Rol surse utilizariInca din antichitate erau cunoscute proprietatile vindecatoare ale mararului. Datorita puterii care ii era atribuita s-au nascut superstitii si practici magice in care aceasta planta era implicata. De exemplu se folosea la vrajile de dragoste sau vechii greci purtau o legatura de marar la incheietura mainii stangi, cu credinta ca in felul acesta vor fi protejati impotriva epilepsiei si a altor boli mentale.Astazi se stie ca mararul este util in afectiunile digestive cel mai adesea. Infuzia din seminte indeplineste rol diuretic (stimuland activitatea rinichilor, prevenind si combatand calculii renali) si expectorant, calmeaza tulburarile digestive, cu precadere crampele. O cantitate crescuta din aceasta infuzie induce efectul laxativ. Infuzia din seminte de marar este recomandata in indigestie, colita, hipoaciditate, gastrita, balonare, flatulenta. Trateaza infectiile renale si cistitele. Mararul are calitatea de a induce senzatia de satietate. Aceasta, impreuna cu rolul diuretic mai sus mentionat, recomanda planta in curele de slabire. Mai mult decat atat, el si-a dovedit eficienta si in combaterea celulitei. Tulpina de marar, mestecata, inlatura durerile de cap, combate astenia nervoasa si energizeaza organismul.Foarte bogat in calciu, mararul incetineste procesul de pierdere a masei osoase (osteoporoza); de asemenea, el abunda in fibre, fier, magneziu, potasiu, fosfor, cupru, vitamine (A, B1, B2, B3, C, E, PP). Fibrele din marar reduc colesterolul din sange, iar potasiul normalizeaza presiunea sangelui (o presiune ridicata determinand infarctul sau atacul de cord). Semintele de marar sunt si antispastice, ajutand in caz de sughit rebel, de natura nervoasa (se zdrobesc usor semintele si se amesteca cu putina miere). Au si efect sedativ (combat insomnia) si amelioreaza senzatia de voma.Ca si usturoiul indeplineste si functie antibacteriala, uleiul de marar impiedicand raspandirea bacteriilor.Indicatii:anorexie, indigestii, cardiopatii, ateroscleroza boli ale cailor urinare, hemoroizi, meteorism, colici intestinale, dureri menstruale, impotriva sughitului, pentru stimularea si tonifierea organismului, insomnii, stari de voma ale gravidelor.

Actiuni:stomahic, carminativ, antispastic, diuretic, antiinflamator, favorizeaza digestia si eliminarea gazelor din intestine, combate hemoroizii, mareste cantitatea de secretii urinare si lactate, sedativ nervos, antiemetic, emenagog.Mararul detine o anumita cantitate de hormoni feminini (estrogeni), ceea ce face din aceasta planta un aliat al sexului frumos. Estrogenul are rol de incetinire a procesului de imbatranire; de infrumusetare a aspectului pielii; reglarea menstruatiei, atat periodicitatea cat si cantitatea, reducand abundenta; diminuarea simptomelor menopauzei (se iau zilnic doua lingurite de pulbere de marar). Avand rol energizant, ajuta femeile insarcinate sa treaca mai usor peste greutatea fizica implicata de sarcina, iar femeilor care alapteaza le stimuleaza lactatia si reduce colicii bebelusului.Uleiul de mararil puteti prepara si in casa dar cel mai indicat este uleiul presat la rece pe care il gasiti in magazinele de specialitate.Reteta pentru prepararea uleiului: 12 lingurite de pulbere de marar rasnita proaspat se pun intr-un borcan peste care se adauga o jumatate de litru de ulei de floarea soarelui presat la rece. Se inchide ermetic si se lasa la macerat timp de 12 zile. Se lasa la rece si se amesteca zilnic. Inainte de utilizare se filtreaza prin tifon. Uleiul se pune n sticlue mici, nchise la culoare i se pstreaz la rece. Masajul cu acest ulei are efecte excepionale pentru creterea i (re)dobndirea fermitii snilor. Tratamentul consta in masarea zilnica a sanilor, seara inainte de culcare, timp de 10 minute. Se umezesc bine palmele cu ulei, dup care se face masajul cu micri circulare uoare ctre exterior i interior, dar i de la baza snului spre mamelon, la ambii sni simultan, timp de o luna. Dublat de tratamentul intern, cu tinctur de semine de mrar, masajul are efecte extrem de puternice, fiind un nlocuitor foarte bun pentru nocivele i artificialele implanturi cu silicon.Chiar si barbatii se pot bucura de aceste ,,preparate, intrucat le creste vitalitatea, apetitul si potenta sexuala, iar masa corporala creste si ea armoniosTinctura din semine de mrarare un efect hormonal natural extraordinar, efectul estrogen (hormonul feminitatii) provocnd o cretere rapid n volum a snilor. n cteva sptmni, snii devin vizibil mai mari n volum, dar i mai fermi. Tinctura preparata acasa se face din 20 de linguri de semine de mrar, care se amestec n 1/2 l de alcool alimentar de 70 de grade, dup care se las la macerat 8 zile i se filtreaz. Se iau 3-4 lingurie de tinctur pe zi, dizolvat n ap. Tratamentul dureaz o lun, n paralel cu masajul cu ulei din semine de mrar i se reia la nevoie.

2.1.3. Extracie cu ultrasunete (sistem corn la 20 kHz)Experimentele sonicare sunt realizeaz printr Branson W-450 sonicator echipat cu un corn, submersibil, care emite vibraii sonore la o frecven redus de 20 kHz prin intermediul unei tije din aliaj de titan (cu diametrul de 13 mm) mbibate n mediul de extracie lsnd 1 cm de jos a balon.

Fructele mrar fulgi sunt tratate cu ultrasunete ntr-un balon cu dou-manta (150 ml volum), care este nchis pe partea superioar cu un capac care conine trei intrri. Primul este utilizat pentru cornul ultrasunete, a doua intrare este conectat la un cooler pentru a asigura reflux de solvent, n cazul de supranclzire produse de ultrasunete, iar ultima este nchis i numai rezervat pentru prelevarea de probe (Fig. 2). Diferena de temperatur nregistrat ntre cea mai mare parte a soluiei i lichidul de rcire se datoreaz nclzirii produsa prin sonicare. Pentru aceasta, temperatura mediului este meninut la aproximativ 40 C prin circularea amestecului ap-etilen glicol n dublu jacheta. Este important s reinei c puterea de ieire a generatorului de ultrasunete este setat la 120 W corespunde la o amplitudine de 76 um, conform indicaiilor productorului (poziia 5, 75% din puterea total a sugerat n tabelele furnizate pe Branson W-450 manual) livrarea respectiv o putere disipat n form de cldur n mediul, de 60 W pentru hexan i 80 W pentru apa msurat prin calorimetrie. Aceast diferen se datoreaz n principal diferena vscozitate ntre ap (0,65 mPa / s la 40 C) (Kestin, Sokolov, si Wakeham, 1978) i hexan (0,26 mPa / s la 40 C) (Landolt-Borstein, 1969), unde vscoziti mai mari provoca rezisten mai mare la unde ultrasunete, prin urmare, o fraciune mai mare de energie este disipat n nclzire.

IDENTIFICAREA CARVONEI CG

Chiral Analiza GC a carvona enantiomeri n uleiuri eseniale

D-Carvona i L-carvon sunt compui enantiomerici care au foarte diferite mirosuri. Aceti compui imagine n oglind a oferi diferite note aromatice. D-Carvona este compusul principal gsite n ulei esential de semine de chimen, i o component mare de ulei esenial de mrar semine. L-Carvona este unul dintre compuii majore identificate n uleiuri eseniale ment. Rezolvarea enantiomerii carvona este o aplicaie dificil care necesit folosirea unei coloane capilare GC chiral pentru a efectua separarea. n acest studiu, vom demonstra separarea D- i enantiomerilor L-carvon n probele de semine de chimen, semine de mrar, ment matern i scotch menta uleiuri eseniale utiliznd o coloan capilar GC Astec CHIRALDEX G-TA.

Astec CHIRALDEX G-TA este un 2,6-di-o-pentil-3-trifluoracetil derivat gamma capilar ciclodextrina coloan GC care are cea mai mare selectivitate pentru oxigen care conin compui, cum ar fi alcooli, cetone, acizi, aldehide i lactone. Aceast faz staionar este prima alegere a Grupului 1 fazele staionare chirale care utilizeaz n mod obinuit interaciunile suprafa ca unul dintre mecanismele de separare primar.ExperimentalUn amestec de D- i L-carvon, cu L-enantiomer n exces concentrare, a fost analizat mai nti pe coloan ASTEC CHIRALDEX G-TA pentru a determina modelul de eluare a compuilor. Condiiile de analiz GC sunt rezumate n Tabelul 1. Identificarea vrf a enantiomerilor carvon sa realizat prin D- individual i L-carvon Table 1. GC Conditions

column:oven:inj. temp.:detector:carrier gas:injection:Astec CHIRALDEX G-TA, 30 m x 0.25 mm I.D., 0.12 m (73033AST)40 C (1 min), 2 C/min to 170 C (15 min)250 CFID, 250 Chelium, 25 cm/sec (set @ 110 C)wet needle, 100:1 split

abelul 1. Condiii GCcoloana:cuptor:inj. temp .:detector:gaz purttor:injecie: Astec CHIRALDEX G-TA, 30 mx 0,25 mm ID, 0,12 pm (73033AST)40 C (1 min), 2 C / min pn la 170 C (15 min)250 CFID, 250 Cheliu, 25 cm / sec (set @ 110 C)ac umed, 100: 1 Split

Semine chimen , semine de mrar , ment matern i scotch ment probe eseniale de ulei au fost fiecare evaluate ca uleiuri pure pentru a determina profilurile lor dactiloscopice i pentru a identifica nativ vrf carvona enantiomer . Semine chimen i uleiuri eseniale de semine de mrar au fost apoi ghimpat cu L - carvon , i ambele menta uleiuri eseniale au fost apoi ghimpat cu D - carvona . Toate cele patru probe inte au fost reevaluate pentru a determina dacenantiomerul ghimpat poate fi dizolvat dinnatural care apar enantiomerul carvona prezente nuleiul

Pe scara larga se aplica extractia continua in aparatura speciala (extractoare Soxhlet) in care, de obicei, solventul proaspat este furnizat prin fierberea extractului. Aceasta metoda se bazeaza pe o diferenta mare dintre punctele de fierbere ale solventului si cele ale analitilor extrasi. Pe baza acestei proprietati extrasul este adus la temperatura de fierbere a solventului, care va condensa intr-un refrigerent si va reveni in cartusul care conyine proba de extras. Prin realizarea mai multor cicluri de extractie, randamentul procesului poate fi controlat astfel incat randamentul de extractie sa fie maxim [6]. Extractorul Soxhlet se compune dintr-un balon, un corp de extractie si un refrigerent ascendent, legate intre ele (fig.3). Materialul solid, maruntit in prealabil pentru ca solventul sa vina in contact cu o suprafata cat mai mare, se aseaza in spatiul de extractie, fie introdus intr-un cartus special de hartie de filtru, fie pus direct in spatiul de extractie prevazut cu un fund de sticla poroasa. Faza extractoare (solventul) din balonul de fierbere distila printr-un tub lateral, prevazut eventual cu o izolatie termica, iar vaporii condensati in refrigerentul de reflux picura peste materialul din cartus. Cand spatiul de extractie se umple pana la inaltimea stratului de preaplin, solutia cu extract trece prin sifonare in balonul de fierbere si procesul se repeta. Uneori sunt suficiente cateva ore pentru extractia completa, insa la substantele care trec mai greu in solutie sunt necesare chiar cateva zile. Solutia obtinuta este mutata din extractor si pompata in evaporator pentru a fi concentrata la o temperatura cat mai scazuta posibil. Principalul dezavantaj al extractiei cu solventi este acela al contaminarii probei cu solvent sau al impuritatilor din solvent, care trebuie sa fie eliminate complet. Doua inconveniente principale pot totusi interveni in cadrul tehnicii de extractie Soxhlet. Primul se refera la faptul ca extractul este expus pe tot parcursul procesului la temperatura de fierbere a solventului, care daca este foarte ridicata, poate afecta unii analiti din proba, labili din punct de vedere termic. Al doilea inconvenient il constituie concentratia mica in final datorita cantitatii mari de solvent utilizata; o parte din solvent ar putea fi inlaturata prin antrenare cu un curent de gaz inert, dar acesta poate antrena pe langa solvent si o parte din analitii extrasi in el. Utilizarea de solventi cu puncte de fierbere foarte joase poate inlatura aceste doua inconveniente.

2.1.2. Extracie asistat de microundePentru extracia asistat de microunde, acelai sistem de extracie utilizat pe experimentul de control este expus la putere microunde la 2.45 GHz ntr-un aplicator val-ghid utiliznd un cuptor cu microunde concentrat pe baza echipamente Prolabo microunde (Fig. 1), care a fost adaptat de ctre electromagnetice Echipa de energie (EME), la Food & Innovation Group la WUR (ex. ATO-DLO, rile de Jos). Sistemul este echipat cu un senzor infrarou conectat la un microcalculator, care controleaz sistemul i asigur reglarea putere de intrare, i poate genera o putere maxim de 1200 W. Aproximativ 1 g de fructe de mrar fulgi cu 20 ml de solvent (hexan sau ap ) sunt plasate ntr-un balon de 100 ml conectate la partea superioar a unui rcitor ca un mijloc de a asigura reflux solvent, apoi vasul este plasat pe sistemul microunde.

Chen si Spiro (1994) care a studiat extracia asistat-microunde de frunze de rozmarin indicat c prin creterea puterii, concentraia celor trei componente majore a fost crescut, iar etapa de inducie a disprut. Acest rezultat a fost confirmat atunci cnd creterea puterii ntre 50 i 150 W pe studii care implica Carum carvi L. (semine Apoi mirosul dulce, AIT-Amar, Lagha, si Esveld, 2005), dar nu randamente de extracie mai mari au fost nregistrate la putere mai mare. n plus, concluziile lor a recunoscut c o putere continu de 120 W timp de 30 minute este suficient pentru recuperarea total a carvon i limonen.

n acest caz, experimentele preliminare au indicat, de asemenea, c iradierea cu microunde continua la 120 W timp de 30 min, rezultnd un aport de energie total de 0,06 kWh, st ca condiiile optime de recuperare pentru a obine cel mai mare randament carvon din fructe de mrar.

2.1.3. Extracie cu ultrasunete (sistem corn la 20 kHz)Experimentele sonicare sunt realizeaz printr Branson W-450 sonicator echipat cu un corn, submersibil, care emite vibraii sonore la o frecven redus de 20 kHz prin intermediul unei tije din aliaj de titan (cu diametrul de 13 mm) mbibate n mediul de extracie lsnd 1 cm de jos a balon.

Fructele mrar fulgi sunt tratate cu ultrasunete ntr-un balon cu dou-manta (150 ml volum), care este nchis pe partea superioar cu un capac care conine trei intrri. Primul este utilizat pentru cornul ultrasunete, a doua intrare este conectat la un cooler pentru a asigura reflux de solvent, n cazul de supranclzire produse de ultrasunete, iar ultima este nchis i numai rezervat pentru prelevarea de probe (Fig. 2). Diferena de temperatur nregistrat ntre cea mai mare parte a soluiei i lichidul de rcire se datoreaz nclzirii produsa prin sonicare. Pentru aceasta, temperatura mediului este meninut la aproximativ 40 C prin circularea amestecului ap-etilen glicol n dublu jacheta. Este important s reinei c puterea de ieire a generatorului de ultrasunete este setat la 120 W corespunde la o amplitudine de 76 um, conform indicaiilor productorului (poziia 5, 75% din puterea total a sugerat n tabelele furnizate pe Branson W-450 manual) livrarea respectiv o putere disipat n form de cldur n mediul, de 60 W pentru hexan i 80 W pentru apa msurat prin calorimetrie. Aceast diferen se datoreaz n principal diferena vscozitate ntre ap (0,65 mPa / s la 40 C) (Kestin, Sokolov, si Wakeham, 1978) i hexan (0,26 mPa / s la 40 C) (Landolt-Borstein, 1969), unde vscoziti mai mari provoca rezisten mai mare la unde ultrasunete, prin urmare, o fraciune mai mare de energie este disipat n nclzire.

2.1.5. GC / FID i GC / MS analizenainte de a analiza extractelor hexan, non-volatile gliceridele acizilor grai au fost convertite folosind hidroxid de potasiu metanolic n glicerol i esterii lor metilici respective ale acizilor grai aa cum este descris n alt parte (Apoi mirosul dulce i colab., 2005). Este important s reinei c probele obinute de la experimente folosind apa ca solvent au fost transmise direct pentru analiz, fr derivatizare.Probele au fost analizate folosind Varian stele 3600 gaz-cromatograf echipat cu un sampler-auto, un injector capilar i un control releu pentru funcionare automat. Probe de 0,2 pL au fost injectai (temperatura injecie 270 C), cu un raport de divizare 10 pe un polidimetilsiloxan 100% DB-1 coloan (60 m, id 0,253 mm, grosimea filmului 0,25 pm), care a fost perfuzat cu heliu. Temperatura coloanei a fost programat la 80 C timp de 2 min, dup care temperatura a fost crescut la 240 C cu o vitez de 15 C / min. Secvena a fost terminat dup 20 de minute de funcionare izoterm la 240 C. n timpul analizei, curentul de ionizare a fost msurat folosind un detector de ionizare cu flacr (FID) operat la 280 C. Factorii de calibrare pentru limonen i carvon n privina metil decanoat (standard intern) au fost determinate din cromatograma trei produse puse mpreun ntr-o prob care conine 400 mg din fiecare dizolvat n 100 ml (4 g / l). Ca urmare, am obinut factori de calibrare corespunztoare 0.868 i 0.722 de carvon i limonen respectiv.Pentru a identifica uleiuri volatile i extract, probele au fost analizate cu un cromatograf gaz Finnigan GC8000TOP conectata la un Finnigan Automass tip 30 detector de mas selectiv care opereaz n modul de scanare (m / z 25 - 300). Impact electronic masa analiz spectral a fost realizat la energie de ionizare de 70 eV (temperatur a sursei de ionizare = 150 C; curent = 600 mA; PM = Tensiune 600 V). Analiza a fost efectuat folosind CP-Ceara 52CB coloan semipolar (50 m, id = 0,32 mm, grosimea filmului = 1,2 um), care a fost perfuzat cu heliu utiliznd un raport de divizare 40. Temperatura coloanei a fost programat izoterm la 90 C timp de 3 min; apoi a fost mrit la 220 C cu o vitez de 15 C / min i luate izoterm timp de 4 min. n continuare, temperatura a fost crescut la 250 C, cu o vitez de 10 C / min, dup care secvena a fost terminat dup 20 min de funcionare izoterm la 250 C (presiunea coloana: 150 kPa, debit: 0,3 ml / min ). Produsele volatile au fost identificate prin comparaie cu spectre de mas de standarde disponibile i NIST / EPA / v4.5 baza de date NIH MS (o colecie de spectre de mas de la software LUCY v3 AutoMass) cu ajutorul unui sistem computerizat.

Avantajele extractiei Soxhlet sunt urmatoarele: este un proces continuu, dupa procesul extractiv nu mai necesara filtrarea, consumul de solvent este mai mic decat in cazul macerarii. Tehnica nu este dependenta de matrice (de natura materialului procesat) si multe extractoare Soxhlet pot fi configurate pentru a functiona nesupravegheat. Dezavantajele cele mai importante ale extractorului Soxhlet sunt: timp indelungat de extractie (24 48 ore), cantitate mare de solvent utilizat, necesitatea aplicarii procesului de evaporare a probei obtinute dupa extractie (pentru purificarea si indepartarea compusilor secundari). Infuzare: consta in umectarea produsului vegetal maruntit cu apa, cu exceptia produselor vegetale contin uleiuri volatile care se umecteaza cu o solutie de alcool diluat; dupa cca.5 minute se adauga masa de apa prevazuta, incalzita la fierbere si se lasa in contact timp de 30 minute [5]. Dupa scurgerea timpului de infuzare, solutia se filtreaza. In general infuzarea se utilizeaza in cazul partilor de planta care au peretii celulari mai subtiri (flori, frunze, parti ierbacee).

Extractie cu ultrasunete (Sonicare) Extractia asistata de ultrasunete (UAE) este una dintre cele mai importante tehnici folosite pentru extractia compusilor valorosi din materialele vegetale [22] si este destul de adaptabila la o scara redusa sau mai larga (de exemplu, in laborator sau la scara industriala) [23]. Comparand aceasta tehnica cu altele, cum ar fi extractia asistata de microunde (MAE), aparatul cu ultrasunete este mai ieftin si este mai usor de manipulat [24]. Undele ultrasonice sunt folosite pentru extractia compusilor activi din diferite plante, cum ar fi: saponinele, steroizii si triterpenele din Chresta spp., care se obtin de trei ori mai rapid prin aceasta metoda decat prin metodele conventionale de extractie [25], rutin si quercetin din Euonymus alatus (Thunb) Sieb [26], si acid carnosic din Rosmarinus officinalis[27, indicand ca aceasta metoda este utila pentru extractia constituentilor termic sensibili care sunt folositi in industria alimentara, in produsele de ingrijire corporala, cosmetica si industria farmaceutica. Metoda implica utilizarea de ultrasunete, cu frecvente variind de la 20 kHz la 2000 kHz, aceastea crescand permeabilitatea peretilor celulari si producand liza celulelor, favorizand astfel extractia de compusi biologic activi. Extractia asistata de ultrasunete permite solventului sa patrunda prin peretii celulari, iar bulele produse de cavitatia acustica favorizeaza ruperea peretelui celular si eliberarea compusilor activi, determinand astfel cresterea randamentului de extractie [28-30]. Prin urmare UAE are eficienta ridicata, desi necesita energie scazuta, cantitati mici de solvent si perioade scurte de timp pentru desfasurarea procesului de extractie. Curs de Procesare avansata a plantelor medicinale __________________________________________________________________________ 19 Extractia prin sonicare este mai rapida decat extractia Soxhlet (30 - 60 min. per proba) si permite folosirea unei cantitati mai mari de proba, determinand un cost relativ scazut. Dezavantajul consta insa in faptul ca foloseste la fel de mult solvent ca extractia Soxhlet, presupune o munca intensiva si necesita filtrare dupa extractie. In comparatie cu extractia asistata de microunde (MAE), extractia asistata de ultrasunete (UAE) prezinta ca principal avantaj faptul ca lucreaza la temperatura mediului ambiant, evitandu-se astfel expunerea la temperatura a compusilor extrasi din materiale vegetale si posibila lor deteriorare, un lucru important pentru industrie.

BIOSINTEZA CARVONEI

Modelul de carvon i acumularea limonen n fructe de chimen poate fi explicat prin nivelul de schimbare a activitilor enzimatice de biosintez timpul dezvoltarii de fructe. In primele stadii de dezvoltare, atunci cnd doar limonen acumuleaz, enzima care convertete limonen a trans-carveol poate fi inactiv (Fig. (Fig.1) 0.1). ntr-o etap ulterioar, atunci cnd att limonen i carvona se acumuleaz, raportul de limonen la carvona fiind formate poate depinde activitile relative ale enzimelor din calea. In cele din urma, atunci cnd acumularea limonen i carvona a ncetat, una sau mai multe dintre enzimele din calea nainte limonen posibil sa fie inactivate. Alternativ, formarea altor componente ale fructului de dezvoltare, cum ar fi proteinele de depozitare, amidon, sau triacilgliceroli, pot devia fluxul de carbon distan de biosinteza monoterpene.

Pentru a intelege mai bine mecanismele de reglementare modificrile de dezvoltare ale limonen i acumulare carvon n fructe de chimen, am investigat calea de limonen i biosinteza carvon din omniprezente C10 intermediar GPP. Activitile celor trei enzime implicate au fost demonstrate, iar specificul lor substrat determinat. In plus, am studiat apariia enzimelor biosintetice relevante timpul dezvoltrii fructelor n chimen anuale i bienale n legtur cu formarea monoterpene i acumularea de triacilgliceroli, rezerva mare de semine.

GC MS analiz (n modul ioni monitorizare selectate) produselor de limonen test sintetazei folosind octakis- (6-O-metil-2,3-di-O-pentil) --ciclodextrina ca faz staionar chiral. Ionii monitorizai: pentru limonene, m / z 68, 93, i 136; pentru carvon, m / z 82, 108, i 150; pentru trans-carveol, m / z 84, 109, i 152; i pentru cis-carveol, m / z 84, 109, i 134. O, compui de referin. B, produs de sintaza limonen parial purificat

n a doua etap a cii carvon, limonen a fost convertit la trans-carveol printr-o activitate care necesit NADPH de peleta 150,000g, amintind de microzomale Cyt P-450 hidroxilaza de ment, anterior implicate n transformarea (-) - limonen la (-) - trans-carveol (Gershenzon .a., 1989;. Karp i colab., 1990). Hidroxilarea (+) - limonen aprut cu regio- ridicat i stereospecificitate. (+) - Trans-Carveol alctuit 97% din produsul total, (-) - trans-carveol la 2,5% i (-) - cis-carveol la 0,5% ca i produsele minore. Teste de amestecuri de (-) - i (+) - limonen artat c (-) - limonen fost utilizat ca substrat de ctre aceast enzim dar la doar aproximativ 10% din rata de (+) - limonen i cu (-) -cis-carveol ca produs principal.

(+) - Trans-Carveol este convertit la (+) - carvon n a treia i ultima etap a secvenei de reacie. Fraciunea de supernatant de extracte de fructe de chimen avea o trans-carveol dehidrogenaz foarte activ. Aceast enzim prezentat o optim pH de aproximativ 10 i a artat o cerin absolut pentru NAD +. NADP + nu a putut nlocui NAD +, i nu ar putea aciona sinergic cu NAD +. La un pH de 10,5, care a fost folosit in mod curent in experimente pentru a caracteriza aceast activitate, fr alcool general (etanol) dehidrogenaz a fost detectat, determinat spectrofotometric cu etanol ca substrat (290 mm) i un amestec de NAD + i NADP + (la 1 mm fiecare) ca cofactori (Sangwan colab., 1993). Etanol substanial dehidrogenaz fost detectat la pH 8,0.

Carveol dehidrogenaza expuse preferinta moderata pentru substratul su natural, (+) - trans-carveol (tabelul (TableII) .II). Dintre substraturile testate, amestecul de (+) / (-) - trans-carveol dat cea mai mare activitate. (-) - Cis-Carveol prezentat de asemenea activitate semnificativ, dnd aproximativ 65% din activitatea (+) / (-) - trans-amestecul carveol. Activitatea foarte sczut, cu (-) - trans-carveol ca substrat (5% din activitatea observat cu [+] / [-] - amestec trans-carveol) a sugerat c enzima este foarte sensibil la substrat chiralitate, un supoziia confirmat prin analiza GC-MS pe o faz staionar chiral a produselor i substraturile nereacionate (Fig. (Fig.3) 0.3). ntruct amestecul de (+) - i (-) - trans-carveols fost convertit la (+) - carvona (Fig (Fig.3B), 3B.), Pur (-) - enantiomerul nu a dat produse detectabile ( Fig. (Fig.3D) .3D). n schimb, pentru cis-carveols, att (+) / (-) amestec (Fig (Fig.3C) 3C.) i pur (-) - enantiomerul (fig. (Fig.3E) 3E) au fost transformai cu uurin (-) - carvona. Testul cu (-) - cis-carveol (. Figura (Fig.3E) 3E) furnizeaz dovezi suplimentare ale unreactivity de (-) - trans-carveol cu acest preparat enzimatic, deoarece (-) - trans-izomerul este o impuritate urme (0,8%) din (-) - cis-carveol folosit ca substrat. (-) - Trans-Carveol alcatuit mai puin de 1% din substrat nainte de reacie, dar reprezenta aproximativ 25% din carveols neconvertite dup reacie.

GC-MS analizele (n modul ioni monitorizare selectate) produselor de carveol teste dehidrogenaz folosind octakis- (6-O-metil-2,3-di-O-pentil) --ciclodextrina ca faz staionar chiral. Ionii monitorizai: pentru limonene, m / z 68, 93, i 136; pentru carvon, m / z 82, 108, i 150; pentru trans-carveol, m / z 84, 109, i 152; pentru cis-carveol, m / z 84, 109, i 134. O, compui de referin. B pn la E, articole de carveol dehidrogenaz cu (+) / (-) - amestec trans-carveol (B), a (+) / (-) - amestec cis-carveol (C), (-) - trans- carveol (D), i (-) - cis-carveol (E) ca substraturile

BIBLIOGRAFIE

http://www.paradisulverde.com/Magazin-On-line/Altele/Uleiuri/ULEI-MARAR-100ml-SOLIO.html referinta 1

referinRavid , U .; Putievsky , E .; Katzir , I .; Weinstein , V .; Ikan , R. , analiza GC chiral a ( S ) ( + ) - i ( R ) ( - ) - carvona cu puritate ridicat n enantiometric chimen , mrar i ment uleiuri . Aroma si parfumul Journal 1992 , 7, 280-292 .

http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/analytical/food-beverage/chiral-gc-carvone.html

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC34944/#Methods BIOSINTEZA

https://www.chem.agilent.com/Library/slidepresentation/Public/Flavors_RTL_Databases.pdf