Diagnostic de laborator

Coci gram pozitivi

Genul Staphylococcus

• Stafilococi coagulază-pozitivi: S. aureus

• Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu importanță clinică: ex. S. lugdunensis, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. saprophyticus (mai ușor ALB și CITRIN)

Staphylococcus aureusMicroscopie electronicăSursa: CDC/Janice Haney Carr Jeff Hageman, M.H.S.

stafilococul secreta enzima coagulaza: care activează coagularea plasmei Si este un marker al virulentei.

Produs patologic- portaj: cavitatea nazală, faringe, tegumente(zona axilară, perianală)- infecții tegumentare puroiul (⇒ S. aureus)- infecții urinare urină ⇒ (SCN)- pneumonie spută⇒- meningite LCR⇒- sepsis

- toxiinfecții alimentare materii fecale, vomismente, alimente.⇒(provocate de exotoxinele preformate, existente în alimente în

care s-au multiplicat stafilococi enterotoxigeni)

- infecții nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent (MRSA)

Examenul direct al produsului patologic

- macroscopic: puroi cremos, filamentos, gălbui.- microscopic: colorația Gram: coci gram (+), dispuși în grămezi

asemănătoare ciorchinilor de strugure

Staphylococcus spp.Cultură purăColorație Gram, 100x

Staphylococcus spp.

Produs patologic Colorație Gram, 100x

Cultivare pe medii in vederea obtinerii de colonii izolate

- mediul de îmbogățire: mediul hiperclorurat Ex. Chapman- nepretențios, poate fi cultivat pe geloză simplă

Incubare aerobă la 37°C, 18 – 24 ore.

Identificarea bacteriei- Caractere morfotinctoriale: frotiu din cultură pură ⇒

coci Gram (+), în grămezi.- Caractere de cultură: col „S” cu pigment auriu

Staphylococcus aureusCultură pură, geloză simplă Colonii S, pigment galben-auriu

Staphylococcus aureusCultură pură, geloză simplă

- catalază +

- coagulaza liberă +: S. aureus;- coagulaza legată + (clumping factor - CF):

S.aureus, S. Lugdunesis

- producerea de DN-ază: S. aureus

testul DN-azei

(catalaza descompune peroxidul de hidrogen in apa si oxigen)

- Caractere biochimice:

- producere de pigment: - auriu la S. aureus- alb S. epidermidis- citrin S. saprophiticus

- Caractere biochimice:

- producerea de hemolizine – pe geloză-sânge- hemoliza ß (S. aureus, S. haemolyticus, ș.a.)- nu prezintă hemoliză (majoritatea tulpinilor SCN)

Hemoliza ß = zone largi de hemoliză clară.

- Caractere biochimice:

Staphylococcus aureusCultură pură, geloză sânge Colonii S, ß-hemolitice

Staphylococcus aureusCultură pură, geloză sângeLumină incidentă, 2x

Staphylococcus aureusCultură pură, geloză sânge, se evidențiază hemoliza ßLumină transmisă, 2x

Determinarea patogenității

- in vitro: producerea de coagulază

- in vivo: inoculare la animale de laborator

Tipizarea bacteriilor

pentru identificarea sursei de infecție- prin lizotipie (determinarea sensibilității

stafilococului față de bacteriofagi)- prin metode de biologie moleculară

Testarea sensibilității la antibiotice

- Există fenomenul de rezistență- întâi la penicilină (PENICILINAZĂ)- apoi la oxacilină- apoi la meticilină ...

- încă sensibil la Vancomicină (dar nu 100%)

obligatorie se realizeaza prin metode difuzimetrice

stafiloccocul secreta penicilinaze sau beta-lactamaze: enzime care inhiba penicilina si antibioticele beta-lactaminice, ceea ce-i confera rezistenta bacteriei la tratamentul cu penicilina si alte antibiotice similare.

Genul Streptococcus

• S. pyogenes

• S. agalactiae

• S. grup viridans

• S. pneumoniae (Pneumococ)

Streptococcus spp. (SGC) Microscopie electronicăSursa: CDC/Janice Haney Carr

Produs patologic

S. pyogenes:- secreție faringiană (angina eritemato-pultacee) - puroi (leziuni cutanate)S. agalactiae:- secreție vaginală, secreția canalului cervical – la mamă- LCR, sânge, aspirat bronșic – la nou-născut

Pneumococ:- spută, LCR, sânge

Examen directa. Examen macroscopic- S. pyogenes (amigdale cu puroi )- Pneumococ spută ruginie⇒b. Examen microscopic- col GRAM: coci Gram(+)• S. pyogenes: coci rotunzi, dispuși în lanțuri• S. de grup viridans: coci rotunzi sau ovalari

• .

Streptococcus pyogenes Cultură purăColorație Gram, 100x

Streptococcus spp. HemoculturăColorație Gram, 100x

• Pneumococii: coci lanceolați, dispuși diplo, înconjurați de o capsulă proprie

Streptococcus pneumoniae Cultură purăColorație Gram, 100x

Streptococcus pneumoniae HemoculturăColorație Gram, 100x

Izolarea bacteriei

- geloză-sânge- bulion-sânge

Identificare:

- Caractere morfo-tinctoriale- Caractere de cultură- Caractere biochimice (ex. sens. la

bacitracină)- Caractere antigenice (r. Ag-Ac)

Caractere de cultură:Streptococcus pyogenes Geloză sânge; se evidențiază hemoliza ß

Streptococcus pyogenes (SGA)

Hemoliză ßIdentificarea speciei - testul la bacitracină

Streptococcus pyogenes (sus) - sensibil la bacitracinăStreptococcus agalactiae (jos) - rezistent la bacitracină

IDENTIFICARE SGA

Streptococcus agalactiae (SGB)Geloză sânge, test CAMP pozitivHemoliză ß extinsă testul CAMP:- orizontal: S. aureus- verical: S. agalactiae

IDENTIFICARE SGB

Streptococcus spp. (non-B) Geloză sânge, test CAMP negativ Lipsa hemolizei extinse

Streptococcus pyogenes (sus)Streptococcus agalactiae (jos) Geloză sânge, test CAMP

Factorul CAMP: Christie, Atkins, Munch-Petersen

Daca cele doua microorganisme sunt cultivate în 2 striuri perpendiculare (fără să se atingă), acolo unde cele 2 striuri se învecinează, liza hematiilor (de berbec ) apare mărită, în “formă de vârf de săgeată”.

Caractere de cultură:Streptococcus pneumoniae Geloză sânge

Colonii S sau M (capsulă), cu hemoliză alfa

Caractere biochimice• pneumococul SENSIBIL la bilă și optochin• s. viridans REZISTENT la bilă și optochin

Hemoliza α : incompleta, de culoare verde datorita reducerii Hb la MethHb

Streptococcus pneumoniae

Hemoliză alfaIdentificarea speciei - testul la optochin

Streptococcus pneumoniae (sus) - sensibil la optochin Streptococcus grup viridans (jos) - rezistent la optochin

Antibiograma

- Streptococul de grup A și B sensibilitate la penicilină

- nu se efectuează ABG decât în situații speciale, de ex. hipersensibilitate la penicilină)

- Pentru ceilalți streptococi se efectuează ABG

Diagnostic serologic - evidențierea Ac(în bolile post-streptococice)

-

- Streptolizina „O” = SLO (Ag) determină ⇒formarea de Ac anti-SLO = ASLO

- ASLO crește în primele 7 zile până în săptămânile 3-4 când se menține în platou și apoi scade

titrul general acceptat 200-250 unităti ASLO/ml

dg serologic – reactia ASLO

Cand?

Ce determinam?

Cum?

dg serologic – reactia ASLOSe utilizeaza in dg retrospectiv al infectiilor streptococice sau pt dg bolilor

poststreptococice; determinam titrul de anticorpi anti streptolizina O.

PRINCIPIUSLO are efect hemolitic asupra hematiilor de berbec. Daca in serul pacientului exista anti-SLO actiunea hemolitica a SLO e neutralizata.

Prin dilutii in tuburi se determina titrul ASLO.

TEHNICA1. O cantitate constanta de SLO + serul pacientului in dilutii binare in tuburi 2. Incubam 15minute la 37° C3. Se adauga suspensia de hematii 4. Incubam 45 minute la 37° C5. Centrifugam si pastam tuburile la frigider pana a doua zi

RSN – dg serologic – reactia ASLO

12 50 100 125 166250

INTERPRETARETitrul reactiei ASLO e dat de cea mai

mare dilutie de ser in care lipseste complet hemoliza.

- Dg (+) la titrul de 1/200 UI/ml- Val < 1/200 UI/ml nu există infecție ⇒streptococică- Val > 1/200 UI/ml este infecție ⇒streptococică în evoluție.