DETERMINAREA CONTINUTULUI DE FOSFOR

4.1 Documente de referintaISO 936: 1998- Carne si produse din carne- Determinarea cenusiiSTAS 8613/2-78- Concentrate alimentare si aditivi- Determinarea cenusii.ISO 13730: 1996- Carne si produse din carne, inclusiv concentrate alimentare si aditivi- determinarea continutului total de fosfor- metoda spectrometrica.5.TERMENI FOLOSITI SI DEFINIREA ACESTORA

5.1 DefinitiiContinut total de fosfor din carne si produse din carne : masa de pentaoxid

de fosfor (P2O5) determinata prin procedeul descris mai jos, exprimata ca procent de masa al portiunii testate.

Principiul metodei spectrofotometrice - Uscarea portiunii testate si calcinarea reziduului. Dupa racire se hidrolizeaza cenusa cu acid azotic. Filtrare si diluare urmata de formarea unui compus galben cu un amestec de monovanadat de amoniu si heptamolibdat de amoniu. Se masoara spectrofotometric la λ de 430 nm.

6. ECHIPAMENTE DE INCERCARE SI MIJLOACE DE MASURARE

- balanta analitica utilizata la cantarirea probelor introduce in lucru, cu precizie de 0,0001 g

- cuptor de calcinare utilizat pentru calcinarea probelor introduce in lucru la temperatura de 5500C (± 250C)

- plita - utilizata pentru aducerea la fierbere a probelor introduce in lucru- spectrofotometru - utilizat pentru citirea extinctiilor probelor la lungimea de

unda de 430 nmSticlaria utilizata :- creuzete de portelan- pahare Berzelius – 250 cm3

- baloane cotate- cuve de sticla cu parcursul optic de10 mm- cilindrii gradati

- palnii- exsicator cu substanta deshidratanta.

Pregatirea reactivilor:Acid azotic, dilutie 1+2 (V/V) : se amesteca 1 volum de acid azotic (65%

(m/m);d=1,40 g/ml) cu doua volume de apa;Solutie de monovanadat de amoniu (NH4VCO3), 2,5g/l : se dizolva 2,5g

monovanadat de amoniu in 500 ml apa fiarta. Se raceste si se transfera cantitativ intr-un balon cotat de 1000 ml. Se adauga 20 ml acid azotic, se dilueaza pina la semn cu apa si se amesteca.

Solutie de heptamolibdat de amoniu, [(NH4)6Mo7O24 x 4H2O], 50 g/l : se dizolva 50 g heptamolibdat de amoniu tetrahidrat in cca. 800 ml apa calda (la aprox. 50º C). Se raceste si se transfera cantitativ intr-un balon cotat de 1000 ml. Se dilueaza pina la semn cu apa si se amesteca.

Reactiv de culoare : se amesteca un volum de acid azotic cu un volum de solutie de monovanadat de amoniu. Se adauga apoi un volum de solutie de heptamolibdat de amoniu si se amesteca. Reactivul de culoare trebuie sa se transforme din galben pal in incolor.

Solutie stoc fosfat, c (P) = 218 mg/l ; c (P2O5 )= 500 mg/l : se dizolva in apa 958,8 mg fosfat diacid de potasiu (KH2 PO4 ), uscat in prealabil la 103ºC ± 2ºC timp de 3 h si racit in exicator. Se transfera cantitativ intr-un balon cotat de 1000 ml, se dilueaza la semn cu apa si se amesteca.

Solutie standard fosfat, continind intre 0,05 mg si 0,30 mg de P2O5 / ml : se tranfera cu pipeta sau biureta, intr-un balon cotat de 100 ml: 10 ml, 20 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml si 60 ml din solutia stoc fosfat. Se adauga 10 ml acid azotic, se dilueaza la semn si se amesteca.

Solutie blank : se pipeteaza 2 ml acid azotic si 30 ml reactiv de culoare intr-un balon cotat de 100 ml, se dilueaza la semn si se amesteca.

7.3.3 Mod de lucru, executia propriu-zisaCantitatea de proba prelevata trebuie sa fie de cel putin 200 g. Proba se

omogenizeaza prin trecerea prin masina de tocat de cel putin 2 ori. Temperatura in proba omogenizata nu trebuie sa depaseasca 250C. Daca proba nu se analizeaza imediat se va evita deteriorarea sau modificarea compozitiei sale. Se cintaresc cca 5g din proba omogenizata (precizia 0,001g).

Determinare:Se mineralizeaza proba prin calcinare asa cum este descris in ISO 936: 1998

si STAS 8613/2-78.Se transfera cenusa rezultata in 10 ml acid azotic amestecand pentru

dizolvare.Se acopera vasul (creuzetul) cu o sticla de ceas si se incalzeste pentru 30 min

pe o baie de apa. Se lasa la racit si se transfera lichidul cantitativ intr-un balon cotat

de 100 ml. Se dilueaza la semn cu apa, se amesteca si se filtreaza prin hartie de filtru, aruncand primii 5 pana la 10 ml de filtrat.

Se pipeteaza 20 ml din filtratul limpede si incolor intr-un balon cotat de 100 ml si se adauga 30 ml reactiv de culoare cu ajutorul pipetei sau biuretei. Se dilueaza la semn cu apa si se amesteca. Se lasa in repaus pentru cel putin 15 min.

Se masoara absorbanta la λ de 430 nm ± 2 nm in cuve de sticla fata de solutia blank. Se citeste concentratia de fosfor din solutia probei folosind curba de calibrare descrisa mai jos.

Curba de calibrare:Se pipeteaza 20 ml din fiecare solutie standard fosfat in baloane cotate de

100 ml. Se adauga la aceste solutii 30 ml de reactiv de culoare. Se dilueaza la semn cu apa pentru a obtine concentratiile de 10, 20, 30, 40, 50 si 60 µg/ml P2O5. Se amesteca si se lasa in repaus pentru cel putin 15 min.

Se masoara absorbanta la λ de 430 nm ± 2 nm in cuve de sticla fata de solutia blank.

Se reprezinta valorile absorbantelor masurate, corectate cu valoarea blankului, in raport cu concentratiile solutiilor standard diluate de fosfat. Se traseaza cea mai buna linie printre puncte care sa treaca prin origine.

Este necesar sa se faca calibrarea pentru fiecare serie de analize. Pentru a verifica conditiile de repetabilitate se lucreaza probe la dublu.

7.4. Exprimarea rezultatelorSe calculeaza continutul total de fosfor, exprimat ca pentaoxid de fosfor, cu formula :

unde : c = concentratia de pentaoxid de fosfor, in µg/ml, din solutia probei, citita pe curba de calibrare m = masa, in g, a probei test Se raporteaza rezultatul cu trei zecimale.12.ASIGURAREA CALITATII REZULTATELOR

Asigurarea calitatii rezultatelor se realizeaza prin analiza unei probe in duplicat. Conform ISO 13730: 1996RepetabilitateaDiferenta absoluta intre doua rezultate independente, obtinute folosind aceeasi metoda, pe acelasi material, in acelasi laborator, de acelasi operator, folosind acelasi echipament intr-un interval scurt de timp, nu trebuie sa fie mai mare de 0,007% (m/m).

ReproductibilitateaDiferenta absoluta intre doua rezultate independente, obtinute prin aceeasi metoda, pe acelasi material, in laboratoare diferite, de catre operatori diferiti, folosind echipamente diferite, nu trebuie sa fie mai mare de 0,0117% (m/m).