Testarea susceptibilitatii bacteriilor la antibiotice

Ce trebuie sa stie laboratorul de bacteriologieCe bacterii se testeaza?Ce metode se folosesc?Fata de care AB se face testarea ?Care sunt rezultatele?

Ce bacterii se testeaza?Bacterii care produc infectii si apartin unor specii ce pot dezvolta rezistenta fata de AB utilizate obisnuitExista standarde de interpretare bazate pe date clinice si de laboratorNu se efectueaza testarea pe amestecuri de specii bacteriene

Ce bacterii se testeaza?

Pseudomonas aeruginosaEnterobacteriaceaeStaphylococcus sppEnterococcus spp.Streptococcus sppStreptococcus pneumoniae.Neisseria spp.Haemophilus spp

Metode de rutina de testare a sensibilitatii la antibiotice a bacteriilor (TSA)

Teste de rutina pentru testareAntibiograma difuzimetrica (Kirby Bauer)Determinarea CMI (microdilutii)Metoda de referinta E-test

Antibiograma difuzimetrica

Inoculul bacterianTurbididate corespunzatoare 0,5 unit. McFarlandComparatie fata de etalon sau spectrofotometrieInsamantare a 2-5 colonii,incubare 2-6 ore, 37 grade CelsiusDensitate 150 000 000/ml

Selectarea coloniilorPrepararea inoculului

OmogenizareStandardizarea inoculului

Mediul utilizatSe utilizeaza agarul Muller-HintonSteril, turnat in placi Petri perfect plate, 4 mm grosimeRacire la temperatura camerei, utilizare sau conservare refrigerat max.7 zileControlul sterilitatiiPh- 7,2-7,4

Insamantarea placiiSe introduce un tampon in suspensie Se inlatura excesul de lichid prin presareSe insamanteaza uniform pe toata suprafata, repetand operatia inca de 2 ori si rotind placa cu cate 60 de gradeSe lasa placa sa se usuce, cu capacul intredeschis 5-15 min

InsamantarePrelevare

Microcomprimate antibioticePastrare 2-8 grade Celsius sau congelateReechilibrare termica 1-2 oreUtilizare de desicanti in recipienteDistribuitorul se pastreaza in frigiderValabilitate corespunzatoare

Distribuirea microcomprimatelorContact complet cu suprafata placiiDistanta minima intre microcomprimate 24 mmNu e permisa mutarea discurilorPredifuzie 15 min la temperatura camereiIncubare, rasturnata, 16-18 ore, la 35-37 grade

Distributia discurilorIncubare

MasurareMasurarea zonei de inhibitie completa, inclusiv diametrul disculuiRigle sau instrumente specialeMasurare pe spatele placiiPentru medii cu sange, masurare cu lumina reflectata, dupa inlaturarea capaculuiColonii in zona de inhibitie, se face retestare

Masurarea zonelor de inhibitieLumima transmisa

Metode modificate pentru bacteriile cu crestere dificila - lumina reflectata

Criterii de interpretare (mm)exemple

AntibioticCont.disc (ug)RezIntSenscefazolin30 1415-17 18gentamicina10 1213-14 15

Antibiograma difuzimetricaRezultate calitative:Sensibil: categoria implica faptul ca infectia poate fi tratata cu agentul antimicrobian, in doza indicata tipului de infectieIntermediar include agenti antimicrobieni cu CMI apropiate de nivelurile serice obtinute in urma administrarii dozelor terapeutice; poate fi eficace daca se concentreaza la locul infectiei (ex. urina) sau daca se poate administra in cantitati mai mari decat in mod obisnuit

Antibiograma difuzimetricaRezultate calitative:

Rezistent - tulpinile nu sunt inhibate de nivelurile de antibiotic realizate dupa administrarea dozelor terapeutice; nu au aplicabilitate clinica

Cauze obisnuite de eroareCitirea eronata a diametrelor zonelor de inhibitieContaminarea sau modificarea tulpinii de controlInocul necorespunzator(densitate, contaminare)Incubare incorecta (temp,atm)Variabilitatea calitatii mediului utilizatPierderea eficacitatii discurilor

Limitele metodei difuzimetriceA fost standardizata pentru bacteriile cu crestere rapidaPentru germenii cu crestere dificila testarea a fost modificata si adaptataRezultatele nesatisfacatoare pot apare dupa o terapie prelungita; initial germenii sunt sensibili, dar pot deveni rezistenti dupa 3-4 zile de la inceperea terapiei

CMIConcentratia minima inhibitorieCea mai mica concentratie de antibiotic care inhiba cresterea unei bacteriiInterpretare:SensibilaIntermediaraRezistenta

Conditii clinice cand CMI este util: EndocarditaMeningitaSepticemiaOsteomielitaPacienti imunodeprimati (HIV, cancer, etc.)Pacienti cu proteze valvularePacienti care nu raspund la tratament in ciuda unui rezultat sensibil la AB

Prepararea inoculului pentru CMI (Metoda de referinta CLSI)Standardizarea suspensiei de inocul concentratia finala3 5 x 105 UFC/ml(3 5 x 104 UFC/godeu)

Microdilutie in placa CMIPrepararea suspensiei de inocul

Diluarea si amestecul suspensiei de inocul

Turnarea inoculului Si distributia in placa

Inocularea placii de control Incubare

Examinarea placii de controlLumina reflectataLumina transmisa

Citirea CMI

-+643216 8 4 2 1>64 0.5CMI>64

CMI pe benzi

S. pneumoniae CMI Penicilina = 3 g/ml

Criterii de interpretare CMI (g/ml)

AntibioticSensIntermRezcefazolin 816 32gentamicina 48 16

jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*jhindler small lab 5/04*