Realizarea unui preparat microscopic cu celule epiteliale provenite din epiteliul pavimentos pluristratificat nekeratinizat

Lucrarea urmareste evidentierea morfologiei celulei animale, in cazul acesta umane, provenite din mucoasa bucala, in urma raclarii usoare a acesteia cu o lama de sticla si a intinderii materialului prelevat, in frotiu, pe o alta lama microscopica.

Reactivi si sticlarie : Solutie Giemsa sau solutie de albastru de metilen 1%, etanol min. 96%, etanol 70%, apa distilata, lame, lamele, pipete Pasteur.

Mod de lucru : Folosind o lama de sticla sau o spatula subtire la margini se racleaza usor, mucoasa bucala, prin miscari unice de sus in jos, pana la prelevarea unei cantitati observabile de proba. Aceasta se intinde pe o lama de sticla curata, astfel incat sa obtineti un singur strat celular. Frotiul astfel obtinut se lasa la uscat, aproximativ 5-10 minute. Dupa uscare, se aplica cca. 5-10 picaturi, de etanol min. 96%, si se asteapta 5 minute, pentru ca fixarea celulelor sa fie completa. Se inlatura etanolul min. 96% si se aplica etanol 70%, pentru ca sa “pregatim“ celula sa reactioneze cu reactivul colorant, reducand astfel impactul intre tensiunea superficiala a etanolului absolut si reactivul colorant folosit. Cu etanol 70% se lasa lama sa stea cca. 3 minute dupa care se spala cu apa distilata, cu grija pentru a nu provoca desprinderea celulelor de pa lama. Urmeaza acum aplicarea colorantului, cel mai indicat fiind Reactivul Giemsa ( eozina si albastru de metilen in sol. hidroglicerica sau apoasa ), astfel incat sa acopere tot frotiul; se lucreaza foarte bine, cu Giemsa diluata 1:10, in cazul in care dispunem de Solutie Giemsa concentrata. Albastru de metilen se poate folosi solutie 1% ( solutie stoc ) sau indicat este sa folositi solutie 0.5 %. ( dilutie 1:1 ). Indiferent pe care colorant il alegeti, frotiul se mentine acoperit de colorant timp de 20 de minute.Dupa acest timp, colorantul se arunca si lama se spala cu apa de robinet si se lasa sa se usuce dupa care se investigheaza la microscop cu obiectivul de 40X si I.U. 100X ( I.U. 90X in cazul microscoapelor IOR ).Veti vedea celule ovale sau rotunde, cu un nucleu central evident, albastru-inchis, o citoplasma slab colorata, in care se pot identifica diferite incluziuni ( colorate in albastru, cu distributie neuniforma, cu aspect de granule sau alte forme )

V. Toma