Testul SIA pentru macroglobuline

Principiu

Testul Sia se bazeaza pe precipitarea macroglobulinelor in ser (cand sunt prezente in cantitate crescuta) in apa complet lipsita de ioni (apa bidistilata).Testul este numai orientativ si putin sensibil.

Metoda

Intr-un cilindru cu apa bidistilata (este important sa fie bidistilata) se picura 1-2 picaturi de ser (preferabil proaspat).Daca serul se amesteca cu apa fara opacifiere = test negativ.Daca se formeaza un precipitat albicios = test pozitiv, ceea ce traduce o crestere a macroglobulinelor la peste 2 g%.Proportional cu intensitatea precipitatului, reactia se poate nota cu +, ++ sau +++.

Aglutinine la rece (microtehnica)

Principiu

In unele seruri patologice apar hemaglutinine ce intra in reactie cu propriile hematii (sau cu hematii de grup 0) la +4 C.Dilutii seriate de ser de bolnav se pun in contact cu o doza standard de hematii si se determina dilutia cea mai mica de ser care prezinta inca hemaglutinare (titrul serului).

Materiale

- placi de plastic cu godeuri IC- pipeta Pasteur cu tetina- diluant SF sol 0,87%- sticlute cu Na2EDTA uscat. Dintr-o solutie de Na2EDTA 1% in apa distilata

se repartizeaza cate 0,2 ml (care contin deci 2 mg de substanta) in sticlute de penicilina bine curatate si uscate. Se lasa peste noapte in termostat la 37 C pentru evaporarea apei ; pe fundul sticlutei raman cele 2 mg de Na2EDTA. Sticlutele astfel pregatite se pastreaza la loc uscat si ferit de praf, pana la epuizare.

- Sange de bolnav. Se recolteaza 2 ml sange prin punctie venoasa si se introduc rapid intr-o sticluta cu 2 mg de Na2EDTA uscat. Se agita sticluta prin miscari de rotatie.

Metoda

Prepararea reactantilor- se separa prin centrifugare plasma, se decanteaza si se pastreaza- se spala sedimentul de eritrocite de 3 ori cu SF prin centrifugare- se prepara o sispensie de eritrocite 1% in SF

Pipetarea probelor- se prepara 11 dilutii binare din plasma bolnavului in SF, de la ½ la 1/2048, in

volum de 2 picaturi- se adauga in fiecare godeu 2 picaturi de suspensie E 1%.

Martor eritrocite- 2 pic diluant + 2 pic E 1%

Agitarea placii se face manual prin lovirea succesiva a celor 4 margini pentru omogenizarea continutului godeurilor.

Incubare – placa acoperita se lasa peste noapte la +4 C.

Citirea si interpretareSe examineaza imagilile de depunere a hematiilor :

- inel mic, rotund, neted = absenta aglutinarii- voal fin pe fundul godeului = aglutinare

- Martorul eritrocite trebuie sa fie perfect neaglutinat.- Ultima dilutie de ser care da aglutinare = titrul- Pentru confirmare, placa se incubeaza dupa citire pentru 2 ore la 37 C. In cazul prezentei aglutininelor la rece, hemaglutinarea trebuie sa dispara.

- titrurile obtinute prin micrometoda sunt aceleasi ca cele obtinute prin metoda in tub.

- Un titru peste 1/64 este socotit patologic- Hemaglutininele la rece sunt de tip IgM si se intalnesc in unele anemii

hemolitice autoimune, in limfoame maligne, frecvent in mononucleoza infectioasa, sdr Raynaud, pneumonia cu M. pneumoniae.