Testarea susceptibilitatii bacteriilor la antibiotice
Ce trebuie sa stie laboratorul de bacteriologieCe bacterii se testeaza?Ce metode se folosesc?Fata de care AB se face testarea ?Care sunt rezultatele?
Ce bacterii se testeaza?Bacterii care produc infectii si apartin unor specii ce pot dezvolta rezistenta fata de AB utilizate obisnuitExista standarde de interpretare bazate pe date clinice si de laboratorNu se efectueaza testarea pe amestecuri de specii bacteriene
Ce bacterii se testeaza?
Pseudomonas aeruginosaEnterobacteriaceaeStaphylococcus sppEnterococcus spp.Streptococcus sppStreptococcus pneumoniae.Neisseria spp.Haemophilus spp
Metode de rutina de testare a sensibilitatii la antibiotice a bacteriilor (TSA)
Teste de rutina pentru testareAntibiograma difuzimetrica (Kirby Bauer)Determinarea CMI (microdilutii)Metoda de referinta E-test
Antibiograma difuzimetrica
Inoculul bacterianTurbididate corespunzatoare 0,5 unit. McFarlandComparatie fata de etalon sau spectrofotometrieInsamantare a 2-5 colonii,incubare 2-6 ore, 37 grade CelsiusDensitate 150 000 000/ml
Selectarea coloniilorPrepararea inoculului
OmogenizareStandardizarea inoculului
Mediul utilizatSe utilizeaza agarul Muller-HintonSteril, turnat in placi Petri perfect plate, 4 mm grosimeRacire la temperatura camerei, utilizare sau conservare refrigerat max.7 zileControlul sterilitatiiPh- 7,2-7,4
Insamantarea placiiSe introduce un tampon in suspensie Se inlatura excesul de lichid prin presareSe insamanteaza uniform pe toata suprafata, repetand operatia inca de 2 ori si rotind placa cu cate 60 de gradeSe lasa placa sa se usuce, cu capacul intredeschis 5-15 min
InsamantarePrelevare
Microcomprimate antibioticePastrare 2-8 grade Celsius sau congelateReechilibrare termica 1-2 oreUtilizare de desicanti in recipienteDistribuitorul se pastreaza in frigiderValabilitate corespunzatoare
Distribuirea microcomprimatelorContact complet cu suprafata placiiDistanta minima intre microcomprimate 24 mmNu e permisa mutarea discurilorPredifuzie 15 min la temperatura camereiIncubare, rasturnata, 16-18 ore, la 35-37 grade
Distributia discurilorIncubare
MasurareMasurarea zonei de inhibitie completa, inclusiv diametrul disculuiRigle sau instrumente specialeMasurare pe spatele placiiPentru medii cu sange, masurare cu lumina reflectata, dupa inlaturarea capaculuiColonii in zona de inhibitie, se face retestare
Masurarea zonelor de inhibitieLumima transmisa
Metode modificate pentru bacteriile cu crestere dificila - lumina reflectata
Criterii de interpretare (mm)exemple
AntibioticCont.disc (ug)RezIntSenscefazolin30 1415-17 18gentamicina10 1213-14 15
Antibiograma difuzimetricaRezultate calitative:Sensibil: categoria implica faptul ca infectia poate fi tratata cu agentul antimicrobian, in doza indicata tipului de infectieIntermediar include agenti antimicrobieni cu CMI apropiate de nivelurile serice obtinute in urma administrarii dozelor terapeutice; poate fi eficace daca se concentreaza la locul infectiei (ex. urina) sau daca se poate administra in cantitati mai mari decat in mod obisnuit
Antibiograma difuzimetricaRezultate calitative:
Rezistent - tulpinile nu sunt inhibate de nivelurile de antibiotic realizate dupa administrarea dozelor terapeutice; nu au aplicabilitate clinica
Cauze obisnuite de eroareCitirea eronata a diametrelor zonelor de inhibitieContaminarea sau modificarea tulpinii de controlInocul necorespunzator(densitate, contaminare)Incubare incorecta (temp,atm)Variabilitatea calitatii mediului utilizatPierderea eficacitatii discurilor
Limitele metodei difuzimetriceA fost standardizata pentru bacteriile cu crestere rapidaPentru germenii cu crestere dificila testarea a fost modificata si adaptataRezultatele nesatisfacatoare pot apare dupa o terapie prelungita; initial germenii sunt sensibili, dar pot deveni rezistenti dupa 3-4 zile de la inceperea terapiei
CMIConcentratia minima inhibitorieCea mai mica concentratie de antibiotic care inhiba cresterea unei bacteriiInterpretare:SensibilaIntermediaraRezistenta
Conditii clinice cand CMI este util: EndocarditaMeningitaSepticemiaOsteomielitaPacienti imunodeprimati (HIV, cancer, etc.)Pacienti cu proteze valvularePacienti care nu raspund la tratament in ciuda unui rezultat sensibil la AB
Prepararea inoculului pentru CMI (Metoda de referinta CLSI)Standardizarea suspensiei de inocul concentratia finala3 5 x 105 UFC/ml(3 5 x 104 UFC/godeu)
Microdilutie in placa CMIPrepararea suspensiei de inocul
Diluarea si amestecul suspensiei de inocul
Turnarea inoculului Si distributia in placa
Inocularea placii de control Incubare
Examinarea placii de controlLumina reflectataLumina transmisa
Citirea CMI
-+643216 8 4 2 1>64 0.5CMI>64
CMI pe benzi
S. pneumoniae CMI Penicilina = 3 g/ml
Criterii de interpretare CMI (g/ml)
AntibioticSensIntermRezcefazolin 816 32gentamicina 48 16
jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*