibridizarea ADN implica sonde ADN, Listeria
monocytogenes specifice, etichetate direct cu
peroxidaza din hrean. Coloratura finala este
folosita pentru detectia Listeria spp. din mostre
alimentare, dupa preimbogatire. Mostra este
considerate a fi libera de Listeria atunci cand
valoarea absorbantei (A450 ) este mai mica decat
0.10. Mostra este considerate a fi pozitiva daca
valoarea absorbantei este egala sau mai mare decat
0.1. Mostrele pozitive ar trebui confirmate pe
medii de cultura, urmat de identificare
biochimica.
Procedura test 1.Imbogatiti mostrele ce urmeaza a fi testate. 2.Adaugati 0.2 ml. mostra preimbogatita si 0.2 ml.
control negativ si pozitiv in doua eprubete
separat etichetate ( 12X75 mm. sticla )
3.Adaugati 0.05 ml. reactiv pretratare si 0.05 ml.
reactiv lizina in fiecare eprubeta. Agitati timp
de 5 secunde dupa care incubati 5 minute la 37˚C. 4.Transferati 0.15 ml. mostre lizate in
microalveolele selectate.
5.Adaugati 0.125 ml. solutie hibridizare Listeria
monocytogenes in fiecare microalveola, amestecati
de 5 ori cu pipeta si incubati timp de o ora la
45˚C. 6.Spalati microalveolele de 5 ori cu solutia de
spalare.
7.Adaugati 0.15 ml. solutie substrat cromogen in
fiecare microalveola si incubati la temperatura
camerei timp de 20 minute.
8.Adaugati 0.05 ml. solutie stopare in fiecare
microalveola.
9.Cititi absorbanta la 450 nm.
Specificatii produs Sensibilitate 1-5 cfu/26 grame
Timp testare 2 ore, imbogatire
30-48 ore
Numar de teste/kit pana la 93
Aprobari: AOAC-RI #010403
HPB Canada MFLP-13
Materiale necesare testului 1. Reader microplaca, 450 nm. 2. Incubatoare, 30˚C +-1˚C si 35˚C+-1˚C 3. Eprubete sticla, 12 X 75 mm. 4. Pipete 20-200 µl si varfuri 5. Cronometru 6. Incalzitor la 37˚C+-1˚C
7. Incalzitor sau incubator la 45˚C+-1˚C 8. Recipient spalare, 500 ml. 9. Pipeta 10 ml. 10. Pipete sterile serologice, 10 ml. 11. Pipeta ajustabila multicanal. 12. Mediu imbogatire Listeria, modificat UVM. 13. Supliment BLEB, FDA. 14. Mediu baza imbogatire Listeria, BLEB. 15. Agar baza Oxford 16. Supliment Oxford, FDA. 17. Mixer sau omogenizator 18. Fosfat-tamponat salin(PBS; 10mM fosfat sodiu,
0.85% clorura calciu, pH 7.4)
19. Mediu Oxford modificat-MOX, FSIS 20. Supliment piruvat de sodiu-10%w/v, apos 21. Recipiente preimbogatire 22. Cilindru gradat 500 ml. 23. Swab-uri bumbac sterile si hartie absorbanta 24. Aparat pentru spalare placi cu sursa de vacuum 25. Pipete gradate 2 ml, de unica folosinta 26. Dispenser 50, 100 si 125 µl
27. Baie de apa, 37˚C 28. Eprubete sticla cu capac, 12 X 75 mm. 29. Vase Petri, 100 X 15mm.
Cum se comanda 6709 - GeneQuence L. monocytogenes –
pana la 93 teste
Bacterii din alimente
Rezultate
Destinatie GeneQuence Listeria detecteaza Listeria spp. in
mostre alimentare si de mediu.
Testul Hibridizarea ADN implica sonde ADN, Listeria
specifice, etichetate direct cu peroxidaza din
hrean. Coloratura finala este folosita pentru
detectia Listeria spp. din mostre alimentare,
dupa preimbogatire. Mostra este considerate a fi
libera de Listeria atunci cand valoarea
absorbantei este mai mica decat 0.10. Mostra este
considerate a fi pozitiva daca valoarea
absorbantei este egala sau mai mare decat 0.1.
Procedura test
1.Imbogatiti mostrele ce urmeaza a fi testate. 2.Adaugati 0.2 ml. mostra preimbogatita si 0.2
ml. control negativ si pozitiv in doua eprubete
separat etichetate ( 12X75 mm. sticla )
3.Adaugati 0.05 ml. reactiv pretratare si 0.05
ml. reactiv lizina in fiecare eprubeta. Agitati
timp de 5 secunde dupa care incubati 5 minute la
37˚C. 4.Transferati 0.15 ml. mostre lizate in
microalveolele selectate.
5.Adaugati 0.125 ml. solutie hibridizare in
fiecare microalveola, amestecati de 5 ori cu
pipeta si incubati timp de o ora la 45˚C. 6.Spalati microalveolele de 5 ori cu solutia de
spalare.
7.Adaugati 0.15 ml. solutie substrat cromogen I
fiecare microalveola si incubati la temperatura
camerei timp de 20 minute.
8.Adaugati 0.05 ml. solutie stopare in fiecare
microalveola.
9.Cititi absorbanta la 450 nm.
Specificatii produs
Sensibilitate 1-5 cfu/25 grame
Timp testare 1,9 ore, imbogatire
42-48 ore Numar de teste/kit pana la 93
Aprobari: AOAC- RI #010403
HPB Canada MFLP-13
Materiale necesare testului 1. Reader microplaca, 450 nm. 2. Incubatoare, 30˚C +-1˚C si 35˚C+-1˚C 3. Eprubete sticla, 12 X 75 mm. 4. Pipete 20-200 µl si varfuri 5. Cronometru 6. Incalzitor la 37˚C+-1˚C
7. Incalzitor sau incubator la 45˚C+-1˚C 8. Recipient spalare, 500 ml. 9. Pipeta 10 ml. 10. Pipete sterile serologice, 10 ml. 11. Pipeta ajustabila multicanal. 12. LCA modificat si ceftazidime. 13. Mediu imbogatire Listeria, modificat
LCA.
14. Mediu baza imbogatire Listeria, BLEB. 15. Agar baza Oxford 16. Suplimente BLEB 17. Antimicrobiene pentru Oxford, OXA-FDA 18. Mixer sau omogenizator 19. Fosfat-tamponat salin-PBS 20. Mediu Oxford modificat-MOX, FSIS 21. Supliment piruvat de sodiu 22. Recipiente preimbogatire 23. Cilindru gradat 500 ml. 24. Swab-uri bumbac sterile si hartie
absorbanta
25. Aparat pentru spalare placi cu sursa de vacuum
26. Pipete gradate 2 ml, de unica folosinta
27. Dispenser 50, 100 si 125 µl
28. Baie de apa, 37˚C 29. Eprubete sticla cu capac, 12 X 75 mm. 30. Vase Petri, 100 X 15mm.
Cum se comanda 6708 GeneQuence Listeria – pana la 93 teste
Bacterii din alimente
Rezultate
Destinatie GeneQuence Salmonella detecteaza Salmonella spp.
in mostre alimentare.
Testul Hibridizarea ADN implica sonde ADN, Salmonella
specifice, etichetate direct cu peroxidaza din
hrean. Coloratura finala este folosita pentru
detectia Salmonella spp. din mostre alimentare,
dupa preimbogatire. Mostra este considerata a fi
libera de Salmonella atunci cand valoarea
absorbantei (A450 ) este mai mica decat 0.10.
Mostra este considerata a fi pozitiva daca
valoarea absorbantei este egala sau mai mare decat
0.1. Procedura test 1.Imbogatiti mostrele ce urmeaza a fi testate. 2.Adaugati 0.4 ml.( 0.2 ml. din fiecare eprubeta
de cultura ) mostra preimbogatita si 0.4 ml.
control negativ si pozitiv in doua eprubete
separat etichetate ( 12X75 mm. sticla )
3.Adaugati 0.1 ml. reactiv lizina in fiecare
eprubeta. Agitati timp de 5 secunde dupa care
incubati 5 minute la 65˚C. 4.Transferati 0.145 ml. mostre lizate in
microalveolele selectate.
5.Adaugati 0.125 ml. solutie hibridizare
Salmonella in fiecare microalveola, agitati timp
de 2 minute si incubati timp de o ora la 45˚C. 6.Spalati microalveolele de 5 ori cu solutia de
spalare.
7.Adaugati 0.15 ml. solutie substrat in fiecare
microalveola si incubati la temperatura camerei
timp de 20 minute.
8.Adaugati 0.05 ml. solutie stopare in fiecare
microalveola.
9.Cititi absorbanta la 450 nm.
Specificatii produs Sensibilitate 1-5 cfu/26 grame
Timp testare 2 ore, imbogatire
24-48 ore
Numar de teste/kit pana la 93
Aprobari: AOAC-RI #030201
AOAC-OM, in derulare
HPB Canada MFLP-20
Materiale necesare testului 1.Reader microplaca, 450 nm.
2. Incubatoare, 42˚C +-1˚C si 45˚C+-1˚C 3.Eprubete sticla, 12 X 75 mm.
4.Pipete 20-200 µl si varfuri 5.Cronometru
6.Incalzitor la 65˚C+-1˚C
7.Incalzitor sau incubator la 35˚C+-1˚C 8.Recipient spalare, 500 ml.
9.Pipeta 10 ml.
10.Pipete sterile serologice, 10 ml.
11.Pipeta ajustabila multicanal.
12.Lactose broth sau alt mediu
imbogatire
13.Tetrathionate broth
14.Rappaport-Vassiliadis broth
15.Gram negative broth
16.Pipeta pompa 10 ml.
17.Mixer sau omogenizator
18.Varfuri pipeta, 250 µl
19.Pipete 20-200 µl 20.Stativ eprubete
21.Recipiente preimbogatire
22.Cilindru gradat 500 ml.
23.Hartie absorbanta
24.Aparat pentru spalare placi cu sursa
de vacuum
25.Pipete gradate 2 ml, de unica
folosinta
26.Pipeta dispenser 50, 100 si 125 µl
27.Baie de apa, 37˚C 28.Eprubete sticla pentru mostra de 11
ml.
29.Vase Petri, 100 X 15mm.
30.Agitator orbital, 150 rpm.
Cum se comanda 6700 GeneQuence Salmonella- pana la 93 teste
Rezultate
Bacterii din alimente