Test imunoabsorbant de tip sandwich Sanwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assays – S-ELISAs GeneQuence E. coli O157:H7, format

microalveolar

Fiecare kit contine alveole placate cu anticorpi specifici substantei tinta. Mostrele si probele de control sint adaugate in alveolele corespunzatoare. Pe parcursul incubarii, substanta tinta formeaza legaturi cu anticorpii. Alveolele se spala pentru a elimina materialul nelegat. Apoi, se adauga in alveole, conjugat enzimatic (anticorpi legati chimic de o enzima). In timpul incubarii, conjugatul formeaza legaturi cu deja legata substanta tinta, formind un sandwich. Cantitatea de conjugat care formeaza legaturi in alveola, este direct proportionala cu cantitatea substantei tinta. Alveolele se spala din nou, pentru a elimina conjugatul nelegat. Se adauga un substrat, care isi schimba culoarea in prezenta conjugatului. In timpul incubarii, culoarea vireaza proportional cu volumul conjugatului din alveola. Rezultatul se citeste vizual, in format screening. In format cantitativ, rezultatul se obtine prin masurarea schimbarilor de culoare cu ajutorul unui reader, si compararea cu o curba standard.

1. Microalveolele sint placate cu anticorpi specifici substantei tinta. 2. Mostra si proba de control sint adaugate in alveolele corespondente. 3. Se adauga conjugat, care formeaza legaturi cu deja legata substanta tinta 4. Se adauga substrat pentru colorare. 5. Rezultatul se citeste vizual sau cu un reader - cu cat mai albastru cu atit mai multa substanta tinta

a fost detectata.

Cum functioneza testele Neogen ?

alveola

anticorpi

Mostra sau

control

conjugat

substrat

pozitiv

negativ

Hibridizare “sandwich” ADN ( sistemele de testare in format alveolar GeneQuence, mai

putin GeneQuence E. coli O 157:H7 )

Fiecare test contine sonde ADN ( captura si detectare ), specifice ARN ribosomial al organismului tinta, si o faza placata solida ( microalveola ). O parte din cultura de preimbogatire este plasata intr-o eprubeta de test. Se adauga reactiv lizina, care rupe peretele celular, eliberind moleculele tinta de acid nucleic. O parte din mostra lizata este transferata in microalveola, peste care se adauga reactivul sonda. Reactivul sonda este compus din: 1) sonda captura oligonucleotida, specifica secventelor rARN al organismului tinta si etichetata la capatul 3 cu poly dA (acid polydeoxyadenylic); 2) sonda detector oligonucleotida, de asemenea specifica secventelor organismului tinta si etichetata la capatul 5 cu enzima HRP ( peroxidaza din hrean ). Reactia de hibridizare se petrece pe parcursul unei ore. Daca rARN-tinta este prezent in mostra, ambele sonde vor hibridiza cu secventele complementare lor din moleculele tinta. Complexul rezultat este capturat pe faza solida placata cu poly dT, complementara portiunii poly dA a sondei de captura. Sonda nelegata se spala, dupa care se adauga substrat HRP. Dupa o scurta incubare, culoarea albastra va indica prezenta sondei detector hibridizate in interiorul complexului, deci, prezenta rARN din organismul tinta. Rezultatul se determina prin citirea absorbantei cu ajutorul unui spectrofotometru la 450 nm. O valoare mai mare decit cea prestabilita indica un rezultat pozitiv.

Cum functioneza testele Neogen ?

Perete celular

Reactiv lizina

ARN ribosomial

Sonda detector Sonda captura

Microalveola

placata cu Poly dT

HRP –

peroxidaza hrean

Destinatie Sistemul automat GeneQuence este capabil sa execute analize simultane pe patru placi. Combinat cu testele genetice GeneQuence, sistemul detecteaza rapid patogeni in materii prime, produse finite si mostre prelevate din mediu. Datorita sistemelor automate de incarcare si a productivitatii mari, este capabil sa testeze 372 mostre simultan. Proiectul modular permite flexibilitatea configurarii si faciliteaza imbunatatirea si repararea. Doar incarcati mostrele si asteptati. In functie de

patogenul tinta, rezultatele sunt disponibile in maximum 2 ore.

Avantajele sistemului GeneQuence • Sistem procesare automata patru placi, multiple

analize simultan

• Inregistrare date/rezultate pentru arhivare, studiere si tiparire

• Proiect modular care permite configurare flexibila in pas cu nevoile dumneavoastra

• Rezultate reproductibile care elimina variabilitatea

• Manopera redusa, doar incarcati mostrele imbogatite

• Software intuitive, usor de utilizat si de asimilat

• Inclusivitate si exclusivitate excelenta pentru toate tintele

• Consolidare platforma, testeaza toti patogenii pe un singur system ( E. coli O157:H7, Salmonella,

Listeria, Listeria monocytogenes )

Cum se comanda 6600 Sistem automat GeneQuence 6601 Varfuri reactivi ( 4 X 108 ) 6602 Eprubete reactivi ( 24 pachete ) 6603 Varfuri mostra ( 4 X 108 )

6700 GeneQuence Salmonella, pana la 93 teste 6708 GeneQuence Listeria, pana la 93 teste 6709 GeneQuence L.monocytogenes, pana la 93 teste 6716 GeneQuence E.coli O157:H7, contine 96 alveole

acoperite cu anticorpi, pana la 94 teste

Pipetare

Incarcare placi

in incubator

Bacterii din alimente

Sistem automat GeneQuence Detectie patogeni

Incarcare

reactivi

Destinatie Testarea produselor din carne pentru prezenta

E. coli O157:H7

Testul De tip ELISA, utilizeaza anticorpi specifici

E. coli O157:H7. Mostrele de control si cele

testate se adauga microalveolelor. Dupa prima

incubare, microalveolele se spala cu o

solutie tampon si se adauga conjugat. Dupa a

doua incubare, se adauga substrat care

coloreaza in albastru. A treia incubare se

face dupa adaugarea solutiei de stopare care

schimba culoarea din albastru in galben.

Rezultatul se obtine prin compararea

densitatilor optice ale mostrei testate cu

mostrele de control positive si negative.

Procedura 1.Preimbogatiti mostrele.

2.Transferati 5 ml. mostra preimbogatita in

eprubeta de sticla.

3.Pasteurizati in baie de apa fiarta timp de 10

minute.

4.Raciti mostrele la temperature camerei.

5.Adaugati 100 microlitri control negative in

prima microalveola.

6.Adaugati 100 microlitri control pozitiv in a

doua microalveola.

7.Adaugati 100 microlitri mostra preimbogatita in

a treia microalveola, repetati pentru fiecare

mostra.

8.Incubati 20 minute la temperature camerei.

9.Spalati de 5 ori cu solutie de spalare. Uscati

prin scuturare pe un prosop fara bumbac.

10.Adaugati 100 microlitri conjugat enzymatic in

fiecare microalveola. Incubati 10 minute la

temperature camerei.

11.Repetati pasul 9.

12.Spalati fiecare alveola o singura data cu apa

distilata si uscati prin scuturare pe un prosop

fara bumbac.

13.Adaugati 100 microlitri substrat in

fiecare alveola.

14.Incubati 10 minute la temperature

camerei.

15.Adaugati 100 microlitri solutie stopare

in fiecare microalveola.

16.Citi densitatea optica la 450 nanometri.

Cititi cu atentie instructiunile din

pachet.

Cum se comanda 6716 GeneQuence E. coli O157:H7 – contine

96 alveole anticorpi pentru pana la 94

teste

9758 Reveal, mediu vrac 20 ore – 500 gr./60 teste.

9759 Reveal, mediu vrac 8 ore – 20 sticlute/20 teste.

9765 Reveal, mediu vrac 8 ore – 500 gr./56 teste

9770 Reveal, mediu 20 ore – 20 sticlute/20 teste.

9779 Reveal, mediu vrac – modificat 8 ore – 624 gr./56 teste

Pentru a utiliza alte medii de cultura, va

rugam sa consultati lista Accumedia.

Specificatii produs Sensibilitate 1 CFU/25 grame

Timp testare 1.3 ore, dupa

imbogatire 8-20 ore

Numar teste/kit pana la 94

Materiale necesare testului

1. Incubator 35 – 37 grade Celsius 2. Mediu preimbogatire Reveal 8 ore E.

coli O157:H7 sau Reveal 20 ore E. coli

O157:H7

3. Reader strip sau microplaca, 450 nanometri

4. Recipient spalare, cu strangere si varfuri fine, sau spalator strip-uri

sau microplaci

5. Pipete 100 microlitri si varfuri 6. Eprubete 13 X 100 mm.- sticla 7. Baie de apa la 100 grade Celsius 8. Balanta analitica. 9. Apa distilata

Bacterii din alimente

Pentru E. Coli O 157:H 7

Destinatie GeneQuence Listeria monocytogenes detecteaza

Listeria monocytogenes in mostre alimentare si de

mediu.

Testul Hibridizarea ADN implica sonde ADN, Listeria

monocytogenes specifice, etichetate direct cu

peroxidaza din hrean. Coloratura finala este

folosita pentru detectia Listeria spp. din mostre

alimentare, dupa preimbogatire. Mostra este

considerate a fi libera de Listeria atunci cand

valoarea absorbantei (A450 ) este mai mica decat

0.10. Mostra este considerate a fi pozitiva daca

valoarea absorbantei este egala sau mai mare decat

0.1. Mostrele pozitive ar trebui confirmate pe

medii de cultura, urmat de identificare

biochimica.

Procedura test 1.Imbogatiti mostrele ce urmeaza a fi testate. 2.Adaugati 0.2 ml. mostra preimbogatita si 0.2 ml.

control negativ si pozitiv in doua eprubete

separat etichetate ( 12X75 mm. sticla )

3.Adaugati 0.05 ml. reactiv pretratare si 0.05 ml.

reactiv lizina in fiecare eprubeta. Agitati timp

de 5 secunde dupa care incubati 5 minute la 37˚C. 4.Transferati 0.15 ml. mostre lizate in

microalveolele selectate.

5.Adaugati 0.125 ml. solutie hibridizare Listeria

monocytogenes in fiecare microalveola, amestecati

de 5 ori cu pipeta si incubati timp de o ora la

45˚C. 6.Spalati microalveolele de 5 ori cu solutia de

spalare.

7.Adaugati 0.15 ml. solutie substrat cromogen in

fiecare microalveola si incubati la temperatura

camerei timp de 20 minute.

8.Adaugati 0.05 ml. solutie stopare in fiecare

microalveola.

9.Cititi absorbanta la 450 nm.

Specificatii produs Sensibilitate 1-5 cfu/26 grame

Timp testare 2 ore, imbogatire

30-48 ore

Numar de teste/kit pana la 93

Aprobari: AOAC-RI #010403

HPB Canada MFLP-13

Materiale necesare testului 1. Reader microplaca, 450 nm. 2. Incubatoare, 30˚C +-1˚C si 35˚C+-1˚C 3. Eprubete sticla, 12 X 75 mm. 4. Pipete 20-200 µl si varfuri 5. Cronometru 6. Incalzitor la 37˚C+-1˚C

7. Incalzitor sau incubator la 45˚C+-1˚C 8. Recipient spalare, 500 ml. 9. Pipeta 10 ml. 10. Pipete sterile serologice, 10 ml. 11. Pipeta ajustabila multicanal. 12. Mediu imbogatire Listeria, modificat UVM. 13. Supliment BLEB, FDA. 14. Mediu baza imbogatire Listeria, BLEB. 15. Agar baza Oxford 16. Supliment Oxford, FDA. 17. Mixer sau omogenizator 18. Fosfat-tamponat salin(PBS; 10mM fosfat sodiu,

0.85% clorura calciu, pH 7.4)

19. Mediu Oxford modificat-MOX, FSIS 20. Supliment piruvat de sodiu-10%w/v, apos 21. Recipiente preimbogatire 22. Cilindru gradat 500 ml. 23. Swab-uri bumbac sterile si hartie absorbanta 24. Aparat pentru spalare placi cu sursa de vacuum 25. Pipete gradate 2 ml, de unica folosinta 26. Dispenser 50, 100 si 125 µl

27. Baie de apa, 37˚C 28. Eprubete sticla cu capac, 12 X 75 mm. 29. Vase Petri, 100 X 15mm.

Cum se comanda 6709 - GeneQuence L. monocytogenes –

pana la 93 teste

Bacterii din alimente

Rezultate

Destinatie GeneQuence Listeria detecteaza Listeria spp. in

mostre alimentare si de mediu.

Testul Hibridizarea ADN implica sonde ADN, Listeria

specifice, etichetate direct cu peroxidaza din

hrean. Coloratura finala este folosita pentru

detectia Listeria spp. din mostre alimentare,

dupa preimbogatire. Mostra este considerate a fi

libera de Listeria atunci cand valoarea

absorbantei este mai mica decat 0.10. Mostra este

considerate a fi pozitiva daca valoarea

absorbantei este egala sau mai mare decat 0.1.

Procedura test

1.Imbogatiti mostrele ce urmeaza a fi testate. 2.Adaugati 0.2 ml. mostra preimbogatita si 0.2

ml. control negativ si pozitiv in doua eprubete

separat etichetate ( 12X75 mm. sticla )

3.Adaugati 0.05 ml. reactiv pretratare si 0.05

ml. reactiv lizina in fiecare eprubeta. Agitati

timp de 5 secunde dupa care incubati 5 minute la

37˚C. 4.Transferati 0.15 ml. mostre lizate in

microalveolele selectate.

5.Adaugati 0.125 ml. solutie hibridizare in

fiecare microalveola, amestecati de 5 ori cu

pipeta si incubati timp de o ora la 45˚C. 6.Spalati microalveolele de 5 ori cu solutia de

spalare.

7.Adaugati 0.15 ml. solutie substrat cromogen I

fiecare microalveola si incubati la temperatura

camerei timp de 20 minute.

8.Adaugati 0.05 ml. solutie stopare in fiecare

microalveola.

9.Cititi absorbanta la 450 nm.

Specificatii produs

Sensibilitate 1-5 cfu/25 grame

Timp testare 1,9 ore, imbogatire

42-48 ore Numar de teste/kit pana la 93

Aprobari: AOAC- RI #010403

HPB Canada MFLP-13

Materiale necesare testului 1. Reader microplaca, 450 nm. 2. Incubatoare, 30˚C +-1˚C si 35˚C+-1˚C 3. Eprubete sticla, 12 X 75 mm. 4. Pipete 20-200 µl si varfuri 5. Cronometru 6. Incalzitor la 37˚C+-1˚C

7. Incalzitor sau incubator la 45˚C+-1˚C 8. Recipient spalare, 500 ml. 9. Pipeta 10 ml. 10. Pipete sterile serologice, 10 ml. 11. Pipeta ajustabila multicanal. 12. LCA modificat si ceftazidime. 13. Mediu imbogatire Listeria, modificat

LCA.

14. Mediu baza imbogatire Listeria, BLEB. 15. Agar baza Oxford 16. Suplimente BLEB 17. Antimicrobiene pentru Oxford, OXA-FDA 18. Mixer sau omogenizator 19. Fosfat-tamponat salin-PBS 20. Mediu Oxford modificat-MOX, FSIS 21. Supliment piruvat de sodiu 22. Recipiente preimbogatire 23. Cilindru gradat 500 ml. 24. Swab-uri bumbac sterile si hartie

absorbanta

25. Aparat pentru spalare placi cu sursa de vacuum

26. Pipete gradate 2 ml, de unica folosinta

27. Dispenser 50, 100 si 125 µl

28. Baie de apa, 37˚C 29. Eprubete sticla cu capac, 12 X 75 mm. 30. Vase Petri, 100 X 15mm.

Cum se comanda 6708 GeneQuence Listeria – pana la 93 teste

Bacterii din alimente

Rezultate

Destinatie GeneQuence Salmonella detecteaza Salmonella spp.

in mostre alimentare.

Testul Hibridizarea ADN implica sonde ADN, Salmonella

specifice, etichetate direct cu peroxidaza din

hrean. Coloratura finala este folosita pentru

detectia Salmonella spp. din mostre alimentare,

dupa preimbogatire. Mostra este considerata a fi

libera de Salmonella atunci cand valoarea

absorbantei (A450 ) este mai mica decat 0.10.

Mostra este considerata a fi pozitiva daca

valoarea absorbantei este egala sau mai mare decat

0.1. Procedura test 1.Imbogatiti mostrele ce urmeaza a fi testate. 2.Adaugati 0.4 ml.( 0.2 ml. din fiecare eprubeta

de cultura ) mostra preimbogatita si 0.4 ml.

control negativ si pozitiv in doua eprubete

separat etichetate ( 12X75 mm. sticla )

3.Adaugati 0.1 ml. reactiv lizina in fiecare

eprubeta. Agitati timp de 5 secunde dupa care

incubati 5 minute la 65˚C. 4.Transferati 0.145 ml. mostre lizate in

microalveolele selectate.

5.Adaugati 0.125 ml. solutie hibridizare

Salmonella in fiecare microalveola, agitati timp

de 2 minute si incubati timp de o ora la 45˚C. 6.Spalati microalveolele de 5 ori cu solutia de

spalare.

7.Adaugati 0.15 ml. solutie substrat in fiecare

microalveola si incubati la temperatura camerei

timp de 20 minute.

8.Adaugati 0.05 ml. solutie stopare in fiecare

microalveola.

9.Cititi absorbanta la 450 nm.

Specificatii produs Sensibilitate 1-5 cfu/26 grame

Timp testare 2 ore, imbogatire

24-48 ore

Numar de teste/kit pana la 93

Aprobari: AOAC-RI #030201

AOAC-OM, in derulare

HPB Canada MFLP-20

Materiale necesare testului 1.Reader microplaca, 450 nm.

2. Incubatoare, 42˚C +-1˚C si 45˚C+-1˚C 3.Eprubete sticla, 12 X 75 mm.

4.Pipete 20-200 µl si varfuri 5.Cronometru

6.Incalzitor la 65˚C+-1˚C

7.Incalzitor sau incubator la 35˚C+-1˚C 8.Recipient spalare, 500 ml.

9.Pipeta 10 ml.

10.Pipete sterile serologice, 10 ml.

11.Pipeta ajustabila multicanal.

12.Lactose broth sau alt mediu

imbogatire

13.Tetrathionate broth

14.Rappaport-Vassiliadis broth

15.Gram negative broth

16.Pipeta pompa 10 ml.

17.Mixer sau omogenizator

18.Varfuri pipeta, 250 µl

19.Pipete 20-200 µl 20.Stativ eprubete

21.Recipiente preimbogatire

22.Cilindru gradat 500 ml.

23.Hartie absorbanta

24.Aparat pentru spalare placi cu sursa

de vacuum

25.Pipete gradate 2 ml, de unica

folosinta

26.Pipeta dispenser 50, 100 si 125 µl

27.Baie de apa, 37˚C 28.Eprubete sticla pentru mostra de 11

ml.

29.Vase Petri, 100 X 15mm.

30.Agitator orbital, 150 rpm.

Cum se comanda 6700 GeneQuence Salmonella- pana la 93 teste

Rezultate

Bacterii din alimente