PROTEINE TOTALE
2
PROTEINE TOTALE (COLORIMETRIC) PRINCIPIUL METODEI Compusii cu legaturi peptidice (cel mai simplu compus fiind biuretul: NH2-CO-NH-CO-NH2) formeaza cu ionul Cu+2 un complex colorat violet care poate fi colorimetrat. Reactia este specifica pentru proteine, polipeptide si peptide. Ureea, acizii aminati, amoniacul si alti compusi din lichidele biologice, nu interfereaza. PREZENTAREA TRUSEI Trusa contine reactivi ce se pot folosi pentru 20 sau 40 determinari. REACTIV 1 : REACTIVUL BIURET STOC (2 fiole de 10 respectiv 20 ml.) care contin tartrat de Na si K, sulfat de cupru, iodura de potasiu si hidroxid de sodiu. REACTIV 2 : DILUANT PENTRU REACTIVUL 1: (2 flacoane de 50 respectiv 100 ml.) contine iodura de potasiu dizolvat în solutie de hidroxid de sodiu. Se poate pastra la rece, întuneric si etans, timp de 3 luni. REACTIVUL DE LUCRU(R1+R2) : 10 ml. din REACTIV 1 se dilueaza cu 40 ml. REACTIV 2. Solutia obtinuta se pastreaza la rece si întuneric bine etansata timp de o saptamâna. REACTIV 3 : SOLUTIE DE NaCl (2 fiole de 10 ml. respectiv 20 ml.) TEHNICA DE LUCRU Se pipeteaza în eprubete:PROBA(P), MARTOR PROBA(MP), MARTORREACTIV(MR) REACTIVI U. M. P MP MR SER, LCR ml. 0.1 0.1 - REACTIV DE LUCRU (R1 + R2) ml. 3.5 - 3.5 REACTIV 3 ml. - 3.5 0.1 Continutul eprubetelor se omogenizeaza si dupa un repaus de 30 minute, se masoara extinctia probei (EP) fata de extinctia martorului probei (EMP) si a extinctiei martorului reactivului (EMR), în cuva de 1 cm la = 546 nm. OBSERVATII: MP se executa, numai pentru seruri lipemice, icterice sau hemolitice. CALCUL g. PT / 100 ml. SER; LCR = (EP / a)x(VF / VI) a = 2,77 coeficientul procentual al extinctiei ( ) pentru ? = 546 nm. VF = 3,6 ml volum final VI = 0,1 ml volum initial Deci: g. PROTEINE TOTALE / 100 ml. SER ; LCR = EP x 13 Respectiv : g. PROTEINE / 100 ml. SER ; LCR = [EP – (EMP - EMR)] x 13 OBSERVATII
Transcript of PROTEINE TOTALE
PROTEINE TOTALE (COLORIMETRIC)
PRINCIPIUL METODEICompusii cu legaturi peptidice (cel mai simplu compus fiind biuretul: NH2-CO-NH-CO-NH2) formeaza cu ionul Cu+2 un complex colorat violet care poatefi colorimetrat. Reactia este specifica pentru proteine, polipeptide si peptide. Ureea, acizii aminati, amoniacul si alti compusi din lichidele biologice, nu interfereaza.
PREZENTAREA TRUSEITrusa contine reactivi ce se pot folosi pentru 20 sau 40 determinari. REACTIV 1 : REACTIVUL BIURET STOC (2 fiole de 10 respectiv 20 ml.) care contin tartrat de Na si K, sulfat de cupru, iodura de potasiu si hidroxid de sodiu. REACTIV 2 : DILUANT PENTRU REACTIVUL 1: (2 flacoane de 50 respectiv 100 ml.) contine iodura de potasiu dizolvat în solutie de hidroxid de sodiu. Se poate pastra la rece, întuneric si etans, timp de 3 luni. REACTIVUL DE LUCRU(R1+R2) : 10 ml. din REACTIV 1 se dilueaza cu 40 ml. REACTIV 2. Solutia obtinuta se pastreaza la rece si întuneric bine etansata timp de o saptamâna. REACTIV 3 : SOLUTIE DE NaCl (2 fiole de 10 ml. respectiv 20 ml.)
TEHNICA DE LUCRUSe pipeteaza în eprubete:PROBA(P), MARTOR PROBA(MP), MARTORREACTIV(MR)
REACTIVI U. M. P MP MR
SER, LCR ml. 0.1 0.1 -
REACTIV DE LUCRU (R1 + R2) ml. 3.5 - 3.5
REACTIV 3 ml. - 3.5 0.1
Continutul eprubetelor se omogenizeaza si dupa un repaus de 30 minute, se masoaraextinctia probei (EP) fata de extinctia martorului probei (EMP) si a extinctiei martoruluireactivului (EMR), în cuva de 1 cm la = 546 nm.
OBSERVATII: MP se executa, numai pentru seruri lipemice, icterice sau hemolitice.
CALCUL g. PT / 100 ml. SER; LCR = (EP / a)x(VF / VI)
a = 2,77 coeficientul procentual al extinctiei ( ) pentru ? = 546 nm. VF = 3,6 ml volum final VI = 0,1 ml volum initial Deci: g. PROTEINE TOTALE / 100 ml. SER ; LCR = EP x 13 Respectiv : g. PROTEINE / 100 ml. SER ; LCR = [EP – (EMP - EMR)] x 13 OBSERVATIIDeterminarea PT în urina se face ca si dozarea în SER dar în plus se foloseste ca precipitant acid percloric 0,66 N, iar precipitatul rezultat este apoi analizat.
VALORI NORMALESER: Nou nascuti: 5,2 – 9,0 g. PT / 100 ml. SER Copii sub 3 an: 5,5 – 8,6 g. PT / 100 ml. SER Adulti si copii peste 3 ani: 6,6 – 8,6 g. PT / 100 ml. SERLCR: Nou nascuti: pâna la 0,09 g. PT / 100 ml. LCR Copii si adulti: 0,015 – 0,045 g. PT / 100 ml. LCR
BIBLIOGRAFIE: 1.Reinhold J. G., Standard Meth. Chem. 1953. 1. 88. 2.Richterich R., Klinische Chemie, Basel, 1968. 3.Min. Sanatatii **”Metode curente pentru analize de laborator clinice” Ed. Medicala 1982 4.Pesce I. A. and KAPLAN, A. I., “Methods in Clinical Chemistry, The C. V. Mesby Company, Washington D. C. (1987).
