Absolventul: IMAD EL YAAGOUBI

Indrumatori:Sef Lucrari: Conf. Univ. Dr MIHAELA MIRELA BRATUCercetator Stiintific principal: Dr MIRCEA CRISMARU

STUDIUL UNOR PREPARATE CU EFECT IMUNOMODULATOR EXTRASE

DIN ALGE MARINE

INTRODUCERE

Algele marine prezinta o complexitate chimica deosebita , putand fi considerate ca surse de mare viitor in industria farmaceutica.

 Cercetarile efectuate asupra fitoplanctonului Marii

Negre se inscriu in linia generala de pe plan mondial , in multe privinte.

Lucrarea de fata si-a propus studierea efectului unor extracte de alge marine provenite din Marea Neagra asupra diviziunii leucocitelor .

Acest studiu , reprezinta o etapa necesara de evidentiere a efectelor biologice in vitro pe care aceste extracte , prelucrate dupa o metoda originala, le poseda.

ALGELE MARINE

Algele (incr. Phycophyta) sunt organi-sme vechi, procariote si eucariote , unicelulare si pluricelulare, care au mare raspandire in mari si oceane.

Algele marine sunt : aproape toate algele brune ( Cl. Phaeophyceae) , Majoritatea algelor rosii (Cl. Rhodo-phyceae) si unele algi verzi (Cl.Chlorophyceae).

SPALARE CU APA

DE MARE

SPALARE CU APA DULCE

SPALARE CU APA DULCE

COLECTAREA MATERIEI

PRIME

SUCURGERE PRIN SITE CU

OCHIURI DE 1 CM2

SUCURGERE PRIN SITE CU

OCHIURI DE 1 CM2

Apa de spalare in amestec cu

Nisip si alte materiale

Apa de spalare in amestec cu

Nisip si alte materiale

FRACTIUNECU GRANULATIE

MARE

FRACTIUNECU GRANULATIE

MARE

La 40-50 °C inetuva

La 40-50 °C inetuva

Moara cu ciocaneMoara cu ciocane

Dispozitiv cu site vibratorii

Dispozitiv cu site vibratorii

PULBERE FINACU GRANULATIE 0,15-0,20

PULBERE FINACU GRANULATIE 0,15-0,20

PROCEDEU DE OBTINERE A CONCENTRATULUI DIN ALGE MARINE

 

CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGELE MARINE(1/3)

Analiza organoleptica

Aspect Pulbere fina, semifina, cu granulatie intre 0,15-0,20 mm

Culoare

Bruna-cenusie

Miros Specific de organisme marine

Gust Specific de iarba uscata

Substanta uscata, % fata de pulbere 96,70,3 Incalzire la 105 °C (FR X)

Cenusa % 15,00,1 Calcinare la 550°C

Componente minerale, % fata de pulbere :

-alcaline Na,K 

 25,00,1

 

Alcalino-pamantoase Ca, Mg 40,00,1  

 Metale grele :

I.                   

       II.              Flamfotometrie

III.           Fe 1205,0

Cv 2,00,4

Mn 450,5

NI 7,10,2

Cu 12,00,1

Zn 98,40,4

Pb 8,70,3

CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGE MARINE(2/3)

Analiza fizico-chimica si biochimica a extractului de algeParametru Rezultate Metode

Analiza fizico-chimica (Continuare)

CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGELE MARINE(3/3)

Substanta organica totala,% fata de pulbere

81,00,3  

Componente organice , % fata de total s.o.:  

   

 

Proteine 4,03,0 Azotat total Kjeldahl

Glucide totale 35,03,0 Fenol-acid sulfuric Dumas

Lipide totale 10,02,0 Extractie cloroform-metanol Kates

Ne-identificate 15,0  

Solubilitate in apa , % 6,5-8,0 La 20 °C in raport 1 :10 g/ml

Componente hidrosolubile : 

   

Proteine, mg/g pulbere 1,50,1 Folin-Ciocalteau

Hexoze libere mg/g pulbere 2,07  

Activitate enzimatica:    

Catalaza µmoli H2O2/min/mg

proteina

26,500,1 Sinha cu K2Cr207

Superoxid dismutaza SOD U/mg Proteina

0,1500,005 Winterbourn

Amilazica m UI/mg proteina 5,00,5 Wohlgemuth

Determinarea β-carotenului s-a facut prin metoda colorimetrica a lui Willstater si Stoll, modificata, folosind ca substanta de referinta β-caroten: sol. 2,5 mg % in benzen.

Acidul ascorbic s-a derminat print-o metoda titrimetrica .

Principiul metodei: Acidul acorbic ese oxidat cu ajutorul dicromatului de potasiu in prezenta KI.

Excesul de ion dicromat reactioneaza cu ionii iodura , eliberand iod.

Cr2O72+ + 9 I- + 14 H+ 3 [I3]

- + 2 Cr3+ 7H2O

Iodul eliberat coloreaza mediul de reactie cu amidon in albastru

METODE

TESTUL DE STIMULARE A BLASTIZARII LIMFOCITARE

Principiul metodei:Limfocitele din sangele periferic sunt cultivate pe perna de hematii,in prezentaunor molecule cu efect mitogen (fitohemaglutinina,) timp de 72 ore.Sub actiunea mitogenilor (lectine) celulele sufera procesul de transformare si evolutia raspunsului mitotic dende de mitogenul folosit dar si de statusul fiziologic si de tipul celulelor (T sau B) .Fitohemaglutinina stimuleaza blastizarea limfocitelor de tip T.Intensitatea transformarii limfocitelor este determinata prin numararea mitozelor observate dupa blocarea diviziunii celulare cu colchincina si colorarea materialului nuclear cu solutie Giemsa.

  Mediu RPMI

1640 (mL)

Ser fetal de

vitel(mL)

Penicilina(UI/mL)

Streptomicina(UI/mL)

PHA (µg/mL)

Alge(µg/mL)

Sange (mL)

Proba 1 5 0.5 1000 0.25 30 - 0.5

Proba 2 5 0.5 1000 0.25 30 40 0.5

Proba 3 5 0.5 1000 0.25 30 80 0.5

Proba 4 5 0.5 1000 0.25 - 40 0.5

Proba 5 5 0.5 1000 0.25 - 80 0.5

Proba 6 5 0.5 1000 0.25 - - 0.5

REZULTATE

Componente biochimice

Pigmenti -carotenoidici µg/g substanta uscata

060-0,80

Vitamine

Acidul ascorbic mg/g substanta uscata

400-430

Curba etalon   -caroten

Rezultatul determinarilor chimice si biochimice efectuate:

REZULTATE Rezultatele asupra mitogenezei limfocitelor animale si umane in vitro:

SubiectulNr.

PHA 30µg/mlI. S.(%)

PHA + EXTRACTUL ALGE I.S.(%)

40µg/ml

PHA + EXTRACTUL ALGE I.S.(%)

80µg/ml

1 100 57 ,1 57 ,1

2 100 - 41 ,2

3 100 39,0 146,7

4 100 57,1 57,1

5 100 112,5 200,0

6 100 28,45 25,0

7 100 20,0 71,2

8 100 17,6 33,52

9 100 37,7 71,4

10 100 128,6 142 ,8

Medie   55,33 84,6

Deviatie standard

  156,49 253,8

Indice de variabilitate

  282,83 300

CONCLUZII

  Extractul de alge marine a evidentiat o compozitie chimica complexa , cumprinzind o gamă larga de clase de compuşi chimici ,cantităţi moderate de β caroten şi cantităţi mari de acid ascorbic.  Pentru toate dilutiile luate in lucru , extractul de alge marine a manifestat o activitate clara de inhibitie a mitogenezei limfocitare in prezenta fitohemaglutinina.

Rezultatele obtinute constituie premisa pentru evaluarea aplicabilitatii produsului testat ca agent inhibitor al proliferării celulare in terapia antitumorala.

Va Multumesc pentru Atentie