CuprinsINTRODUCERE3Motivaia studiului3I. PARTEA GENERAL4Capitolul 1. Scurt istoric4Capitolul 2. Descriere botanic52.1. Date generale52.2. ncadrare sistematic52.3. Descriere6Capitolul 3. Compoziia chimic i obinerea produsului de prelucrare63.1. Flavonoidele73.2. Antocianidoli73.3. Taninuri83.4. Vitaminele: B1, C8Capitolul 4. Extracte standardizate de pducel8WS 1442 extract standardizat8Capitolul 5. Stadiul actual al cercetrii95.1. Protecie mpotriva atacului cerebral i a proteinelor tumorale95.2. Activitate antioxidant95.4. Aciunea pe culturi i organe izolate10II. PARTEA SPECIAL:11Formularea de capsule retard din extract uscat de pducel11Capitolul 6. Obinerea i caracterizarea preparatului extractiv116.1. Prepararea tincturii de pducel116.2. Evaporarea la rotavapor i distilarea n instalaie cu refrigerent126.3. Uscarea la etuv126.4. Caracterizarea Pducel extract, Herbagetica136.5. Caracterizarea pulberii fructelor de pducel13Capitolul 7. Evaluarea unor parametri fizico-chimici (pH, conductibilitate, spectroscopie UV-VIS) i principii active147.1. pH-ul soluiilor de analizat147.2. Msurtori spectrofotometrice157.3. Determinarea coninutului total de flavonoizi157.4. Comportamentul extractului uscat la variaii de pH16Capitolul 8. Formularea capsulelor cu eliberare prelungit188.1. Capsula gastrosolubil188.2. Obinerea microsferelor188.3. Rezultatul formulrii19III. Concluzii20IV. Bibliografie21

PDUCELUL,UTILIZAT PENTRU FORMULAREA DE CAPSULE RETARD

INTRODUCEREFolosirea pducelului n scopuri medicinale dateaz din Evul Mediu. La nceput, erau valorificate doar fructele, dar astzi, i florile i frunzele sunt considerate a avea efecte medicinale benefice. n mod tradiional, pducelul era recomandat pentru angin, pentru pierderea elasticitii arterelor, hipertensiune i palpitaii. Efectele plantei asupra inimii i a sistemului circulator au fost cercetate pe larg, iar oamenii de tiin i-au dovedit utilitatea n tratamentul afeciunilor cardiovasculare.[footnoteRef:1] [1: Reader's Digest - Farmacia naturii. Un ghid al plantelor medicinale, Ed. Reader's Digest, 2006, pag. 137-139; ISBN: 978-973-87828-7-7]

Dintr-un numr mare de fitopreparate promovate astzi ca suplimente alimentare cu aciune terapeutic, foarte puine s-au dovedit a fi eficiente pentru aciunea cardio-vascular. Excepie fac extractele obinute din pducel, recunoscut ca stimulant cardiac i agent hipotensiv, dar i pentru aciunea hipolipemiant, antioxidant, antiinflamatorie, ameliorarea tulburrilor somnului i ale tractului digestiv.[footnoteRef:2] [2: Joseph et al.- Hawthorn: a literature review, Ed. Herbal Gram, 1995, 22 (1990), pag. 1933 ;]

Scopul experimentului este, n prima parte de a obine capsule cu eliberare retard, coninnd extract hidroalcoolic uscat de pducel, urmat de efectuarea unui studiu de dizolvare in vitro a capsulelor de pducel, n suc gastric i suc intestinal.

Motivaia studiuluiMedicamentul industrializat a devenit astzi un obiect aproape familiar, se ntlnete peste tot i aproape s-a uitat faptul c aceste mici cutii reprezint unul dintre cele mai sclipitoare rezultate ale geniului contemporan. Simbol al industriei farmaceutica moderne, specialitatea farmaceutic necesit creativitate i rigurozitate.Specialitatea farmaceutic de mine va fi influenat de elemente provenind din industria de medicamente, dar mai ales din mediul nconjurtor. Aceasta va fi mult mai apropiat de mecanismele biologice asupra crora va trebui s acioneze. O tendin contemporan este de a dezvolta noi forme farmaceutice cu cedare controlat care s creasc compliana pacienilor.Principiile care guverneaz formularea produselor cu eliberare modificat: reducerea dozei de substan activ; eliberare uniform a substanei medicamentoase; optimizarea eficienei terapeutice prin modularea cedrii substanei; creterea complianei pacienilor prin reducerea numrului de administrri; diminuarea reaciilor secundare ale substanei medicamentoase.

I. PARTEA GENERAL

Capitolul 1. Scurt istoricNumeroasele denumiri populare ale plantei Crataegus s-au transmis prin viu grai, din moi-strmoi, odat cu legendele i povetile care se nvrt n jurul acestui medicament natural al inimii. Aadar, numele de mai provine de la momentul anului n care nflorete pducelul, pine i brnz de la gustul de frunze tinere, fiind adesea folosite, n zonele de ar, la prepararea de sandwich-uri, precum i denumirea de grdu viu. Pducelului i s-au asociat o serie de practici i ritualuri, cea mai celebr fiind Legenda fertilitii reginei May, care precede perioada cretin.Obiceiul de a merge la cules de pducel i ritualul ncoronrii reginei May, amintind de Beltane, festivalul pgn al fertilitii, care ncepea odat cu nflorirea pducelului. Florile albe sunt cunoscute, n folclorul britanic, ca un semn al morii sau al dezastrului dac sunt aduse n cas, probabil din cauza numeroaselor jertfe omeneti, parte obligatorie a ritualului Beltane. Regele i regina lunii mai au fost omori la sfritul perioadei de cretere a pducelului, ceea ce a creat o ambiguitate n rndul superstiioilor, deoarece aceast plant este i un simbol al speranei. Ca plant medicinal, pducelul a fost descoperit n secolul al XVIII-lea, n Anglia i era folosit, tradiional, n tratarea rinichilor i a vezicii urinare. Pentru beneficiile sale cardiovasculare, pducelul este folosit nc de la sfritul secolului al XIX-lea.[footnoteRef:3] [3: Brown D. - The royal Horticultural society; Encyclopedia of herbs; Ed. Delhi office, London; 2008; pag.523-524; ISBN 978-1-4058-3238-5]

Dintr-un numr mare de fitopreparate promovate astzi ca suplimente alimentare cu aciune terapeutic, foarte puine s-au dovedit a fi eficiente pentru aciunea cardio-vascular. Excepie fac extractele obinute din pducel, recunoscut ca stimulant cardiac i agent hipotensiv, dar i pentru aciunea hipolipemiant, antioxidant, antiinflamatorie, ameliorarea tulburrilor somnului i ale tractului digestiv.[footnoteRef:4] [4: Joseph et al.- Hawthorn: a literature review, Ed. Herbal Gram, 1995, 22 (1990), pag. 1933 ;]

Capitolul 2. Descriere botanic

2.1. Date generaleGenul Crataegus cuprinde aproximativ 280 de specii, rspndite n toate zonele climatice din emisfera nordic. Dintre speciile cunoscute, pentru efectul terapeutic s-au evideniat: Crataegus monogyna; Crataegus oxyacahanta; Crataegus laevigata; Crataegus pentagyna. Alte specii cunoscute i rspdite n Europa sunt: C. calycina, C. kyrotostyla, C. curvisepala, C. nigra, C. atarolus.2.2. ncadrare sistematicRegn: Plantaencrengatura: AngiospermatophytaClasa: DicotyledonataeSubclasa: DialypetalaeOrdinul: RosalesFamilia: RosaceaeSubfamilie: Pomoideae (Maloidea)Gen: CrataegusSpecie: Crataegus monogyna, Crataegus oxyacanthaClasificare: Nikolaus Joseph von Jacquin

2.3. Descriere Pducelul grupeaz arbuti i arbori, cu nlimi cuprinse ntre 3-8, pn la 10 metri, cu ramuri spinoase. Frunzele glabre, cztoare, sunt rombic-ovate, penat-lobate, cu 3-7 perechi de lobi adnci pn la jumtatea limbului sau pn la din lamin. Lobii pot fi acui, acuminai sau optuziscul, dinai.Fructele globuloase, uor ovale, cu caliciul persistent la captul anterior, zbrcite n urma uscrii, lungi de aproximativ un centimetru, sunt poame drupacee, de culoare roie-portocalie, roie-brun cnd se nvechesc, avnd n interior unu sau 2-3 smburi ovali, dup specia productoare.[footnoteRef:5] Este un fruct fals care provine din ngroarea receptaculului cu endocarpul sclerificat. Fructele au gust dulceag, pstos, aromat, uor astringent, se mai numesc gherghine, perioare sau mliee. Mirosul lipsete la ambele produse pe cnd gustul este slab astringent, la flori.[footnoteRef:6] [5: Bojor O., Pop M. Fitoterapia n folosul tuturor; Ed, Medical, Bucureti, 2010; pag. 348-352; ISBN 978-973-39-0701-5] [6: Grigorescu Em., I. Ciulei, Ursula Stnescu - Index Fitoterapeutic; Ed. Medical, 1986; pag. 402-405]

Pducelul prefer lumina, dar crete i la semi-umbr, pe soluri bazice pn la acide, dar afnate, umede i bogate. Florile apar la sfritul primverii, iar fructele apar toamna devreme. Florile se recolteaz n aprilie-mai, frunzele n perioada aprilie-august, iar fructele, n perioada septembrie-octombrie.[footnoteRef:7] [7: Mohan Gh. Ghidul plantelor medicinale, vol. II, Ed. Corint, 2011, pag. 157-158; ISBN 978-973-135-636-5]

Capitolul 3. Compoziia chimic i obinerea produsului de prelucrareFlorile i frunzele de pducel conin: flavonoide (min. 0,6%), proantociani, 1,4% acizi triterpenici (oleanolic, ursolic, crategolic), amine biogene, hiperozida, vitexina, vitexin-4-ramnoidele, cvercetina, cvercetin 3-galactozida i cvercetin-4-galactozida, rutozide, vicentin, catehine, fenoli, acizi carboxilici, purine, steroli, ulei esenial, aldehid anisic, taninuri de natur catehic, pectine, sruri minerale.Fructele conin: pectine, antociani, flavonoide, proantociani, taninuri ,vitaminele B1 i C, acizi (tartric, citric, ursolic, oxalic, nicotinic, clorogenic), sorbitol, zaharuri, ulei gras, substane minerale , catehine i epicatehine, precum i acizi fenolici (acid clorogenic, acid cafeic), au mai fost izolate amine( fenilamina i metoxi derivaii si, dopamine, acetilcolina i tiramina).

3.1. FlavonoideleFlavonozidele sunt pigmeni vegetali rspunztori de coloraia galben a florilor, fructelor, uneori i a frunzelor. Sunt prezente n toate organele plantelor sub form glicozidic sau de aglicon. Existena lor n cuticula foliar i n alte celule epidermice ale frunzelor asigur protecia esuturilor mpotriva efectelor nocive ale radiaiilor ultraviolete.Principala aciune atribuit flavonozidelor este aceea de vitamine P sau factori P (factori de permeabilitate). Acioneaz prin legarea de proteinele intracelulare, scznd permeabilitatea capilarelor sanguine i crescndu-le rezistena. Flavonozidele au aciune diuretic, antibacterian, antiviral, antifungic; scad timpul de sngerare i de coagulare a sngelui; proprieti antioxidante, antihipertensive, vasoprotectoare i venotonice.

3.2. Antocianidolin comparaie cu alte plante, cum ar fi plopul, ulmul, glicina, bobul sau fasolea, pducelul conine cea mai mare cantitate de procianidine i procianidine oligomerice.Antocianidolii prezint aciune vasoprotectoare (angioprotectoare), antiaritmic, antioxidant (capteaz radicalii liberi, ndeosebi anionii superoxid, inhibnd n acest mod peroxidarea lipidelor), antimutagen, hipocolesterolemiant. Efectul angioprotector se realizeaz prin mai multe mecanisme: pe de o parte proantocianidolii acioneaz ca inhibitori ai hialuronidazei, elastazei i colagenazei , precum i ai xantin-oxidazei, -glucozidazei i proteazelor; pe de alt parte, proantocianidolii inhib enzima de conversie a angiotensinei I, reducnd permeabilitatea capilar, au efecte antiexudative i antiedematoase, stimuleaz regenerarea rodopsinei i nu prezint toxicitate. Se absorb rapid (concentraia este maxim dup 45 de minute). Timpul de njumtire este de 5 ore. Se distribuie n snge, ficat, rinichi, piele, pereii vasculari i n mucoasa gastric i enteral. Se elimin renal.[footnoteRef:8] [8: Istudor V. - Farmacognozie, fitochimie, fitoterapie; vol. 1; Ed. Medical; 1998; pag. 207; ISBN: 973-39-0364-7]

3.3. TaninuriTaninurile sunt substane organice polifenolice, solubile n ap, cu gust astringent. Se gsesc repartizate n toate organele plantei, se acumuleaz n cantiti mari n scoare, organe subterane, lemn, frunze, flori, fructe imature, semine, formaiuni patologice. Taninurile sunt considerate factori de aprare ai plantelor mpotriva infeciilor bacteriene i virale, precipitnd proteinele microorganismelor, sunt antioxidante. Folosite extern, grbesc cicatrizarea, au efect vasoconstrictor asupra capilarelor. Unele produse cu taninuri sunt hipoglicemiante.[footnoteRef:9] [9: Istudor V. - Farmacognozie, fitochimie, fitoterapie; vol. 1; Ed. Medical; 1998; pag. 208; ISBN: 973-39-0364-7]

3.4. Vitaminele: B1, CVitaminele sunt elemente indispensabile unei bune funcionri a organismului, spre deosebire de celelalte substane nutritive, sunt necesare n doze mici i nu constituie surse de energie, dar au rolul de a nlesni procesele nutritive i metabolice din organism. Vitaminele intervin n procesele de asimilare, mresc capacitatea de lucru i rezistena organismului la mbolnviri, ajut la creterea i nmulirea celulelor.[footnoteRef:10] [10: Bodea C., Frcan V., Nicoar El., Sluanschi H. Tratat de Biochimie vegetal, Editura Academiei Republicii Populare Romne, 1964, pag. 812 815, 1277 1285]

Capitolul 4. Extracte standardizate de pducel

WS 1442 extract standardizatExtractul de pducel WS 1442 este standardizat n 18,75% procianidine oligomerice. Produsul care conine acest extract poart denumirea de Crataegutt.Datele clinice au artat, de asemenea, faptul c WS 1442 este eficient, n cazuri de insuficien cardiac congestiv, conform NYHA II, reduce mortalitatea prin infarct miocardic, cel puin n cazul pacienilor fr afectarea funcional a ventriculului stng.[footnoteRef:11] [11: Califf R.M., MD editor general - American Heart Journal, vol. 143, Ediia 5, 2002, pag. 910915]

Capitolul 5. Stadiul actual al cercetriiDe-a lungul timpului s-au realizat mai multe studii n ceea ce privete identificarea, dozarea, activitatea, eficacitatea, stabilitatea, farmacocinetica, farmacodinamia i farmacotoxicologia pducelului i a substanelor active coninute n acesta. n lucrarea de licen voi aminti cteva dintre aceste studii.

5.1. Protecie mpotriva atacului cerebral i a proteinelor tumoraleAdministrarea pe cale oral a flavonoidelor din pducel s-a dovedit a fi eficient pentru protecia mpotriva ischemiei. Aceast proprietate a fost pus n eviden cu ajutorul unui lot de animale de experien, gerbil mongolian, studiu n care s-a demonstrat refacerea leziunilor cerebrale i reluarea circulaiei dup leziuni cerebrale provocate animalelor de experien.Tratamentul preventiv cu flavonoide din crataeg poate reduce nivelul proteinelor tumorale TNF- i factorul nuclear KB i poate crete nivelul ARN-ului mesager al NOS(nitric oxid sistem) estimat. Tot n cadrul studiului s-a observat o scdere a neuronilor afectai i a celulelor moarte din zona hipotalamic, n urma atacului cerebral.

5.2. Activitate antioxidantn urma unui studiu in vitro, efectuat n diverse soluii examinate spectrofotometric, aciunea antioxidant a procianidinelor prezente n compoziia pducelului s-a dovedit a fi mai puternic dect a vitaminei C. Vitamina E a avut parte de aceeai detronare n favoarea pducelului n sistemul peroxidant lipozomal, acesta inhibnd peroxidarea lipidic din timpul hidrolizei enzimatice a crnii de porc, la o temperatur de 50oC pe o perioad de 24 de ore.[footnoteRef:12] [12: Bowtle W. J. - Pharmaceutical Technology, 2010, pag. 26-29]

5.4. Aciunea pe culturi i organe izolateExtractul de pducel are efecte nedorite - aritmie, cronotrop negativ, asupra culturii celulare de cardiomiocite, recoltate de la murine (subfamilie de mamifere roztoare). Extractul hidroalcoolic de pducel produce relaxarea aortei, izolat din porcuori de guineea i precontractat prin administrare de noradrenalin.[footnoteRef:13] [13: Panossian A. - Phytomedicine, Ed Elvesier , vol. 10, Ediia 1, 2003, pag. 8-16]

II. PARTEA SPECIAL:Formularea de capsule retard din extract uscat de pducel

Capitolul 6. Obinerea i caracterizarea preparatului extractivFormele farmaceutice extractive sunt preparate lichide, semisolide sau solide, care conin un amestec de principii active, obinute prin dizolvarea extractiv a produselor vegetale sau biologice, cu ajutorul unui solvent sau al unui amestec de solveni.

6.1. Prepararea tincturii de pducelPentru experiment s-au folosit 40g de produs vegetal, Crataegi folium cum flore, de la firma Alevia, care a fost supus macerrii, conform FR X, cu solvent hidroalcoolic, respectiv 200g alcool diluat. Ulterior, aceeai cantitate de produs vegetal a fost supus din nou macerrii hidroalcoolice cu o nou cantitate de solvent. n final s-au obinut dou serii de tinctur. Figura 6.1.a: Pducel frunze i floriFigura 6.1.b: Produsul de macerareFigura 6.1.c: Tinctura de pducel

n urma filtrrii s-au obinut 108,42g tinctur de pducel din seria 01 i 110,2g tinctur de pducel din seria 02.Extractele uscate au o stabilitate mai bun dect extractele fluide i moi, dac sunt pstrate n condiii ferite de umiditate, unele extracte fiind higroscopice.

6.2. Evaporarea la rotavapor i distilarea n instalaie cu refrigerentDin aceste motive, n continuare, se supun distilrii, n instalaie de distilare, timp de 3 ore la 50-55oC, respectiv evaporrii la rotavapor sub presiune redus, timp de 2 ore la 50oC, 176 mbar, 180 rpm, cte 100 mL de tinctur, n vederea concentrrii produsului i a obinerii extractului de pducel sub form de mas moale, vscoas.Figura 6.2.a: Instalaie de distilareFigura 6.2.b: Extract vscosFigura 6.2.c: Rotavapor

Prepararea extractelor moi i uscate se efectueaz prin supunerea soluiilor extractive, obinute prin macerare, la diferite tratamente, pentru ndeprtarea substanelor balast i concentrarea prin distilare sau evaporare sub presiune redus, la o temperatur care s nu depeasc 50 de grade Celsius.

6.3. Uscarea la etuvPentru extractele uscate, dup ndeprtarea solventului de extracie, reziduul se usuc la etuv pentru obinere extractelor uscate. Cele dou mase reziduale moi au fost supuse uscrii la etuv, la 50oC timp de 48 de ore. La finalul procesului de obinere a extractului uscat de pducel, am obinut 1,15g extract uscat de pducel din seria 01, respectiv 0,95g extract uscat de pducel din seria 02. n urma unui calcul am constatat c pentru a obine 30 de capsule retard cu extract uscat de pducel este nevoie de 31,5 g extract uscat, pe care le obin din aproximativ 3,32 litri de tinctur de pducel, ceea ce ar duce la costuri ridicate pentru analiza de laborator.n continuare voi folosi extract de pducel de la firma Herbagetica, Piatra-Neam, iar n paralel voi analiza i pulberea obinut prin mcinarea fructelor de pducel de la firma tefMar.

6.4. Caracterizarea Pducel extract, Herbagetica Flaconul cu 70 de capsule, fiecare capsul conine 175 mg extract 4:1 din fructe de pducel i 175 mg pulbere de frunze i flori. Lot de fabricaie 771. Termen de valabilitate 28.10.2015. Soluia apoas este limpede, prezint o coloraie galben-portocalie, cu miros plcut de ceai.

6.5. Caracterizarea pulberii fructelor de pducelPulberea prezint culoare crmizie, miros specific de plante, gust dulceag, mucilaginos. Soluia apoas este limpede, prezint o coloraie galben deschis, slab uleioas, cu miros plcut de ceai. Figura 6.5.a: Fructe de pducelFigura 6.5.b: Pulbere de pducelFigura 6.5.c: Soluie apos din fructe de pducel

Capitolul 7. Evaluarea unor parametri fizico-chimici (pH, conductibilitate, spectroscopie UV-VIS) i principii active

7.1. pH-ul soluiilor de analizatSe cunoate faptul c viteza de ptrundere a lichidelor n esuturi crete n acelai timp cu temperatura i presiunea, dar scade concomitent cu creterea pH-ului. Multe substane medicamentoase sunt mai stabile la pH ntre 4 i 8.[footnoteRef:14] [14: Leucua S. Tehnologie Farmaceutic Industrial, ediia a II-a, Ed. Dacia, 2007, ISBN: 978-973-35-2297-3, pag. 394]

Pentru determinrile de pH am folosit pH-metrul. Figura 7.1.b: Evoluia pH-ului soluiilor analizateValorile de pH msurate n soluiile de analizat se ncadreaz n intervalul de pH = 5 8, ceea ce demonstreaz stabilitatea ridicat a soluiilor pe de o parte, iar pe de alt parte arat capacitatea de ptrundere a soluiilor n esuturi. Diferena de pH dintre soluiile analizate se refer la coninutul n principii active, care difer uor de la un solvent la altul i de la o form de produs analizat, la altul, respectiv tinctura obinut din frunze i flori mrunite, extract uscat i pulbere din fructe. Pulberea de fructe are un pH acid datorit principiilor pe care le are n plus fa de frunze i flori ct i datorit solventului fa de care s-a realizat msurtoarea, respectiv apa distilat.

7.2. Msurtori spectrofotometrice Majoritatea substanelor medicamentoase absorb n UV (190-390 nm) sau n domeniul vizibil (400-900nm). UV-VIS este o tehnic simpl, ieftin i uor de folosit, util pentru a identifica i cuantifica principalii compui fitochimici, discriminnd ntre compuii lipofilici i hidrofilici, n corelaie cu polaritatea solvenilor utilizai.Aplicaia practic a spectroscopiei, n aceast situaie, este de a urmri alura spectrului de absorbie a diferitelor soluii de analizat ce conin principii active din pducel. Se compar picurile spectrului de absorbie, corespunztor principiilor active reprezentative din pducel (flavonoide, acizi triterpenici, antocianidoli).

Figura 7.2.a: Comparaia curbei de absorbie a tincturii (verde tinctur s01; albastru tinctur s02, rou evaporat/distilat )Se observ curba de absorbie a tincturii din seria 01, reprezentat cu verde, ca avnd concentraia cea mai mare n principii active, comparativ cu tinctura din seria a doua i mai ales cu solvenii recuperai n urma distilrii i evaporrii, ceea ce nseamn c extractul uscat obinut conine cantiti crescute de principii active. Procedeul poate fi, deci, validat, iar studiul poate continua cu formularea de capsule retard cu extract de pducel.

7.3. Determinarea coninutului total de flavonoiziAnaliza face parte din controlul interfazic, reprezentnd o msur de siguran a coninutului n principii active, n urma tratamentelor termice pentru obinerea extractului uscat de pducel.Analiza s-a realizat pe extractul uscat de pducel, dizolvat n soluie apoas.Modul de lucruntr-o eprubet de aduc 0,25 mL extract de pducel, diluie 100 L : 1000 L, 1,25 mL ap distilat i 0,075 mL soluie NaNO2 5%, dup care se las n repaus 5 minute, reprezentnd timpul de reacie. Ulterior se adaug 0,15 mL AlCl3 10% i se las din nou n repaus 6 minute pentru a reaciona. Se aduc n eprubet 0,5 mL NaOH 1M i ap distilat pn la volum egal cu 3 mL (0,775mL). Se citete absorbia la lungimea de und de 510 nm.Figura 7.3.a: ReactiviFigura 7.3.b: Eprubeta cu proba de pducelFigura 7.3.c: Spectrofotometru

Soluia apoas obinut din extract uscat de pducel este centrifugat n prealabil pentru ndeprtarea reziduurilor insolubile, timp de 5 minute, la 40C, 5000 rpm. Pentru aceast operaie s-a folosit centrifuga Mikro200R Hettich.Dup adugarea fiecrui reactiv, proba se omogenizeaz la Vortex.Absorbia gsit la = 510 nm este 0,826.Coninutul total de flavonoizi pentru realizarea efectului terapeutic trebuie s fie de minim 0,6 g %, iar concentraia pe care am obinut-o este de 0,68 g %. Rezultatul este favorabil continurii studiului.

7.4. Comportamentul extractului uscat la variaii de pHPentru a observa comportamentul principiilor active la diferite variaii de pH se prepar 3 soluii tampon de pH egal cu 3, 7 i 9,5. Prepararea soluiilor tampon de pH1. Soluia tampon de pH= 3: ntr-un balon cotat de 200 mL se dozeaz 100 mL hidrogen ftalat de potasiu 0,1 M, se ajusteaz cu HCl pn la pH = 3 (44,6 ml) dup care se completeaz cu ap distilat pn la semn.2. Soluia tampon de pH= 7: ntr-un balon cotat de 50 mL se cntresc 29,1 mL NaOH 0,1 M, se ajusteaz cu hidrogen fosfat de potasiu pn la pH = 7, dup care se completeaz cu ap distilat pn la semn.3. Soluia tampon de pH= 9,5: ntr-un balon cotat de 200 mL se aduc 100 mL Na2B4O7 (borax) 10 H2O; 0,025 M, se ajusteaz cu NaOH 0,1 M pn la pH = 9,5 (17,6 mL), dup care se completeaz cu ap distilat pn la semn.Modul de lucruSe pregtesc 3 eprubete cu cte 1 mL de extract uscat de pducel, obinut din 350 mg extract de pducel (echivalentul unei capsule) i 50 mL ap distilat. n eprubete se adaug 9 mL de tampon 3, 7, respectiv 9,5. n final rezult 3 eprubete cu cte 10 mL soluie de pH diferit care se vor analiza fizico-chimic, att la temperatura camerei (20-250C) ct i la temperatura corpului (370C) (tabelul 10.8.a; figura 10.8.b).Tabelul 7.4.a: Valorile de pH i conductibilitate la aciunea soluiilor de pH diferitProbaConductibilitate (mS/cm)pH

200C370C200C370C

pH= 36,498,303,1253,187

pH= 720,122,67,1727,136

pH= 9.56,787,5310,10610,016

Conductibilitatea principiilor active care disociaz din pducel crete uor sub influena temperaturii, ceea ce nseamn c principiile din pducel sunt active la temperatura corpului, iar n cantitatea cea mai mare sunt disponibile la pH neutru. Figura 7.4.b: Curba de absorbie a extractului de pducel la pH diferit (rou - pH= 3; viiniu pH= 9,5; negru pH= 7)

Se observ faptul c pH-ul variaz foarte puin n soluie ceea ce arat stabilitatea substanei active n contact cu diferitele valori ale pH-ului de-a lungul tractului gastrointestinal.n ceea ce privete conductibilitatea, aceasta crete cu aproximativ dou uniti odat cu creterea temperaturii. Acest fapt arat punerea n libertate a principiilor active din extractul uscat n vederea absorbiei de la nivelul tractului gastrointestinal.Spectroscopia UV-VIS furnizeaz, de asemenea, informaii preioase despre comportamentul principiilor active n prezena pH-ului diferenial. Astfel se poate concluziona c substanele active se manifest asemntor, indiferent de pH, ceea ce ne asigur o absorbie ridicat i constant n toate poriunile tractului gastrointestinal, cu intensitate maxim la pH egal cu 3, respectiv 9,5.

Capitolul 8. Formularea capsulelor cu eliberare prelungit

Figura 8.a: Produse folosite la formularea capsulelor

8.1. Capsula gastrosolubilCapsulele gastrosolubile sunt reprezentate de capsule de gelatin, transparente, mrimea 00.Pentru experiment s-au formulat dou tipuri de capsule: unele coninnd cte 350 mg pulbere din fructe de pducel, iar celelalte, 350 mg microsfere cu extract de pducel, imprimnd capsulelor o eliberare prelungit a principiilor active. S-a optat pentru formularea a dou tipuri de capsule pentru a realiza o paralel a eliberrii principiilor active n tractul gastrointestinal.8.2. Obinerea microsferelorMicrosferele au fost obinute prin coacervare, ntr-un sistem format din metilceluloz n ciclohexan, n concentraie 2%, prin nclzire pn la punctul de fierbere (cca. 800C). n aceast soluie se introduc particule solide, insolubil n ciclohexan: pasta extractului uscat de pducel n raport de greutate 1:2 (materiale uscate). Pasta se adaug prin extrudere, cu ajutorul unei seringi de 2 ml. Amestecul se las s se rceasc sub uoar agitare, pn la temperatura camerei, are loc separarea de faz a metilcelulozei n foarte puin solvent, aceast faz bogat n metilceluloz se depune pe particulele suspendate n ciclohexan, iar n final, prin ndeprtarea solventului din faza polimerului lichid, prin filtrare, are loc ntrirea metilcelulozei pe particulele de pducel, formndu-se microsferele (fig. 11.c).Microsferele se spal cu ap, pentru a ndeprta ciclohexanul rmas pe suprafaa microsferelor, se las la uscat i se separ (fig.11.d).n final s-au obinut microsfere brune, dure, cu miros plcut de plant, de dimensiuni diferite, din lipsa unui sistem precis de dozare, care au fost repartizate n capsule prin cntrirea i numrarea microsferelor. n urma operaiei s-a gsit o medie de 55 de microsfere care corespund celor 350 mg de produs necesare pentru umplerea unei capsule.Figura 8.2.a: Coacervatul de pducel n MC 2% n ciclohexanFigura 8.2.b: Microsfere cu extract de pducelFigura 8.2.c: Microsfere cu pducel, uscate

8.3. Rezultatul formulriiProdusul final reprezint o capsul gelatinoas tare care conine n interior o capsul enteric mai mic i, pe de o parte pulbere din fructe de pducel, iar pe de alt parte microsfere din extract uscat de pducel.

Figura 8.3: Duo - capsule cu pduceln continuare, aceste dou tipuri de capsule vor fi supuse procesului de dizolvare in vitro n lichide biologice artificiale, pentru a urmri modul de eliberare a principiilor active.

III. ConcluziiLucrarea de licen reunete studii fizico-chimice, farmaceutice i farmacologige cu privire la formularea i eliberarea principiilor active prezente n specia Crataegus monogyna, condiionate ntr-o capsul cu eliberare prelungit.Pentru obinerea capsulelor cu eliberare prelungit s-au parcurs urmtorii pai: prepararea tincturii de pducel, conform FR X, pentru extracia principiilor active; supunerea tincturii unor tratamente termice pentru obinerea extractului uscat de pducel; analiza coninutului n principii active a extractului uscat; formularea coninutul capsulelor i analiza caracteristicilor acestora.La analizarea comportamentului la pH diferit, se observ faptul c pH-ul variaz foarte puin n soluie ceea ce arat stabilitatea substanei active n contact cu diferitele valori ale pH-ului de-a lungul tractului gastro-intestinal. Tot n cadrul comportrii la pH diferit, aceasta crete cu aproximativ dou uniti odat cu creterea temperaturii. Acest fapt arat punerea n libertate a principiilor active din extractul uscat n vederea absorbiei de la nivelul tractului gasto-intestinal.

IV. Bibliografie1. Reader's Digest - Farmacia naturii. Un ghid al plantelor medicinale, Ed. Reader's Digest, 2006, pag. 137-139; ISBN: 978-973-87828-7-72. Joseph et al.- Hawthorn: a literature review, Ed. Herbal Gram, 1995, 22 (1990), pag. 1933 ;3. Brown D. - The royal Horticultural society; Encyclopedia of herbs; Ed. Delhi office, London; 2008; pag.523-524; ISBN 978-1-4058-3238-54. Joseph et al.- Hawthorn: a literature review, Ed. Herbal Gram, 1995, 22 (1990), pag. 1933 ;5. Muntean L. S. - Tratat de plante cultivate i spontane, Ed. Risoprint, Cluj-Napoca; 2007; pag. 102-104; ISBN 978-973-751-463-96. Delaby M. - Oxford Dictionary of Plant Science; Ed. Oxford University Press NY; 2006; pag. 583-585; ISBN 978-019-860-891-27. Bojor O., Pop M. Fitoterapia n folosul tuturor; Ed, Medical, Bucureti, 2010; pag. 348-352; ISBN 978-973-39-0701-58. Grigorescu Em., I. Ciulei, Ursula Stnescu - Index Fitoterapeutic; Ed. Medical, 1986; pag. 402-4059. Mohan Gh. Ghidul plantelor medicinale, vol. II, Ed. Corint, 2011, pag. 157-158; ISBN 978-973-135-636-510. Istudor V. - Farmacognozie, fitochimie, fitoterapie; vol. 1; Ed. Medical; 1998; pag. 207; ISBN: 973-39-0364-711. Istudor V. - Farmacognozie, fitochimie, fitoterapie; vol. 1; Ed. Medical; 1998; pag. 208; ISBN: 973-39-0364-712. Bodea C., Frcan V., Nicoar El., Sluanschi H. Tratat de Biochimie vegetal, Editura Academiei Republicii Populare Romne, 1964, pag. 812 815, 1277 128513. Califf R.M., MD editor general - American Heart Journal, vol. 143, Ediia 5, 2002, pag. 91091514. Bowtle W. J. - Pharmaceutical Technology, 2010, pag. 26-2915. Wold L.E. - Life Sciences, vol 79, Ediia 26, Ed Elvesier, 2006, Pages 2455-246216. Panossian A. - Phytomedicine, Ed Elvesier , vol. 10, Ediia 1, 2003, pag. 8-1617. Leucua S. Tehnologie Farmaceutic Industrial, ediia a II-a, Ed. Dacia, 2007, ISBN: 978-973-35-2297-3, pag. 394

7