PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag · 2 5- REACTIVI Platelia™ Aspergillus Ag: produs Nr. 62794 (96 Teste)...

1

PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag 1 placă – 96 62794 Platelia™ Aspergillus Ag este un test imuno-enzimatic de tip sandwich efectuat în microplăci pentru detectarea antigenului galactomanan Aspergillus (aspergilar) în ser și în lichid de lavaj bronho-alveolar (BAL).

881115 – 2013/10 1- SCOPUL UTILIZĂRII Platelia™ Aspergillus Ag este un test imuno-enzimatic de tip sandwich efectuat în microplăci pentru detectarea antigenului galactomanan Aspergillus (aspergilar) în probe de ser adult și pediatric și în probe de lichid de lavaj bronho-alveolar (BAL). Platelia™ Aspergillus Ag este un test care, atunci când este utilizat în combinație cu alte proceduri de diagnostic, precum cultura microbiologică, examinarea histologică a probelor de biopsie şi dovezile radiografice, poate fi utilizat ca sprijin pentru diagnosticarea Aspergilozei invazive. 2- INDICAȚII DE UTILIZARE Platelia™ Aspergillus Ag este un test imuno-enzimatic de tip sandwich efectuat în microplăci pentru detectarea antigenului galactomanan Aspergillus (aspergilar) în probe de ser adult și pediatric și în probe de lichid de lavaj bronho-alveolar (BAL). Platelia™ Aspergillus Ag este un test care, atunci când este utilizat în combinație cu alte proceduri de diagnostic, precum cultura microbiologică, examinarea histologică a probelor de biopsie şi dovezile radiografice, poate fi utilizat ca sprijin pentru diagnosticarea Aspergilozei invazive. 3- SUMAR ȘI EXPLICAȚIE Infecțiile cu Aspergillus debutează de obicei în plămâni, ca port de intrare, în urma inhalării de spori Aspergillus, care sunt prezenți în mediul ambiant. Formele invazive, care au înregistrat o creștere în ultimii 10 ani, sunt infecțiile cele mai grave. Cel mai adesea, acestea sunt întâlnite la pacenții neutropenici (în urma tratamentului împotirva cancerului) și la pacienții tratați cu imunosupresoare (transplant de organe, în special transplant de măduvă), precum și la cei tratați cu corticosteroizi10. Aspergillus este rar izolat din sânge. Diagnosticul se bazează adeseori pe probe nespecifice de diagnostic sau radiologice (simptome clinice, examen CT, radiografie toracică etc). Testul pentru antigenul galactomanan în ser pare a fi o metodă serologică în măsură să vină în sprijinul diagnosticării Aspergilozei invazive9, 12, 23, 54, 62. În plus, în cazul beneficiarilor de transplant de organe solide, detecția antigenului galactomanan în lavajul bronho-alveolar (BAL) s-a dovedit a fi utilă în diagnosticarea Aspergilozei invazive în rândul acestei grupe de pacienți8,17,18. 4- PRINCIPIUL PROCEDURII 45 Platelia™ Aspergillus Ag este un test imuno-enzimatic de tip sandwich efectuat în microplăci într-o singură etapă care detectează galactomananul în serul uman și în lichidul BAL. Testul utilizează anticorpi monoclonali de șoarece EBA-2, care sunt dirijați împotriva galactomananului aspergilar și care au fost prezentați în studiile anterioare25, 46. Anticorpii monoclonali sunt folosiți pentru (1) a acoperi godeurile microplăcilor și pentru a lega antigenul, precum și pentru (2) a detecta antigenul legat de microplăcile sensibilizate (reactiv conjugat: anticorpi monoclonali legați prin peroxidare). Probele de ser sau de lichid BAL sunt tratate termic în prezența de EDTA cu scopul de a discoaia complexele imune și de a precipita proteinele care ar putea interfera cu testul 24. Probele tratate și conjugate se adaugă în godeurile acoperite cu anticorpi monoclonali și sunt incubate. Se formează un complex anticorp monoclonal – galactomanan – anticorp monoclonal/peroxidază în prezența antigenului galactomanan. Godeurile plăcii sunt spălate pentru eliminarea ocirăcui material neconsolidat. Apoi este adăugată soluția substrat, care va reacționa cu complexele legate de godeu evidențiate printr-o reacție de culoare albastră. Reacția enzimatică se oprește prin adăugarea de acid, care va schimba culoarea albastră în galben. Absorbanța (densitatea optică) probelor este determinată cu ajutorul unui spectrofotometru, reglat la lungimile de undă 450 și 620/630 nm.

2

5- REACTIVI Platelia™ Aspergillus Ag: produs Nr. 62794 (96 Teste) Depozitați kitul la o temperatură cuprinsă între 2 și 8°C. Toți reactivii vor fi lăsați să atingă temperatura camerei (18-25°C) timp de cel puțin 30 de minute înainte de utilizare. Imediat după utilizare, toții reactivii vor fi depozitați din nou la o temperatură cuprinsă între 2 și 8°C. Bandeletele/plăcile neutilizate vor fi amplasate din nou în pachet și vor fi resigilate. Nu înlăturați desicantul. După diluare, soluția activă de spălare poate fi păstrată timp de 14 zile la o temperatură cuprinsă între 2-30°C. Toți ceilalți reactivi, cu excepția soluției concentrate de spălare (R2) și a soluției de stopare (R10) trebiue să fie folosiți în termen de 8 săptămâni de la deschidere. După deschidere, soluția concentrată de spălare (R2) și soluția de stopare (R10) sunt stabile până la data de expirare. Reactivii sunt furnizați în cantități suficiente pentru efectuarea a 96 de teste în maxim 9 pachete.

Componentă Conținut Cantitate

R1 Microplate

Microplacă:- 96 godeuri(12 bandelete a 8 godeuri fiecare) acoperite

cu anticorpi monoclonali împotriva galactomananului - file bandelete marcate “85”

1 Placă/ 12 x 8 Godeuri

R2 Concentrated Washing

Solution (20x)

Soluție concentrată de spălare (20X): - TamponTris NaCl - Tween® 20 2% - Conservant: ProClin™ 300, 0,04%

1 x 70 mL

R3 Negative

Control Serum

Ser de control negativ:- Ser uman negativ - Negativ pentru anticorpii anti-HIV-1, anti-HIV-2, Anti-HCV și HBs Ag - Conservant: ProClin™ 300, 0,3%

2 x 1.7 mL

R4 Cut-off

Control Serum

Ser de control de referință: - Ser uman ce conține galactomanan - Negativ pentru anticorpii împotriva HIV-1, HIV-2, HCV și HBs Ag - Conservant: ProClin™ 300, 0,3%

2 x 1,7 mL

R5 Posotive

Control Serum

Ser de control pozitiv:- Ser uman ce conține galactomanan - Negativ pentru anticorpii împotriva HIV-1, HIV-2, HCV și HBs Ag - Conservant: ProClin™ 300, 0,3%

2 x 1,7 mL

R6 Conjugate

Conjugat (gata de utilizare)- Anticorpi monoclonali anti-galactomanan / marcați cu peroxidază - Conservant: ProClin™ 300, 0,3%

1 x 8 mL

R7 Sample Treatment

Solution Soluție de tratare a probelor (gata de utilizare): - soluție acidă EDTA

1 x 13 mL

R9 Chromogogen TMB

Solution

Soluție cromogenă TMB (gata de utilizare): - Tetrametilbenzidina 3, 3’, 5, 5’ (<0.1%) § - H2O2 (<1.0%)

1 x 28 mL

R10 Stopping solution Soluție de stopare (gata de utilizare): - Acid sulfuric 1 N (H2SO4)

1 x 28 mL §Notă: TMB (Tetrametilbenzidina 3, 3’, 5, 5’) este un cromogen noncarcinogen și nonmutagenic pentru peroxidază. 6- AVERTISMENTE PENTRU UTILIZATORI 1. Pentru diagnosticare in vitro. 2. Numai pentru uz profesional. 3. Este recomandat ca acest kit de testare să fie utilizat numai cu probe de ser uman și lichid BAL. 4. Controlul pozitiv, controlul de calibrare și contrlul negativ sunt preparate din ser uman care a fost testat și s-a constatat că

este nereactiv la HbsAg și la anticorpii împotriva HIV-1, HIV-2 și HCV, cu teste marcate CE. Cu toate acestea, toții reactivii trebuie manipulați ca având potențial de risc infecțios. Toate testele vor fi efectuate în conformitate cu Standardele OSHA cu privire la agenții patogeni din sânge, în conformitate cu practicile Nivelului 2 de Biosecuritate sau cu alte practici de biosecuritate corespunzătoare.

5. Purtați îmbrăcăminte de protecție, inclusiv haine de laborator, protecție pentru ochi/față și mănuși de unică folosință (sunt recomandate cele din material sintetic, nu din latex) și manipulați reactivi din kit și probele prelevate de la pacienți conform celor mai bune practici de laborator. Spalați-vă bine mâinile după efectuarea testului.

6. Nu pipetați cu gura. 7. Nu fumați și nu consumați băuturi sau alimente în zonele unde sunt manipulate probele sau reactivii din kituri. 8. Evitați stropirea cu probe sau soluții 9. Scurgerile biologice care nu conțin acid trebuie șterse cu atenție cu un dezinfectant eficient. Printre dezinfectanții care pot

fi utilizați se numără (fără a se limita la) o soluție de înalbire de 10% (soluție de hipoclorit de sodiu de 5%), etanol de 70% sau Wescodyne Plus™ 0,5%. Materialele utilizate pentru ștergerea scurgerilor pot fi supuse reglementărilor cu privire la eliminarea deșeurilor periculoase.

3

ATENȚIE: Nu introduceți în autoclavă soluții ce conțin înălbitor. 10. Scurgerile care conțin acid vor fi absorbite în mod corespunzător (șterse complet) sau neutralizate cu bicarbonat de sodiu,

iar cona afectată va fi clătită și bine uscată; dacă au fost implicate substanțe periculoase, ștergeți zona cu un dezinfectant chimic.

11. Aruncați toate probele și materialele utilizate pentru efectuarea testului ca și cum ar conține agenți infecțioși. Deșeurile chimice de laborator și deșeurile biologice periculoase vor fi gestionate și eliminate în conformitate cu toate reglementările locale, regionale şi naţionale.

12. Pentru recomandări privind pericolele şi măsurile de precauţie asociate unor componente chimice din acest kit de test, vă rugăm să consultaţi pictograma (pictogramele) menţionată(e) pe etichete şi informaţiile furnizate la sfârşitul instrucţiunilor de utilizare. Fişa tehnică de siguranţă este disponibilă la www.bio-rad.com.

13. Fișa de siguranță (FS) este disponibilă pentru utilizatorii profesioniști la adresa www.bio-rad.com.

7- PRECAUȚII PENTRU UTILIZATORI 1. PROBELE CONGELATE DE SER SAU DE LICHID BAL DEPOZITATE ÎN CONDIȚII NECUNOSCUTE AR PUTEA

GENERA REZULTATE FALS POZITIVE CA URMARE A CONTAMINĂRII CU FUNGI ȘI/SAU BACTERII. 2. Nu utilizați kitul sau reactivii din kit după data de expirare specificată. 3. Nu amestecați reactivii din alte kituri, cu numere de lot diferite, cu excepția soluției de spălare (R2, identificare*: 20x

culoare verde), soluția cromogenă (R9, identificare*: TMB culoare turcoaz) și soluția de stopare (R10, identificare*:1N culoare roșie), cu condiția ca acești reactivi să fie strict echivalenți și ca în cursul unei serii de testare să se utilizeze același lot.

*pe eticheta flaconului NOTĂ: Soluția de spălare (R2, identificată* prin culoarea verde ca 20x) nu poate fi amestecată cu soluția de spălare

(R2 identificată* prin culoarea albastră ca 10X) furnizată în kiturile de reactivi Bio-Rad. * pe eticheta flaconului

4. Toți reactivii vor fi aduși la temperatura camerei timp de cel puțin 30 de minute înainte de utilizare. 5. Se amestecă bine fiecare reactiv înainte de utilizare. 6. Se amestecă bine soluția de spălare concentrată (R2) înainte de prepararea soluției de spălare active, cu grijă pentru a

evita contaminarea microbiană. 7. Nu realizați testarea în prezența vaporilor reactivi (vaoiri acizi, alcalini, aldehidici) sau a prafului, care pot altera activitatea

enzimatică a conjugatului. 8. Pentru pipetarea manuală a controaleor și a probelor folosiți câte un vârf de pipetă nou pentru fiecare prelevat, pentru a

preîntâmpina transferarea probelor. 9. Pentru a asigura spălarea corespunzătoare a godeurilor va fi respectat numărul recomandat de cicluri de spălare, iar

godeurile vor fi umplute complet și apoi golite complet. Nu efectuați spălarea manual, cu piseta. 10. Nu permiteți uscarea microplăcii la finalul ciclului de spălare, înainte de adăugarea reactivilor. 11. Nu folosiți același recipient pentru conjugat și pentru soluția cromogenă TMB. 12. Nu permiteți contactul dintre conjugat sau soluția cromogenă TMB și metal sau ionii metalici. 13. Evitați expunerea soluției cromogene TMB la lumină puternică în timpul depozitării sau al incubației. Nu permiteți contactul

dintre soluțiile cromogene și agenții de oxidare. 14. Evitați contactul dintre soluția de stopare și agenții de oxidare. Nu permiteți contactul dintre soluția de stopare și metal sau

ionii metalici 15. Utilizați numai materiale sterile, ferite de praf (eprubete, capace, recipiente, etc.) pentru a minimiza posibilitatea

contaminării cu spori Aspergillus din mediul ambient. Întrucât galactomananul este termostabil, sterilizarea materialelor utilizate nu poate garanta absența antigenului contaminant. Materialele care nu conțin pirogen sunt optime, dar pot fi folosite și materiale standard, cu măsuri de precauție adecvate.

16. Limitați expunerea la aer a soluțiilor (seruri, lichid BAL, soluția de tratare a probelor, conjugat) sau a recipientelor deschise (plăci, eprubete, pipete).

17. Nu turnați conjugatul rămas neutilizat înapoi în recipientul inițial. 18. Soluția cromogenă TMB trebuie să fie incoloră. Apariția unei colorații albastre după diluție indică faptul că reactivul este

contaminat și nu trebuie folosit.

4

8- PREPARAREA ȘI DEPOZITAREA REACTIVILOR Placă de bandelete cu migrogodeuri (R1) Fiecare cadru de 12 bandelete este ambalat într-un pachet. Se deschide pachetul cu foarfeca, dedesubtul punctul de etanșare. Deschideți pachetul și scoateți cadrul. Amplasați cadrul cu bandeletele nefolosite înapoi în pachetul original. Resigilați pachetul cu atenție și depozitați la o temperatură cuprinsă între +2-8°C. După deschiderea pachetului vidat, bandeletele depozitate la o temperatură între +2-8°C în pachetul original, care a fost resigiliat cu atenție, rămân stabile timp de 8 săptămâni. A se verifica periodic în privința desicării. Soluție de spălare (R2) Preparați soluția de spălare activă după cum este necesar, adăugând o parte de soluție concentrată de spălare (R2) peste 19 părți de apă distilată sau deionizată. Soluția de spălare activă poate fi depozitată timpde 14 zile la o temperatură cuprinsă între 2-30°C. Preparați o cantitate suficientă de soluție de spălare activă pentru a finaliza testarea (80 mL pentru o bandeletă: 4 mL R2 + 76 mL apă distilată). După deschidere, soluția concentrată de spălare, de pozitată la o temperatură cuprinsă între +2-30 oC, dacă nu este contaminată, va rămâne stabilă până la data de expirare înscrisă pe etichetă. Ser de control negativ (R3), ser de control de calibrare (R4) și ser de control pozitiv (R5) Serurile de control trebuie tratate termic cu soluția de tratare a probelor (R7) ca probe prelevate de la pacienți, pentru a funcționa și cu scopul de monitorizare a tratamentului. După deschidere, acești reactivi, depozitați la +2-8 oC, sunt stabili timp de 8 săptămâni, în lipsa contaminării. Conjugat (R6), soluția de tratare a probelor (R7), soluția cromogenă TMB (R9) Acești reactivi sunt gata de utilizare. După deschidere, acești reactivi depozitați la +2-8 oC, sunt stabili timp de 8 săptămâni, în lipsa contaminării. Soluția de stopare (R10) Acest reactiv este gata de utilizare. După deschidere, acest reactiv depozitat la +2-8 oC este stabil până la data de valiabilitate indicată pe etichetă, în lipsa contaminării. 9- PRELEVARE PROBE Testul este efectuat cu ser sau lichid BAL. I. SER Probele de sânge vor fi prelevate în conformitate cu procedurile standard de laborator. Probele de ser trebuie să fie necontaminate cu spori de fungi și/sau bacterii. Probele vor fi transportate și depozitate în eprubete sigilate, fără expunere la aer. Probele nedeschise pot fi depozitate la 2-8°C timp de până la 5 zile înaintea testării. După prima deschidere, probele pot fi depozitate la 2-8°C timp de 48 de ore înaintea testării. În cazul unei depozitări mai îndelungate, temperatura de depozitare a serului va fi -70°C. Probele de ser pot fi supuse la un număr maxim de 4 cicluri de congelare/decongelare. Probele congelate anterior vor fi amestecate foarte bine după decongelare, înainte de efectuarea testului. Rezultatele nu sunt afectate de probele ce conțin 20 mg/L de bilirubină, de probele lipemice ce conțin echivalentul a 2 g/L trioleină (trigliceride) sau de probele hemolizate ce conțin 500 mg/dL de hemoglobină. Interferențele legate de excesul de albumină nu au fost testate. A nu se decomplementariza serurile. II. LICHID BAL Probele de lichid BAL vor fi prelevate în conformitate cu procedurile standard de laborator. Probele de lichid BAL vor fi prelevate în soluție salină sterilă și pot fi testate pe probe curate (ca atare) sau pe supernatant diin probe centrifugate (10,000 rpm timpd e 10 min), înainte de a trece la tratarea probei după cum este prezentat în Secțiunea 10. Probele de lichid BAL trebuie să fie necontaminate cu spori de fungi și/sau bacterii. Probele vor fi transportate și depozitate în eprubete sigilate, fără expunere la aer. Este recomandat ca probele de lichid BAL să fie depozitate la +2-8 oC cât mai repede după prelevarea acestora. După prima deschidere, probele pot fi depozitate la 2-8 oC timp de până la 24 de ore. În cazul unei depozitări mai îndelungate, probele de lichid BAL vor fi depozitate congelate (temperatură de -20°C sau mai scăzută) timp de până la 5 luni. Probele de lichid BAL pot fi supuse la un număr maxim de 4 cicluri de congelare/decongelare. Probele congelate anterior vor fi amestecate foarte bine după decongelare, înainte de efectuarea testului. 10- PROCEDURĂ Materiale furnizate Consultați secțiunea REACTIVI.

5

Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate 1. Apă distilată sau deionizată, pentru diluarea soluției de spălare concentrate. 2. Hârtie absorbantă. 3. Mănuși de unică folosință. 4. Ochelari de protecție. 5. Hipoclorit de sodiu (înălbitor) și bicarbonat de sodiu. 6. Pipete simple și multicanal, reglabile sau fixe, pentru măsurarea și distribuirea a 50 µL, 100 µL, 300 µL, and 1000 µL. 7. Tuburi microcentrifugă din polipropilenă de 1,5 mL, cu închidere ermetică, capabile să suporte temperaturi de până la

120°C (termostatare) sau 100°C (baie de apă la punct de fierbere). Capace și eprubete cu filet: Tuburi conice de 1.5 mL,

SAU Eprubete cu capac fix: EZ Micro Test Tubes, 1,5 mL, Micro-eprubete cu mecanism de fixare a capacului în poziție. Aceste sisteme de fixare sigilează capacul eprubetelor,

împiedicând deschiderea acestuia ca urmare a variațiilor de temperatură, și presiune și permit scoaterea cu ușurință a eprubetelor din termostat sau din baia de apă la punct de fierbere.

8. Centrifugă de laborator pentru eprubete de polipropilenă de 1.5 mL capabilă de a obține 10,000g (Brinkman Cat. # 22-36-280-1 sau VWR Scientific Cat. # 20901-051 sau echivalent).

9. Dacă pentru tratarea serurilor / a lichidului BAL este folosit termostatul: Termostat. Sunt recomandate următoarele modele de termostat: Model un bloc: Grant Cat. # QBD-1L – în afara SUA: Grant Cat. # QBD1 distribuit de către VWR conform Cat. # 460-

0074) Model două blocuri: Grant Cat. # QBD-2L – în afara SUA: Grant Cat. # QBD2 distribuit de către VWR under Cat. #

460-0076)

Bloc pentru termostat: ambele termostate (QBD-1L, QBD1 and QBD-2L, QBD2) trebuie folosite cu Grant block Cat. # QB-E1 distribuite în afara SUA de către VWR conform Cat. # 460-8517

Dacă pentru tratarea serurilor / a lichidului BAL este folosită apa fierbinte: Suport rotund de microcentrifugă pentru 1 pahar gradat de laborator de 1 L (în SUA: VWR Scientific Cat. # 60986-100

sau Nalgene Cat # 5974-1015 sau echivalent). Baie de apă fierbinte la 100°C.

10. agitator tip Vortex. 11. Incubator de microplăci la 37 ± 1°C. 12. Sistem de spălare automat, semiautomat sau manual pentru microplăci. 13. Sistem de citire a microplăcilor echipat cu filtre de 450 nm și de 620/630 nm. Comentarii cu privire la procedură Serurile de control negativ, pozitiv și de calibrare trebuie să fie testate de fiecare dată pentru a valida rezultatele testului. Tratarea serurilor / a lichidului BAL Toate serurile de control: negativ (R3), de calibrare (R4) și pozitiv (R5) trebuie să fie procesate în același timp cu probele de ser / de lichid BAL: 1. Pipetați 300 µL din fiecare ser de testare/lichid BAL și din fiecare control într-o eprubetă de polipropilenă separată de 1.5

mL. 2. Adăugați 100 µL de soluție de tratare a probelor (R7) în fiecare eprubetă. 3. Amestecați bine conținutul eprubetelor prin agitare viguroasă sau în vortex. Închideți bine eprubeta pentru a preîntâmpina

deschiderea în timpul încălzirii 4. Opțiunea de termostatare

Încălziți eprubetele timp de 6 minute într-un termostat la temperatura de 120°C. Eprubetele vor fi amplasate în termostat numai atunci când este atinsă temperatura recomandată (*).

SAU Opțiunea baie de apă În cazul în care este utilizată baia de apă fierbinte: încălziți eprubetele timp de 3 minute la temperatura de 100°C(*). Eprubetele vor fi amplasate în baia de apă numai atunci când este atinsă temperatura recomandată.

5. Scoateți cu atenție eprubetele fierbinți din termostat sau din baia de apă fierbinte și amplasați-le în centrifugă. Centrifugați eprubetele la 10,000 x g timp de 10 minute. Supernatantul este utilizat pentru detectarea antigenului galactomanan.

6. Testați supernanatul prin intermediul următoarelor proceduri. După preparare, supernatantul poate fi scos și depozitat la 2-8°C timp de 48 de ore înainte de testare. Dacă în urma analizei rezultatelor se constată că este necesară repetarea testului, o nouă parte alicotă a probei va fi tratată în vederea testării. (*) Respectarea cu strictețe a temperaturii și a timpului de răspuns recomandate, precum și utilizarea materialelor reomandate sunt esențiale pentru efectuarea cu succes a testului. Nu vă bazați pe temperatura afișată de dispozitiv, ci verificați că temperatura se află în conformitate cu specificațiile utilizând un termometru calibrat ce va fi amplasat într-o eprubetă cu conținut de ulei mineral: în interiorul eprubetei trebuie să fie atinsă temperatura de 120°C atât într-un termostat, cât și într-o baie de apă fierbinte de 100°C.

6

Procedura EIA Respectați cu strictețe protocolul propus. Respectați Bunele Practici de Laborator. 1. Permiteți reactivilor să ajungă la temperatura camerei (+18-25°C) timp de cel puțin 30 de minute înainte de utilizare. 2. Preparați soluția de spălare activă. 3. Elaborați un tabel pentru identificarea probelor de ser/lichid BAL și control pentru testare în microplacă. Folosiți un godeu

pentru serul de control negativ (R3), două godeuri pentru serul de control de calibrare (R4) și un godeu pentru serul de control pozitiv (R5).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A R5 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R3 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12

4. Scoateți suportul plăcii și bandeletele cu microgodeuri (R1) din pachet. Amplasați înapoi în pachet bandeleltele care nu vor

fi utilizate, împreună cu desicantul, și sigilați pachetul. 5. Înainte de utilizare, amestecați conținutul sticlei de conjugat (R6) prin răsturnare. Adăugați 50 µL de conjugat (R6) în

fiecare godeu. Apoi, adăugați 50 µL de supernatant de ser/lichid BAL tratat în fiecare godeu, după cum au fost desemnate mai sus. Nu adăugați probe de ser/lichid BAL în godeuri înainte de a adăuga conjugatul.

6. Acoperiți placa cu folia aeziva, sau printr-o altă metodă, pentru a preîntâmpina evaporarea, asigurându-vă că întreaga suprafață este acoperită și închisă ermetic.

7. Incubați microplaca într-un incubator de microplăci uscat timp de 90 ± 5 minute la 37°C (± 1°C). 8. Îndepărtați folia adeziva. Aspirați conținutul godeurilor într-un recipient pentru deșeuri (ce conține hipocolorit de sodiu).

Spălați placa de 5 ori cu un spălător de microplăci (utilizând 800 µL de soluție de spălare activă). După ultima spălare, răsturnați microplaca și aplicați ușor hârtie absorbantă pentru a înlătura lichidul rămas.

9. Adăugați rapid 200 µL de soluție cromogenă TMB (R9) în fiecare godeu, evitând expunerea la lumină puternică. 10. Incubațiu microplaca la întuneric, la temperatura camerei (+18-25°C) timp de 30 ± 5 minute. Nu utilizați peliculă adezivă

în cadrul acestei etape de incubare. 11. Adăugați100 µL de soluție de stopare (R10) în fieare godeu, și folosiți aceeași ordine de adăugare pentru soluția

cromogenă TMB. Amestecați bine 12. Ștergeți cu atenție baza fiecărei plăci. 13. Citiți densitatea optică corespunzătoare fiecărui godeu la 450 nm (filtru de referință 620/630 nm). Microplăcile trebuie să fie

citite în termen de 30 de minute de la adăugarea soluției de stopare. 11- CONTROLUL CALITĂȚII (CRITERII DE VALIDITATE) Control de calibrare: D.O. a fiecărui ser de control de calibrare trebuie să fie de 0.300 și 0.800. Control pozitiv: Indicele serului de control pozitiv trebuie să fie mai mare decât 1,50.

I = DO control pozitiv (R5) > 1,50

DO medie control de calibrare Control negativ: Indicele serului de control negativ trebuie să fie mai mic decât 0,40.

I = DO control negativ (R3)

< 0,40 DO medie control de calibrare

Dacă unul dintre controale nu îndeplinește criteriile de validitate descrise mai sus atunci testul este invalid, iar rezultatele aferente probelor prelevate de la pacienți nu trebuie raportate. Operatorul poate decide repetarea testării, după revizuirea procedurii, sau poate contacta producătorul pentru a beneficia de asistență. În cazul repetării testului, pentru testare va fi folosită o nouă parte alicotă a aceleiași probe. Exemplu de calcul:

Probă Absorbanță (DO) DO control negativ (R3) 0,116 DO control de calibrare (R4) 0,513

0,533 DO control pozitiv (R5) 1,834

7

Calcule Valoare medie control de calibrare Pentru a calcula valoarea medie a DO corespunzătoare controlului de calibrare (R4), adunați valorile DO corespunzătoare controlului de calibrare replicat și împărțiți rezultatul la 2: (0,513 + 0,533) ÷ 2 = 0,523 Indicele de control negativ Pentru a calcula indicele de control negativ, împărțiți DO corespunzătoare controlului negativ la valoarea medie a DO corespunzătoare controlului de calibrare:

I = 0,116

= 0,22 0,523

Indicele de control pozitiv Pentru a calcula indicele de control pozitiv, împărțiți DO corespunzătoare controlului pozitiv la valoarea medie a DO corespunzătoare controlului de calibrare:

I = 1,834

= 3,51 0,523

Validitate În exemplul de mai sus: Fiecare DO a controlului de calibrare este 0,300 și 0,800, ceea ce indică faptul că controlul de calibrare este valid, Indicele controlului negativ este < 0,40, ceea ce indică faptul că controlul negativ este valid, Indicele controlului negativ este > 1,50, ceea ce indică faptul că controlul pozitiv este valid. Testarea din cest exemplu este coNSiderată a fi validă, întrucât rezultatele îndeplinesc criteriile de validitate pentru fiecare control. 12- INTERPRETAREA REZULTATELOR Prezența sau absența antigenului galactomanan în eșantion este determinată prin calcularea indicelui corespunzător fiecărei probe prelevate de la pacient. Indicele (I) reprezintă valoarea DO a probei împărțită la valoarea media a densității optice corespunzătoare godeurilor ce conțin ser de control de calibrare. Calcularea valorii medii a densității otpice corespunzătoare serului de control de calibrare: Adunați valorile densității optice corespunzătoare celor două godeuri ce conțin ser de control de calibrare (R4) și împărțiți suma la 2. Calcularea indicelui (I) pentru fiecare eșantion: Calculați următorul raport pentru fiecare eșantion:

I = DO probă

Valoare medie DO ser de control de calibrare

Interpretarea serurilor/lichidului BAL cu un indice < 0.50: Serurile/lichidul BAL cu un indice < 0.50 sunt considerate a fi Negativ pentru antigenul galactomanan. Notă: Un rezultat negativ poate indica faptul că rezultatul corespunzător pacientului se află sub nivelul detectabil al testului. Rezultatele Negativ nu exclud diagnosticul de aspergiloză invazivă. În cazul în care rezultatul este negativ, dar boala este suspectată, se recomandă repetarea testului. Interpretarea serurilor/lichidului BAL cu un indice 0.50 Serurile/lichidul BAL cu un indice 0.50 sunt considerate a fi pozitive pentru antigenul galactomanan. În cazul tuturor pacienților pozitivi se recomandă repetarea unei noi părți alicote din aceeași probă (ser/BAL). Notă: O valoare de absorbanță mai mică decât 0.000 poate indica o eroare procedurală sau instrumentală, care trebuie analizată. Rezultatul este invalid, iar eșantionul va fi testat din nou. Este recomandată verificarea regulată (de două ori pe săptămână) a probelor de ser ale pacienților cu risc ridicat pentru a crește sensibilitatea și pozitivitatea neîntârziată a testului. Notă: Platelia™ Aspergillus Ag are menirea de a sesrvi drept sprijin pentru diagnosticarea aspergilozei invazive. Rezultatele pozitive obținute prin intermediul Platelia™ Aspergillus Ag trebuie să fie luate în considerare împreună cu alte proceduri de diagnostic, precum cultura microbiologică, examinarea histologică a probelor de biopsie şi dovezile radiografice,

8

Exemplu de calcul:

Probă Absorbanță (DO)

Control negativ (R3) 0,116

Control de calibrare (R4) 0,513 0,533

Control pozitiv (R5) 1,834

Probă pacient #1 0,134



Calcule Consultați secțiunea cu privire la Controlul calității (Criteriile de validitate) pentru a studia un exemplu de calcul menit să determine validitatea controlurilor de testare. Valoarea medie a controlului de calibrare Pentru a calcula valoarea media DO corespunzătoare controlului de calibrare (R4), adunați valorile DO pentru fiecare control de calibrare replicat și împărțiți rezultatul la 2: (0,513 + 0,533) ÷ 2 = 0,523 Proba pacient #1 Pentru a calcula indicele corespunzător probei pacient #1, împărțiți DO corespunzătoare probei pacient #1 la valoarea medie a DO corespunzătoare controlului de calibrare:

I = 0,134

= 0,26 0,523

În acest exemplu, proba pacient #1 este negativă, întrucât indicele 0.26 este < 0.50. Proba pacient #2 Pentru a calcula indicele corespunzător probei pacient #2, împărțiți DO corespunzătoare probei pacient #2 la valoarea medie a DO corespunzătoare controlului de calibrare:

I = 0,436

= 0,83 0,523

În acest exemplu, proba pacient #2 este pozitivă, întrucât indicele 0.83 este 0.50. Proba pacient #3 Pentru a calcula indicele corespunzător probei pacient #3, împărțiți DO corespunzătoare probei pacient #3 la valoarea medie a DO corespunzătoare controlului de calibrare:

I = 1,196

= 2,29 0,523

În acest exemplu, proba pacient #3 este pozitivă, întrucât indicele 2,29 este 0,50. Consultați Interpretarea rezultatelor pozitive în Secțiunea 12. 13- LIMITĂRI ALE PROCEDURII 1. Un rezultat negativ pentru proba de ser și/sau lichid BAL nu poate exclude diagnosticul de aspergiloză invazivă.

Probele de ser ale pacienților care prezintă risc de aspergiloză invazivă trebuie testate de două ori pe săptămână. 2. Procedura corespunzătoare testului Platelia™ Aspergillus Ag și interpretarea rezultatelor trebuie respectate la testarea

probelor pentru detectarea antigenului galactomanan. Este recomandat ca utilizatorul acestui kit să citească cu atenție prospectul inclus înainte de efectuarea testului. În mod special, procedura de testare trebuie respectată cu atenție în ceea ce privește pipetarea probei și a reactivului, spălarea plăcii și cronometrarea etapelor de incubare.

3. Dacă eșantionul sau reactivii nu sunt adăugați conform instrucțiunilor, acest lucru ar putea conduce la un test fals negativ. Va fi luată în considerare repetarea testării de probe suplimentare în cazul în care există suspiciune clinică de aspergiloză invazivă sau de eroare procedurală.

4. Contaminarea unor eșantioane Negativ prelevate de la pacienți cu control/eșantioane pozitive prelevate de la alți pacienți este posibilă în cazul în care conținutul unui godeu se varsă într-un alt godeu ca urmare a manipulării brutale a microplăcii sau ca urmare a tehnicii de pipetare necorespunzătoare la adăugarea reactivilor.

5. Nu au fost evaluate performanțele testului Platelia™ Aspergillus Ag cu eșantioane neonatale. O mai mare frecvență a numărului de rezultate fals pozitive cu privire la prezența galactomananului este raportată de literatura europeană în cazul probelor prelevate de la populația neonatală13, 15, 34, 44..

6. Platelia™ Aspergillus Ag poate prezenta o detectarea redusă a galactomananului în cazul pacienților cu boala granulomatoasa cronica (CGD) și cu sindromul Job 56, 58.

9

7. Utilizarea concomitentă a terapiei antifungice cu mucegai activ în cauzl unor pacienți cu aspergiloză invazivă poate

determina o sensibilitate redusă la Platelia™ Aspergillus Ag 30, 31. 8. Platelia™ Aspergillus Ag nu a fost evaluat pentru utilizare cu plasmă sau alte tipuri de probe, cum ar fi urina sau CSF. 9. Nu au fost stabilite performanțele Platelia™ Aspergillus Ag în cazul citirii manuale și/sau a determinării rezultatelor pe cale

vizuală. 10. Alte genuri de fungi, cum ar fi Penicillium, Alternaria Paecilomyces, Geotrichum și Histoplasma prezintă reactivitate, la

șobolani, la anticorpi monoclonali EBA-2 folosiți la testele pentru detectarea galactomananului aspergilar. Histoplasmoza trebuie luată în considerare în zonele endemice, inclusiv în anumite zone ale Statelor Unite36, 50, 59.

11. Nu a fost evaluată reactivitatea încrucișată a probelor de lichid BAL la Mycoplasma pneumoniae sau la anestezicele/lubrifianții utilizați pentru insensibilizarea zonei gâtului în vederea procesului de aspirare.

12. Reacții pozitive fără semne clinice: Cele de mai jos trebuie luate în considerare în ceea ce privește detectarea timpurie a antigenului galactomanan în ser sau BAL înainte de apariția semnelor clinice și/sau radiologice. Rezultatele pozitive ale testelor, în lipsa semnelor clinice, sunt de obicei studiate și s-a constatat corespondența dintre acestea și rezultate „real pozitive” în cazul pacienților care sunt diagnosticați ulterior cu aspergiloză invazivă dovedită sau probabilă 30.

Cu toate acestea, în unele cazuri particulare, câțiva factori specifici trebuie luați în considerare la interpretarea testului: a. Au fost raportate rezultate pozitive ale testelor, în lipsa semnelor clinice, în special la copii mici 44. Deși unele dintre

aceste cazuri ar putea avea legătură cu circulația reală a antingenului aspergilar, majoritatea cazurilor pot fi considerate ca fiind fals pozitive7.

b. Galactofuranoza a fost identificată în diferite alimente, în scpeial în cereale, produse pe bază de cereale și deserturi pe bază de smântână/frișcă 1, 27. Spre deosebire de laptele uman, laptele de vacă conține adeseori concentrații ridicate de galactomanan 13. Prin urmare, factorul dietă trebuie să fie luat în considerare la interpretarea cursului antigenemiei la copii mici și, în general, la pacienții cu bariera intestinală modificată 6,13. Orice caz de antigenemie pozitivă ce nu este însoțită de semne clinice trebuie interpretată cu și mai mare atenție în cazul acestei grupe de pacienți.

Au fost raportate rezultate pozitive pentru prezența galactomananului la pacienți care sunt tratați cu piperacilină / tazobactam. De asemenea, există rapoarte cu privire la anumite loturi sau serii de piperacilină / tazobactam care s-au dovedit a fi pozitive pentru antigenul galactomanan. În consecință, rezultatele pozitive la pacienții cărora le sunt administrate piperacilină / tazobactam trebuie să fie interpretate cu atenție și confirmate și prin alte metode de diagnostic. Prezența galactomananului a mai fost raportată și în cazul anumitor loturi de amoxicilină asociată cu preparate de acid clavulanic parenterale. În consecință, tratamentele semi-sintetice ß-lactam trebuie luate în considerare la interpretarea testului 1, 3, 32..

Cu toate acestea, întrucât Platelia™ Aspergillus Ag poate detecta antigenul galactomanan cu mult înainte de apariția semnelor clinice sau radiologice, prezența aspergilozei invazive nu poate fi exclusă. Prin urmare, pacienții tratați cu piperacilină / tazobactam care înregistrează rezultate pozitive la testare trebuie monitorizați cu atenție.

d. Reacții pozitive în absența semnelor clinice pot fi observate la pacienții cărora le sunt administrate produse ce conțin galactomanan, parenteral sau oral (în prezența unei alterări a barierei intestinale). Prezența galactomananului în aceste produse poate fi explicată adeseori prin utilizarea unui proces de fermentație bazat pe microorganisme fungice. Însă rezultatul pozitiv nu va fi observat la pacient cu excepția cazului în care concentrația galactomananului exogen în ser atinge sau depășește pragul de detecție al testului. Prin urmare, în cazul unui rezultat pozitiv suspicios, în absența altor semne clinice, recomandăm examinarea produselor administrate pacientului, în special procesul de producție al acestora și originea materiei prime utilizate 14,

41, 49. 13. Există rapoarte cu privire la reacții pozitive pentru galactomanan în ser și lichid de lavaj bronho-alveolar asociat cu

PLASMA-LYTE™ ca urmare a observațiilor din câteva studii 14, 41. Prin urmare, orice administrare de PLASMA-LYTE™ trebuie luată în considerare la interpretarea rezultatelor acestui test..

14. Rezultatele Platelia™ Aspergillus Ag în probe de lichid de lavaj bronho-alveolar (BAL) prelevate de la pacienții non-imunocompromiși trebuie interpretate cu atenție.37

15. Rezultatele apropiate d evaloarea de referință a indicelui (0.5), trebuie interpretate cu atenție și trebuie să fie susținute de alte dovezi clinice, radiologice sau de laborator cu privire la aspergiloza invazivă, întrucât nu există o zonă gri în ceea ce privește interpretarea rezultatelor testului.

16. În plus, rezultatele Platelia™ Aspergillus Ag în probe de lichid de lavaj bronho-alveolar (BAL cu un indice cuprins în intervalul 0.5-1.0 au o valoare predictivă mai mică decât rezultatele probelor BAL cu o valoare a indicelui > 1.0, în consecință, rezultatele cu o valoare a indicelui cuprinsă în intervalul 0.5-1.0 trebuie revizuite și susținute de alte dovezi clinice, radiologice sau de laborator cu privire la aspergiloza invazivă 8, 17.

14- REZULTATE PRECONIZATE I. SER Răspândirea preconizată a aspergilozei invazive în cadrul grupelor de pacienți variază; au fost raportate valori cuprinse în intervalul 5-20%10, 16. Rezultatele ce urmează sunt obținute din studii clinice care au inclus pacienți pediatrici (vârsta ≤ 21 ani), din Statele Unite, precum și pacienți adulți din America de Nord.

10

A.-Pediatrie În cadrul a trei centre de testare din Statele Unite a fost desfășurat un studiu clinic care a inclus un număr total de 1954 de probe de ser prelevat de la 129 de pacienți pediatrici imunocompromiși (vârsta ≤ 21 ani) care prezentau un risc ridicat de aspergiloză invazivă (IA) și care a inclus și pacienți diagnosticați cu aspergiloză invazivă dovedită și probabilă, pentru a determina caracteristicile de performanță ale Platelia™ Aspergillus Ag. Distribuția valorilor indicilor aferenți acestor grupe de pacienți este prezentată în diagramele următoare: Pacienți pediatrici diagnosticați fără aspergiloză invazivă (grupă de pacienți de control) În cadrul a trei centre de testare din Statele Unite au fost testate 1625* de probe de ser pediatric prelevat de la 108 pacienți pediatrici imunocompromiși pentru a determina caracteristicile de performanță ale Platelia™ Aspergillus Ag. Distribuția valorilor indicilor aferenți probelor este prezentată în diagrama ce urmează: Figura 1

*Notă: Au fost excluse 80 probe prelevate de la 4 pacienți de control pentru care au fost obținute rezultate pozitive cu privire la prezența antigenului galactomanan și care erau supuși unei terapii cu piperacilină / tazobactam (Zosyn®) Pacienți pediatrici diagnosticați cu aspergiloză invazivă Diagrama de dispersie prezintă rezultatele testului cu privire la detectarea galactomananului pentru 249 de probe de ser prelevate de la 17 pacienți incluși în acest studiu, diagnosticați cu aspergiloză invazivă dovedită sau probabilă, conform definițiilor EORTC/NIAID. Nu fiecare probă de ser prelevată de la pacienți este preconizată a fi pozitivă. Frecvența preconizată a aspergilozei invazive în cadrul grupelor de pacienți variază; au fost raportate valori cuprinse în intervalul 5-20% 10, 24. Rata de frecvență aferentă acestui studiu a fost de 13.6%. Figura 2

11

B. Adulți În cadrul a trei centre de testare din America de Nord a fost desfășurat un studiu clinic care a inclus 1724 de probe de ser prelevate de la 172 de pacienți bolnavi de leucemie care au suferit un transplant de măduvă osoasă (BMT), diagnosticați cu sau fără aspergiloză invazivă, pentru a determina caracteristicile de performanță ale Platelia™ Aspergillus Ag. Distribuția valorilor indicilor aferente acestor grupe de pacienți este reprezentată în diagramele următoare. Pacienți adulți diagnosticați fără aspergiloză invazivă (grupă de pacienți de control) În cadrul a trei centre de testare din America de Nord au fost testate cu Platelia™ Aspergillus Ag test 1262 de probe de ser prelevate de la 143 de pacienți bolnavi de leucemie care au suferit un transplant de măduvă osoasă (BMT), pentru a determina caracteristicile de performanță ale Platelia™ Aspergillus Ag. Distribuția valorilor indicilor aferente acestor grupe de pacienți este reprezentată în diagrama următoare. Figura 3

Pacienți adulți diagnosticați cu aspergiloză invazivă Diagrama de dispersie prezintă rezultatele testului cu privire la detectarea galactomananului pentru 462 de probe de ser prelevate de la 29 pacienți incluși în acest studiu, diagnosticați cu aspergiloză invazivă dovedită sau probabilă, conform definițiilor EORTC/NIAID. Nu fiecare probă de ser prelevată de la pacienți este preconizată a fi pozitivă. Frecvența preconizată a aspergilozei invazive în cadrul grupelor de pacienți variază; au fost raportate valori cuprinse în intervalul 5-20% have been reported 10, 24. Rata de frecvență aferentă acestui studiu a fost de 16.9%. Figura 4

Graficele următoare reprezintă un exemplu de pacient care nu a prezentat semne sau simptome clinice de aspergiloză invazivă (negativ pentru Aspergillus) și, respectiv, de un pacient cu aspergiloză invazivă dovedită sau probabilă (pozitiv pentru Aspergillus).

12

Figura 5 Pacient negativ

Figura 6 Pacient pozitiv

II. LICHIDUL BAL În Statele Unite au fost realizate două studii care au inclus un total de 449 probe BAL prelevate de la 178 de beneficiari de transplant de organe solide (SOT) și de transplant de plămâni, cu și fără aspergiloză invazivă pentru a determina caracteristicile de performanță ale kitului pentru Platelia™ Aspergillus Ag cu probe de lichid de lavaj bronho-alveolar (BAL). Dintre acestea, 403 probe BAL au fost prelevate de la 167 beneficiari de transplant de organe solide și de plămâni fără aspergiloză invazivă. În plus, a fost realizată o analiză retrospectivă a probelor BAL prelevate de la 99 de pacienți evaluați cu risc hematologic crescut în cadrul unui studiu desfășurat în afara Statelor Unite care include 58 de pacienți cu aspergiloză invazivă dovedită sau probabilă. Valorile preconizate aferente probelor BAL combinate de la beneficiarii de SOT și transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă sunt prezenate în tabelul de mai jos. Rezultatele sunt prezentate în funcție de probe de la beneficiarii de transplant cu sau fără colonie de mucegai. Tabel 1 Valori preconizate în funcție de probe Combinație între beneficiarii de SOT și de transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă N =403 lichide BAL

Diagnostic N Pozitiv (%) Negativ (%)Controale fără colonizare 341 11/341(3.2%) 330/341(96.8%) Controale cu colonizare 62 12/62 (19.4%) 50/62 (80.6%)

Control Total 403 23/403(5.7%) 380/403(94.3%) Valorile preconizate pentru probele BAL aferente combinației dintre beneficiarii de SOT și de transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă sunt prezentate în tabelul de mai jos, in funcție de tipul de transplant

13

Tabel 2 Valori preconizate în funcție de probe Combinație între beneficiarii de SOT și transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă În funcție de tipul de transplant N =403 lichide BAL

Tip transplant N Pozitiv (%) Negativ (%)Inimă 28 3/28 (10,7%) 25/28 (89,3%)

Rinichi 25 3/25 (12,0%) 22/25 (88,0%) Ficat 23 1/23 (4,3%) 22/23 (95,7%)

Plămân 327 16/327 (4,9%) 311/327 (95,1%) Control Total 403 23/403 (5,7%) 380/403 (94,3%)

Valorile preconizate au fost, de asemenea, evaluate în 41 de probe de lichid BAL prelevate de la 41 de pacienți suferinzi de afecțiuni hematologice fără aspergiloză invazivă și sunt prezentate în tabelul de mai jos: Tabel 3 Valori preconizate în funcție de probe Pacienți suferinzi de afecțiuni hematologice fără aspergiloză invazivă N =41 lichide BAL

Diagnostic N Pozitiv (%) Negativ (%)Pacienți 41 8/41 (19,5%) 33/41 (80,5%)

15- CARACTERISTICI DE PERFORMANȚĂ SPECIFICE A- REPRODUCTIBILITATEA a) Studii de reproductibilitate cu privire la ser Variabilitatea inter-test și intra-test corespunzătoare testului Platelia™ Aspergillus Ag a fost determinată printr-un studiu ce a inclus un panel de 6 probe de ser cumulate prelevate de la pacienți (una Negativă, una scăzut Pozitivă, două Pozitive și două ridicat Pozitive) obținute în cadrul a trei locații de studii clinice din America de Nord. Fiecare dintre cei 6 membri ai panelului a fost testat în de trei ori (3x) în 3 zile diferite, cu același lot, în două locații (număr total de reproduceri la fiecare locație = 9). Fiecare dintre cei 6 membri ai panelului a fost testat în de două ori (2x) în 3 zile diferite, cu 1 lot, în o a treia locație (număr total de reproduceri la a treia locație = 6). Un (1) operator a efectuat toate testările de precizie în fiecare locație. Datele au fost analizate conform Clinical Laboratory Standards Institute (Institutul pentru Standarde Clinice de Laborator) (CLSI) (anterior cunoscut drept National Committee for Clinical Laboratory Standards (Comitetul Național pentru Standarde Clinice de Laborator (NCCLS)). Valoarea medie a densității optice (DO) și valoarea medie a indicelui, abaterea standard (AS), procentul coeficientului de variație (%CV), în testarea de precizie (intra-test) și pe locație (inter-test) pentru fiecare membru al panelului, la fiecare locație sunt ilustrate în tabelele de mai jos. Tabel 4 Locația 1 Membru panel

DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice

N 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 3 3 6 6 3 3

Valoare medie 0,052 0.09 0.445 0.74 0.702 1.17 0.931 1.563 1.227 2.06 2.887 4.83 0.046 0.08 0.606 1.00 2.216 3.67

AS test (intra‐

testare)1 0.002 0.00 0.022 0.03 0.059 0.09 0.044 0.08 0.051 0.09 0.089 0.17 N/A N/A 0.02 0.03 N/A N/A

%CV N/A N/A 4.8% 4.4% 8.4% 7.6% 4.7% 5.1% 4.2% 4.4% 3.1% 3.6% N/A N/A 3.7% 3.4% N/A N/A

AS total (inter‐

test) 2 0.036 0.04 0.051 0.08 0.070 0.14 0.044 0.25 0.058 0.29 0.169 0.58 N/A N/A 0.102 0.03 0.317 0.12

%CV N/A N/A 11.5% 10.4% 10.0% 11.6% 4.7% 15.7% 4.7% 14.3% 5.9% 11.9% N/A N/A 16.9% 2.8% 14.3% 3.3%

Rid. Poz. #2 Control neg. Control CO Control poz.Neg Sc. Poz. Poz.#1 Poz.#2 Rid. Poz. #1

Locația 2 Membru panel


N 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 3 3 6 6 3 3

Valoare medie 0.040 0.10 0.280 0.70 0.364 0.89 0.602 1.49 0.801 2.01 1.361 3.43 0.074 0.18 0.415 1.00 1.197 2.97

AS test (intra‐


%CV N/A N/A 14.5% 13.0% 6.4% 7.6% 7.5% 7.1% 5.7% 4.8% 3.5% 3.2% N/A N/A 1.1% 1.1% N/A N/A

AS total (inter‐

test) 2 0.006 0.03 0.058 0.19 0.083 0.18 0.057 0.28 0.042 0.53 0.079 1.00 N/A N/A 0.094 0.01 0.068 0.54

%CV N/A N/A 20.8% 27.0% 22.7% 19.8% 9.5% 18.7% 5.3% 26.5% 5.8% 29.2% N/A N/A 22.7% 0.9% 5.7% 18.2%

Control CO Control poz.Neg Sc. Poz. Poz.#1 Poz.#2 Rid. Poz. #1 Rid. Poz. #2 Control neg.

14

Locația 3 Membru panel


N 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 3 3 6 6 3 3

Valoare medie 0.049 0.10 0.388 0.81 0.652 1.36 0.830 1.73 1.158 2.41 2.378 4.96 0.059 0.12 0.480 1.00 1.652 3.45

AS test (intra‐


%CV N/A N/A 2.4% 2.4% 12.5% 12.2% 8.2% 8.2% 8.1% 8.2% 5.3% 5.1% N/A N/A 5.8% 5.8% N/A N/A

AS total (inter‐

test) 2 0.012 0.03 0.078 0.13 0.068 0.15 0.104 0.25 0.082 0.15 0.111 0.34 N/A N/A 0.028 0.04 0.056 0.23

%CV N/A N/A 20.0% 15.8% 10.5% 11.1% 12.5% 14.3% 7.1% 6.2% 4.7% 6.8% N/A N/A 5.8% 4.1% 3.4% 6.6%

Control poz.Neg Sc. Poz. Poz.#1 Poz.#2 Rid. Poz. #1 Rid. Poz. #2 Control neg. Control CO

b) Reproductibilitatea aferentă lichidului BAL Variabilitatea inter-test și intra-test corespunzătoare testului Platelia™ Aspergillus Ag a fost determinată printr-un studiu ce a inclus un panel de 4 probe de BAL cumulate, contaminate cu galactomanan purificat, prelevate de la pacienți (una Negativă, una ridicat Negativă, una scăzut Pozitivă și una mediu Pozitivă) în trei locații de studii clinice (două locații de testare din SUA și o locație internă). Fiecare dintre cei 4 membri ai panelului și materialele de control a fost testat în de două ori (2x) în 2 runde de testare pe zi, în 5 zile diferite, cu același lot (număr total rezultate în fiecare locație = 120). Doi (2) operatori au efectuat toate testările de precizie în fiecare locație. Datele au fost analizate conform Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) (anterior cunoscut drept National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)). Valoarea medie a densității optice (DO) și valoarea medie a indicelui, abaterea standard (AS), procentul coeficientului de variație (%CV), în testarea de precizie (intra-test) și între locații, între operatori și între testare (inter-test) pentru fiecare membru al panelului sunt ilustrate în tabelele de mai jos. Tabel 5 Combinație locații Sumar

Sumar Negativ Negativ ridicat Pozitiv Scăzut Pozitiv Mediu

Control Pozitiv

ControlNegativ

N= 60 N=60 N=60 N=60 N=60 N=60DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice DO Indice

Valoare medie

0.121 0.29 0.214 0.50 0.375 0.88 0.575 1.35 1.580 3.72 0.047 0.11

În cadrul testării (Intra Test)

AS N/A N/A 0.037 0.103 0.035 0.078% 0.029 0.067 0.111 0.265 N/A N/A

%CV N/A N/A 17.4% 20.5% 9.3% 8.9% 5.0% 5.0% 7.0% 7.1% N/A N/A

Total (Inter Test)

AS N/A N/A 0.042 0.095 0.061 0.122 0.070 0.138 0.190 0.438 N/A N/A

%CV N /A N/A 19.6% 18.9% 16.2% 13.9% 12.2% 10.2% 12.0% 11.8% N/A N/A

B- REACTIVITATE ÎNCRUCIȘATĂ a) Reactivitate încrucișată - Ser Un lot de kituri Platelia™ Aspergillus Ag a fost utilizat pentru realizarea unui studiu menit să evalueze efectele afecțiunilor medicale cu potențial de interferență fără legătură cu aspergiloza invazivă. Următoarele probe de ser au fost testate pentru reactivitate încrucișată cu Platelia™ Aspergillus Ag. A fost testat un număr total de 151 de seruri.

15

Tabel 6 Patologie # Probe testate Pozitive

Factor reumatoid 10 0

ANA Pozitiv 10 0

Hipergamaglobulinemie IgG 10 0

Hipergamaglobulinemie IgM 10 0

Cancer* 11 0Ciroză non‐virală (primordial

biliară; indusă de alcool;

indusă de droguri 10 0

Transfuzii multiple 10 0

Femei multipare 10 0

HAV 10 0

HCV 10 0

Rubella 10 0

CMV 10 0

Sifilis (RPR+) 10 0

Toxoplasmoză 10 0

Mycoplasmă 10 0 * Câte unul pentru vezica urinară, sâni (2), colon, endometriale, plămân, prostată, renal și scuamoase (3). C- Testare clinică STUDII CLINICE ÎN AMERICA DE NORD I. PROBE DE SER Testările clinice pentru evaluarea sesibilității, specificității și a valorii predictive a Platelia™ Aspergillus Ag au fost efectuate pe pacienți pediatrici (vârsta ≤ 21 de ani) în trei locații din Statele Unite, precum pe pacienți adulți în trei locații din America de Nord. Studiile au fost desfășurate utilizând un total de 1954 de probe de ser prelevate de la 129 de pacienți pediatrici și un total de 1724 de probe de ser prelevate de la 172 de pacienți adulți provenind din următoarele grupe de pacienți*: Pacienți fără semne de aspergiloză invazivă (pacienți de control) Pacienți cu aspergiloză invazivă probabilă Pacienți cu aspergiloză invazivă dovedită * În anul 2002, Invasive Fungal Infection Cooperative Group (Grupul de Cooperare pentru Infecții Fungice Invazive) (IFICG) din cadrul European Organization for Research and Treatment of Cancer (Organizația Europeană pentru Cercetarea și Tratarea Cancerului) (EORTC) și Mycosis Study Group (Grupul de Studiu pentru Micoze) (MSG) din cadrul National Institute of Allergy and Infectious Diseases (Institutul National de Alergii si Boli Infectioase) (NIAID) au definit criteriile pentru diagnosticarea aspergilozei invazive (IA) la pacienții cu boli hematologice maligne sau transplant de celule stem hematopoietice.2 SENSIBILITATE A. Pediatrie Rezultate ale acestui studiu au fost analizate din punctul de vedere al sensibilității pacientului. Testul de sensibilitate a fost efectuat utilizând Platelia™ Aspergillus Ag în trei locații pe un număr total de 17 pacienți pediatrici imunocompromiși diagnosticați cu aspergiloză invazivă dovedită sau probabilă. Tabel 7

Diagnostic Număr de pacienți Sensibilitate 95% Interval de

încredere

Aspergiloză dovedită 9 44,4% (4/9) 18,9-73,3%

Aspergiloză probabilă 8 62,5% (5/8) 30,6-86,3%

Combinație Aspergiloză dovedită și Aspergiloză probabilă

17* 52,9% (9/17) 31,0-73,8%

*Notă: Pentru 8 din 17 pacienți s-au înregistrat rezultate negative pentru antigenul galactomanan aspergilar. Toți cei 8 pacienți pentru care au fost înregistrate rezultate negative pentru antigenul galactomanan aspergilarau fost tratați cu multipli agenți antifungici. Utilizarea concomitentă a terapiei multifungice cu mucegai activ la unii dintre pacienții cu aspergiloză invazivă poate avea drept rezultat o sensibilitate mai mare a acestora31.

16

B. Adulți Testul de sensibilitate a fost efectuat utilizând Platelia™ Aspergillus Ag în trei locații pe un număr total de 29 de pacienți adulți diagnosticați cu leucemie, care au suferit un transplant de măduvă ososasă (BMT) și care au fost diagnosticați cu aspergiloză dovedită sau probabilă. Tabel 8

SPECIFICITATE A. Pediatrie Specificitatea la pacienții pediatrici Testul de specificitate a fost efectuat utilizând Platelia™ Aspergillus Ag în trei locații pe un număr total de 108* pacienți pediatrici imunocompromiși fără semne de aspergiloză invazivă (pacienți de control). Tabel 9

*Notă: Au fost excluși 4 pacienți cu rezultate pozitive pentru antigenul galactomanan și care erau supuși unei terapii cu piperacilină / tazobactam. Specificitatea la probe pediatrice Testul de specificitate a fost efectuat utilizând Platelia™ Aspergillus Ag în trei locații pe un număr total de 1625* probe prelevate de la 108 pacienți pediatrici imunocompromiși fără semne de aspergiloză invazivă (pacienți de control). Tabel 10

Locație Număr de pacienți Specificitate 95% Interval de încredere

1 794 98,9% (785/794) 97,9-99,4%

2 731 97,8% (715/731) 96,5-98,6%

3 100 100% (100/100) 96,3-100%

Combinație locații 1625 98,5% (1600/1625) 97,7-99,0%

*Notă: Au fost excluse 80 de probe prelevate de la 4 pacienți cu rezultate pozitive pentru antigenul galactomanan și care erau supuși unei terapii cu piperacilină / tazobactam B. Adulți Specificitatea la pacienți adulți Testul de specificitate a fost efectuat utilizând Platelia™ Aspergillus Ag în trei locații pe un număr total de 149 de pacienți adulți diagnosticați cu leucemie, care au suferit un transplant de măduvă ososasă (BMT, fără semne de aspergiloză invazivă (pacienți de control).

Diagnostic Număr de pacienți Sensibilitate 95% Interval de încredere

Aspergiloză dovedită 11 81,8% (9/11) 52,3-94,9%

Aspergiloză probabilă 18 77,8% (14/18) 54,8-91,0%


29 79,3% (23/29) 61,6-90,2%


1 44 86,4 % (38/44) 73,3-93,6%

2 59 86,4 % (51/59) 75,5-93,0%

3 5 100% (5/5) 56,6-100%


17

Tabel 11

Specificitatea la probe adulți Testul de specificitate a fost efectuat utilizând Platelia™ Aspergillus Ag în trei locații pe un număr total de 1262 probe prelevate de la 143 de pacienți adulți diagnosticați cu leucemie, care au suferit un transplant de măduvă ososasă (BMT, fără semne de aspergiloză invazivă (pacienți de control). Tabel 12

VALOARE PREDICTIVĂ Valorile predictive pozitive și negative au fost analizate pentru grupa de pacienți incluși în acest studiu. Pe baza valorilor medii reale a ratei de prevalență de 13,6% în Pediatrie și a ratei de prevalență de 16,9% la adulți constatate în cadrul acestui studiu, valorile predictive pozitive și negative au fost calculate după cum urmează: A. Pediatrie Prevalență studiu 13,6% PPV: 39,1% 95% Interval de încredere : 22,2-59,2% NPV: 92,2% 95% Interval de încredere : 85,3-96,0% B. Adulți Prevalență studiu 16.9% PPV: 59,0% 95% Interval de încredere:43,4-72,9% NPV: 95,5% 95% Interval de încredere: 90,5-97,9% Prevalența preconizată a aspergilozei invazive variază în cadrul grupelor de pacienți; au fost raportate valori în intervalul 5-20%10, 24. Pentru grupa de pacienți din zona valorilor scăzute ale prevalenței constatate valorile predictive pozitive și negative au fost recalculate după cum urmează cu ajutorul unei rate de prevalență de 5%. A. Pediatrie Prevalență calculată 5% PPV : 17,6% 95% Interval de încredere : 6,5-39,8% NPV : 97,2% 95% Interval de încredere : 92,1-99,1% B. Adulți Prevalență calculată 5% PPV: 27,2% 95% Interval de încredere: 13,7-46,7% NPV: 98,8% 95% Interval de încredere: 95,4-99,7% II. PROBE LICHID BAL – Caracteristici de performanță Sensibilitatea și specificitatea aferente Platelia™ Aspergillus Ag în cazul probelor de lichid BAL au fost evaluate în cadrul a două studii efectuate în Statele Unite pe 116 probe prelevate de la 62 de beneficiari de transplant de organe solide și pe 333 de probe prelevate de la 116 beneficiari de transplant de plămâni, precum și în cadrul unui studiu efectuat în afara Statelor Unite pe 99 de probe prelevate de la 99 de pacienți cu risc ridicat de afecțiuni hematologice cu și fără aspergiloză invazivă.


1 28 78,6% (22/28) 60,5-89,8%

2 77 93,4% (71/77) 84,0-96,4%

3 38 89,5% (34/38) 75,9-95,8%



1 349 98,0% (342/349) 95,9-99,0%

2 560 98,6% (552/560) 97,2-99,3%

3 353 98,9% (349/353) 97,1-99,6%


18

A.SENSIBILITATEA Sensibilitatea a fost evaluată în cazul unor beneficiari de transplant de organe solide și beneficiari de transplant de plămâni diagnosticați cu aspergiloză invazivă, precum și în cazul unor pacienți cu afecțiuni hematologice diagnosticați cu aspergiloză invazivă în conformitate cu criteriile EORTC/MSG. I. Beneficiari de transplant organe solide cu aspergiloză invazivă Din numărul total de 116 probe prelevate de la beneficiari de transplant de organe solide din cadrul unui studiu, a fost evaluată sensibilitatea pentru 5 beneficiari diagnosticați cu aspergiloză invazivă conform tabelului de mai jos: Tabel 13 Aspergiloza invazivă dovedită sau probabilă la beneficiarii de transplant de organe solide În funcție de pacient

Diagnostic N Indice ≥ 0.5 Sensibilitate 95% Interval de încredere

Aspergiloză dovedită 2 2 2/2 (100%) 34,2 - 100%

Aspergiloză probabilă 3 3 3/3 (100%) 43,8 - 100%


5 5 5/5 (100%) 56,5 - 100%

Tabel 14 Aspergiloza invazivă dovedită sau probabilă la beneficiarii de transplant de organe solide În funcție de tipul de transplant

II. Beneficiarii de transplant de plămâni cu aspergiloză invazivă Din numărul total de 333 probe prelevate de la 116 beneficiari de transplant de plămâni din cadrul unui alt studiu, a fost evaluată sensibilitatea pentru 6 beneficiari diagnosticați cu aspergiloză invazivă conform tabelului de mai jos: Tabel 15 Aspergiloza invazivă dovedită sau probabilă la beneficiarii de transplant de plămâni În funcție de pacient

III. Pacienții cu afecțiuni hematologice cu aspergiloză invazivă Sensibilitatea a mai fost evaluată și în cadrul unui al treilea studiu pe 58 de probe prelevate de la 58 de pacienți cu afecțiuni hematologice diagnosticați cu aspergiloză invazivă, conform tabelului de mai jos. În cadrul studiului a fost realizată o analiză retrospectivă asupra probelor BAL prelevate de la pacienții cu risc hematologic ridicat utilizând Platelia™ Aspergillus EIA. Datele obținute din acest studiu publicat, prezentate mai jos, au fost evaluate pentru a determina caracteristicile de performanță ale Platelia™ Aspergillus EIA în cazul lichidului BAL29.

Tip transplant N Indice ≥ 0.5 Sensibilitate 95% Interval de încredere

Inimă 1 1 1/1 (100%) 20,6 - 100%

Rinichi 3 3 3/3 (100%) 43,8 - 100%

Ficat 1 1 1/1 (100%) 20,6 - 100%

Total 5 5 5/5 (100%) 56,5 - 100%

Diagnostic N Indice ≥ 0.5 Sensibilitate 95% Interval de

încredere

Aspergiloză dovedită 2 1 1/2 (50,0%) 9,4 - 90,6%

Aspergiloză probabilă 4 3 3/4 (75,0%) 30,0 - 95,4%


6 4 4/6 (66,7%) 30,0 - 90,3%

19

Tabel 16 Aspergiloza invazivă dovedită sau probabilă la pacienții cu afecțiuni hematologice

B. SPECIFICITATEA Specificitatea a fost evaluată pe un număr total de 98 probe BAL prelevate de la 57 beneficiari SOT și pe 305 probe BAL prelevate de la 110 beneficiari de transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă, confomr tabelului de mai jos. Rezultatele sunt prezentate în funcție de probele prelevate de la beneficiarii de transplant cu sau fără colonizare cu mucegai. Tabel 17 Specificitatea în funcție de probe Beneficiari SOT și de transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă N = 403 lichide BAL

Specificitatea în cazul probelor BAL pentru combinația de beneficiari de SOT și de transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă este prezentată în tabelul 18 de mai jos, în funcție de tipul de transplant. Tabel 18 Specificitatea în funcție de probe Combinație de beneficiari de SOT și de transplant de plămâni fără aspergiloză invazivă În funcție de tipul de transplant N = 403 lichide BAL

Tip transplant N Indice< 0.5

Negativ (%) 95% Interval de încredere

Inimă 28 25 25/28 (89,3%) 72,8 - 96,3% Rinichi 25 22 22/25 (88,0%) 70,0 - 95,8% Ficat 23 22 22/23 (95,7%) 79,0 - 99,2%

Plămâni 327 311 311/327 (95,1%) 92,2 - 97,0% Control Total 403 380 380/403 (94,3%) 91,6 - 96,2%

Specificitatea a mai fost evaluată pentru un număr total de 41 probe BAL prelevate de la 41 pacienți cu afecțiuni hematologice fără aspergiloză invazivă și este prezentată în tabelul de mai jos. Tabel 19 Specificitatea în funcție de probe Pacienți cu afecțiuni hematologice fără aspergiloză invazivă N= 41

Diagnostic N Indice ≥ 0.5 Sensibilitate 95% Interval de

încredere

Aspergiloză dovedită 31 31 31/31 (100%) 89,0 - 100%

Aspergiloză probabilă 27 26 26/27 (96,3%) 81,7 - 99,3%


58 57 57/58 (98,3%) 90,8 - 99,7%

Diagnostic N Indice< 0.5

Negativ (%) 95% Interval de

încredere Controale fără colonizare 341 330 330/341(96,8%) 94,3 - 98,2% Controale cu colonizare 62 50 50/62 (80,6%) 69,1 - 88,6%

Control Total 403 380 380/403(94,3%) 91,6 - 96,2%

Diagnostic N Indice< 0.5

Negativ (%) 95% Interval de

încredere Pacienți de control 41 33 33/41 (80,5%) 66,0 – 89,8%

20

16- BIBLIOGRAFIE 1. Ansorg, R., R. Van Den Boom, and P.M. Rath. 1997. Detection of Aspergillus galactomannan antigen in foods and antibiotics.

Mycoses 40 : p. 353-7. 2. Ascioglu, S., J. H. Rex, B. De Pauw, J. E. Bennett, J. Bille, F. Crokaert, D. W. Denning, J. P. Donnelly, J. E. Edwards, Z.

Erjavec, D. Fiere, O. Lortholary, J. Maertens, J. F. Meis, T. F. Patterson, J. Ritter, D. Selleslag, P. M. Shah, D. A. Stevens and T. J. Walsh. 2002. Defining opportunistic invasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: an international consensus. Clin.Infect.Dis. 34 : p. 7-14.

3. Aubry, A., R. Porcher. J. Bottero, S. Touratier, T. Leblanc, B. Brethon, P. Rousselot, E. Raffoux, J. Menotti, F. Derouin, P. Ribaud and A. Sulahian 2006. Occurrence and Kinetics of False-Pozitiv Aspergillus GalactomannanTest Results following Treatment with β-Lactam Antibiotics in Patients with Hematological Disorders. J. Clin. Microbiol. 44: p. 389-394.

4. Barnes P. D. and K. A. Marr. 2007 Risks, diagnosis and outcomes of invasive fungal infections in haemotopoeitic stem cell transplant recipients. Brit. Journ. Haemotol. 139: p. 519-531.

5. Becker M. J., E. J. Lugtenburg. J. J. Cornelissen, C. V.D. Schee, H. C. Hoogsteden and S. D. Marie. 2003 Galactomannan detection in computerized tomography-based broncho-alveolar lavage fluid and serum in haemotological patients at risk for invasive pulmonary aspergillosis. Br. J. Haemotol. 121(3): p. 448-457.

6. Blijevens, N. M., J. P. Donelly, J. F. Meis, P. E. Verweij, and B. E. De Pauw. 2002 Aspergillus galactomannan antigen levels in allogeneic haemotopoietic stem cell transplant receipients given total parenteral nutrition. Transpl. Infect. Dis. 4: p. 64-65.

7. Chambon-Pautas, C.,J. M. Costa, M.T. Chaumette, C. Cordonnier, and S. Bretagne. 2001 Galactomannan and polymerase chain reaction for the diagnosis of primary digestive aspergillosis in a patient with acute myeloid leukaemia. J. Infect. 43: p. 213-214.

8. Clancy C., R. A. Jaber, H. L. Leather, J. R. Wingard, B. Staley, J. L. Wheat, C. Cline, K. H. Rand, D. Schain, M. Baz and M. H. Nyugen. 2007 Bronchoalveolar Lavage Galactomannan in Diagnosis of Invasive Pulmonary Aspergillosis among Solid-Organ Transplant Recipients. J. Clin. Microbiol. 45(6): p. 1759-1765.

9. de Repentigny, L., L. Kaufman, G. T. Cole, D. Kruse, J. P. Latge, and R. C. Matthews. 1994. Immunodiagnosis of Invasive Fungal Infections. J Med Vet Mycol 32: p. 239-252.

10. Denning, D. W. 1998. Invasive Aspergillosis. Clin Infect.Dis. 26: p. 781-803. 11. Desai R, L.A. Ross and J. A. Hoffman Poster AAA 2008. The Role of Bronchoalveolar Lavage Galactomannan Assay in the

Diagnosis of Invasive Aspergillosis in Pediatric Populations. 12. Erjavec, Z. and P. E. Verweij. 2002. Recent progress in the diagnosis of fungal infections in the immunocompromised host. Drug

Resist. Updat. 5: p.3-10. 13. Gangneux, J., D. Lavarde, S. Bretagne, C. Guiguen and V. Gandemer. 2002. Transient aspergillus antigenaemia: think of milk.

Lancet. 359(9313):1251. 14. Hage,C. A., J. M. Reynolds, M. Durkin, L. J. Wheat, K. S. Knox. 2007. Plasmalyte as a Cause of false-Pozitiv results for

Aspergillus galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid. J. Clin. Microbiol. 45: p. 676-677. 15. Herbrecht, R., V. Letscher-Bru, C. Oprea, B. Lioure, J. Waller, F. Campos, O. Villard, K. L. Liu, S. Natarajan-Ame, P. Lutz,

P.Dufour, J. P. Bergerat, and E. Candolfi. 2002. Aspergillus galactomannan detection in the diagnosis of Invasive Aspergillosis in cancer patients. J Clin. Oncol. 20: p.1898-1906.

16. Herbrecht, R., D. Denning, T. Patterson, J. Bennett, R. Greene, J. Oestmann, W. Kern, K. Marr, P. Ribaud, O. Lortholary, R. Sylvester,R. Rubin, J. Wingard, P. Stark, C. Durand, D. Caillot, E. Thiel, P. Chandrasekar, M. Hodges, H. Schlamm, P. Troke, B. DePauw. 2002. Voriconazole Versus Amphotericin B for Primary Therapy of Invasive Aspergillosis. N Engl J Med. 347, 6: p. 408-415.

17. Hussain S., D.L. Paterson, S. M. Studer, M. Crespo, J. Pilewski, M. Durkin, J.L. Wheat, B. Johnson, L. Mclaughlin, C. Bentsen, K. McCurry and N. Singh. 2007 Aspergillus Galactomannan Antigen in the Bronchoalveolar Lavage Fluid for the Diagnosis of Invasive Aspergillosis in Lung Transplant Recipients. Transplantation 83(10): p. 1330-1336.

18. Hussain S., C. J. Clancy, M.H. Nyugen, S. Swartzentruber, H. Leather, A. M. LeMonte, M.M. Durkin, K. S. Knox, C. A. Hage, C. Bentsen, N. Singh, J.R. Wingard and L.J. Wheat. 2008 Performance Characteristics of the Platelia™ Aspergillus EIA for detection of Aspergillus galactomannan antigen in bronchoalveolar lavage fluid. Clin. Vaccine Immunol.15(12) : p. 1760-1763.

19. Khan ZU, Ahmad S, and Theyyathel AM. 2008 Detection of Aspergillus fumigatus-specific DNA, (1-3)-beta-d-glucan and galactomannan in serum and bronchoalveolar lavage specimens of experimentally infected rats. Mycoses; 51: p. 129-35.

20. Klont R.R., M.A.S.H. Mennink-Kersten and P. E. Verweij. 2004 Utility of Aspergillus Antigen Detection in Specimens Other than Serum Specimens. Clin. Infect. Diseas. 39: p. 1467-74.

21. Knox KS, Rose AS, and Hage CA. 2007 Rapid Fungal Diagnosis: The Utility of Bronchoalveolar Lavage for Pneumocystis and Endemic Mycoses. Current Fungal Infection Reports; 1: p. 153-8.

22. Kwak EJ and Nyugen MH. 2008 Galactomannan Detection in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Current Fungal Infection Reports; 2: p.206-213.

23. Latge, J. P. 1995. Tools and trends in the detection of Aspergillus fumigatus. Curr Top Med Mycol 6: p. 245-281. 24. Latge, J. P. 1999 Aspergillus fumigatus and Aspergillosis. Clin Microbiol Rev 12[2], 310-50. 25. Latge, J. P., H. Kobayashi, J. P. Debeaupuis, M. Diaquin, J. Sarfati, J. M. Wieruszeski, E. Parra, J. P. Bouchara, and B.

Fournet. 1994. Chemical and immunological characterization of the extracellular galactomannan of Aspergillus fumigatus. Infect.Immun. 62: p. 5424-5433.

26. Letscher-Bru, V., A. Cavalier, E. Pernot-Marino, H. Koenig, D. Eyer, J. Waller amd E. Candolfi. 1998. Recherche d’antigene galactomannane aspergilliare circulant par Platelia™ Aspergillus: antigenemies Pozitivs persistantes en l’absence d’infection. J. Med. Mycol. 8:p. 112-113.

27. Maertens, J., J. Verhaegen, H. Demuynck, P. Brock, G. Verhoef, P. Vandenberghe, J. Van Eldere, L. Verbist, and M. Boogaerts. 1999. Autopsy-controlled prospective evaluation of serial screening for circulating galactomannan by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for hematological patients at risk for invasive Aspergillosis. J.Clin. Microbiol. 37: p. 3223-3228.

28. Maertens, J., J. Verhaegen, K. Lagrou, J. Van Eldere, and M. Boogaerts. 2001. Screening for circulating galactomannan as a noninvasive diagnostic tool for Invasive Aspergillosis in prolonged neutropenic patients and stem cell transplantation recipients: a prospective validation. Blood 97: p. 1604-1610.

21

29. Maertens J., V. Maertens, K. Theunissen, W. Meersseman, P. Meersseman, S. Meers, E. Verbeken, G. Verhoef, J. V. Eldere

and K. Lagrou. 2009 a. Bronchoalveolar Lavage Fluid Galactomannan for the Diagnosis of Invasive Pulmonary b. Aspergillosis in Patients with Hematologic Diseases. Clin. Infec. Diseas. 49: 1688-93.

30. Marr K. A., S. A. Balajee, L. McLaughlin, M. Tabouret, C. Bentsen and T.J. Walsh. 2004. Detection of Galactomannan Antigenemia by Enzyme Immunoassay for the Diagnosis of Invasive Aspergillosis : Variables That Affect Performance. J. Infect. Dis. 190 :641-9

31. Marr K. A., M. Laverdiere, A. Gugel and W. Leisenring. 2005. Antifungal therapy decreases sensitivity of the Aspergillus galactomannan enzyme immunoassay. Clin. Infect. Dis 40: p. 1762-9.

32. Mattei, D., D. Rapezzi, N. Mordini, F.Cuda, C. Lo Nigro, M. Musso, A. Arnelli, S. Cagnassi, and A. Gallamini. 2004. False-Pozitiv Aspergillus galactomannan enzyme-linked immunosorbent assay results in vivo during amoxicillin-clavulanic acid treatment. J. Clin. Microbiol. 42: p. 5362-5363.

33. Mennink-Kersten M. A. S. H., D. Ruegebrink, R. Klont, A. Warris, H. J. M. Op den Camp and P. Verweij. 2005 Bifidobacterial Lipoglycan as a New Cause for False-Pozitiv Platelia Aspergillus Enzyme Immunoabsorbent Assay Reactivity. J. Clin. Microbiol. 43(8): 3925-3931.

34. Meersseman W., K. Lagrou, J. Maertens, A. Wilmer, G. Hermans, S. Vanderschueren, I. Spriet, E. Verbeken and E. V. Wijngaerden. 2008 Galactomannan in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Am. J. Respi. Crit. Care Med 177: p. 27-34.

35. Musher B., D. Fredericks, W. Leisenring, S. A. Balajee, C. Smith and K. Marr. 2004 Aspergillus Galactomannan Enzyme Immunoassay and Quantitative PCR for Diagnosis of Invasive Aspergillosis with Bronchoalveolar Lavage Fluid. J. Clin. Microbiol. 42(12): p. 5517-5522.

36. Nareddy, S., P. H. Chandrasekar. 2008. False-Pozitiv Aspergillus galactomannan (GM) assay in histoplasmosis. J. Infection 56: p. 80-81.

37. Nguyen MH, R. Jaber, H.L. Leather, J. R. Wingard, B. Staley, L. J. Wheat, C. L. Cline, M. Baz, K.H. Rand and C. J. Clancy. 2007 Use of bronchoalveolar lavage to detect galactomannan for diagnosis of pulmonary aspergillosis among nonimmunocompromised hosts. J Clin Microbiol; 45:2787-92.

38. Patterson D. L. and N. Singh. 1999. Invasive Aspergillosis in Transplant Recipients. Medicine. 78(2) : p. 123-38. 39. Pauw B.D., Walsh T. J., Donelly J. P., Stevens D.A., Edwards J. E., Calandra T., Pappas P. G., Maertens J., Lortholary O.,

Kauffman C. A., Denning D.W., Patterson T.F., Maschmeyer G., Bille J., Dismukes W.E., Herbrecht R., Hope W. W., Kibbler C.C., Kulberg B. J., Marr K. A., Munoz P., Odds F. C., Perfect J. R., Restrepo A., Ruhnke M., Segal M., Segal B. H., Sobel J. D., Sorell T.C., Viscoli C., Wingard J.R., Zaoutis T. and J.E. Bennett. 2008 a. Revised Definitions of Invasive Fungal Disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive

Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycoses Study Group (EORTC/MSG Consensu Group. Clin. Infectious Disease 46, p. 1813-1821.

40. Penack O., P. Rempf, B. Graf, I. W. Blau and E. Thiel. 2008 Aspergillus galactomannan testing in patients with long-term neutropenia: implications for clinical management. Ann Oncol. 19(5): p. 984-9, Epub 2008.

41. Racil, Z., I. Kocmanova, M. Lengerova, J. Winterova, J. Mayer. 2007. Intravenous PLASMA-LYTE as a Major Cause of False-Pozitiv Results of Platelia™ Aspergillus Test for Galactomannan Detection in Serum. J. Clin. Microbiol. 45(2): p. 3141-3142.

42. Salonen J., O-P. Lehtonen, M-R Terasjarvi and J. Nikoskelainen. 2000. Aspergillus Antigen in Serum, Urine and Bronchoalveolar Lavage Specimens of Neutropenic Patients in Relation to Clinical Outcome. Scand J. Infec. Dis. 32: p.485-490.

43. Sanguinetti M., B. Posteraro, L. Pagano, G. Pagliari, L. Fianchi, L. Mele, M. L. Sorda, A. Franco and G. Fadda. 2003.Comparison of Real-Time PCR, Conventional PCR, and Galactomannan Antigen Detection by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay using Bronchoalveolar Lavage Fluid Samples from Hematology Patients for Diagnosis of Invasive Pulmonary Aspergillosis. J. Clin. Microbiol. 41(8): p.3922-3925.

44. Siemann M., M. Koch-Dorfler and M. Gaude 1998. False-Pozitiv results in premature infants with the Platelia Aspergillus sandwich enzyme-linked immunoabsorbent assay. Mycoses. 41(9-10): 373-7.

45. Stynen, D., A. Goris, J. Sarfati, and J. P. Latge. 1995. A new sensitive sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to detect galactofuran in patients with Invasive Aspergillosis. J.Clin. Microbiol. 33: p. 497500.

46. Stynen, D., J. Sarfati, A. Goris, M. C. Prevost, M. Lesourd, H. Kamphuis, V. Darras, and J. P. Latge. 1992. Rat monoclonal antibodies against Aspergillus galactomannan. Infect.Immun. 60: p. 2237-2245.

47. Sulahian, A., F. Boutboul, P. Ribaud, T. Leblanc, C. Lacroix, and F. Derouin. 2001. Value of antigen detection using an enzyme immunoassay in the diagnosis and prediction of Invasive Aspergillosis in two adult and pediatric hematology units during a 4-year prospective study. Cancer 91: p. 311-318.

48. Sulahian, A., M. Tabouret, P. Ribaud, J. Sarfati, E. Gluckman, J. P. Latge, and F. Derouin. 1996. Comparison of an enzyme immunoassay and latex agglutination test for detection of galactomannan in the diagnosis of Invasive Aspergillosis. Eur.J Clin. Microbiol. Infect. Dis. 15: p. 139145.

49. Surmont, I., W. Stockman. 2007. Gluconate-containing intravenous solutions: Another cause of false-Pozitiv galactomannan assay reactivity. J. Clin. Microbiol. 45: p. 1373.

50. Swanink, C. M., J. F. Meis, A. J. Rijs, J. P. Donnelly, and P. E. Verweij. 1997. Specificity of a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for detecting Aspergillus galactomannan. J Clin. Microbiol. 35: p. 257-260.

51. Upton A., A. Gugel, W. Leisenring, A. Limaye, B. Alexander, R. Hayden and K. Marr. 2005. Reproducibility of Low Galactomannan Enzyme Immunoassay Indice Values Tested in Multiple Laboratories. J. Clin. Microbiol, 43: p 4796-4800.

52. Verdaguer V., T. J. Walsh, W. Hope and K. Cortez. 2007 Galactomannan antigen detection in the diagnosis of invasive aspergillosis. Expert Rev. Mol. Diagn. 7(1):p. 21-32.

53. Verweij, P. E., E. C. Dompeling, J. P. Donnelly, A. V. Schattenberg, and J. F. Meis. 1997. Serial monitoring of Aspergillus antigen in the early diagnosis of Invasive Aspergillosis. Preliminary investigations with two examples. Infection 25: p. 86-89.

54. Verweij, P. E. and J. F. Meis. 2000. Microbiological diagnosis of Invasive Fungal Infections in transplant recipients. Transpl.Infect.Dis. 2: p. 80-87.

55. Verweij, P. E., D. Stynen, A. J. Rijs, B. E. de Pauw, J. A. Hoogkamp -Korstanje, and J. F. Meis. 1995. Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay compared with Pastorex latex agglutination test for diagnosing Invasive Aspergillosis in immunocompromised patients. J. Clin. Microbiol. 33: p. 1912-1914.

22

56. Verweij, P. E., C. M. Weemaes, J. H. Curfs, S. Bretagne, J. F. Meis. 2000. Failure to detect circulating Aspergillus markers in a patient with chronic granulomatous disease and Invasive Aspergillosis. J Clin. Microbiol. 38: p. 3900-3901.

57. Verweij P., J-P Latge, A. J. J. M. Rijs, W. J. G. Melchers, B. E. D. Pauw, J. A. A. Hoogkamp-Korstanje. 1995 Comparison of Antigen Detection and PCR Assay Using Bronchoalvealor Lavage Fluid for Diagnosing Invasive Pulmonary Aspergillosis in Patients Receiving Treatment for Hematological Malignancies. J. Clin. Microbiol. 33(12): p. 3150-3153.

58. Walsh T. J., R.L. Schaufele, T. Sein, J. Gea-Banacloche, M. Bishop, N. Young, R. Childs, J. Barrett, H. L. Malech, and S.M. Holland. 2002. Reduced expression of galactomannan antigenemia in patients with Invasive Aspergillosis and chronic granulomatous disease or Job’s syndrome. Abstracts of the 40th Annual Meeting of the Infectious Diseases Society of America. Arlington, VA. P. 105 ; Abstr. 345.

59. Wheat, L. J., E. Hackett, M. Durkin, P. Connolly, R. Petraitiene, T. J. Walsh, K. Knox, C. Hage. 2007. Histoplasmosis-associated cross-reactivity in the Bio-Rad Platelia™ Aspergillus enzyme immunoassay. Clin. Vaccine Immunol. 14 (5): p. 638-40.

60. Wheat J.L., A. M. Monte, M.M. Durkin, S.L. Swartzentruber, K.K. Knox, C.A. Hage, C. Bentsen, S. Husain, N. Singh, C.J. Clancy, M.H. Nyugen AAA2008 Poster Detection of Aspergillus galactomannan in BAL in the Platelia Aspergilllus EIA, as performed at MiraVista Diagnostics. http://www.miravistalabs.com Site verified June 9, 2008.

61. Wheat J. and T.J. Walsh. 2008 Diagnosis of Invasive Aspergillosis by Galactomannan Antigenemia Detection using an enzyme immunoassay. Eur J Clin Microbiol Infect Dis; 27:245-51.

62. Yeo, S. F. and B. Wong. 2002. Current Status of Nonculture Methods for Diagnosis of Invasive Fungal Infections. Clin.Microbiol.Rev. 15: p. 465-484.

24

Distribuit în S.U.A. de: Bio-Rad Laboratories 6565 185th Avenue NE Redmond, WA 98052, U.S.A. Fabricat în France de: Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/10 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 881115 www.bio-rad.com For Customer Orders and Technical Service Call: 1-800-2-BIO-RAD (1-800-224-6723)

PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag · 2 5- REACTIVI Platelia™ Aspergillus Ag: produs Nr. 62794 (96 Teste)...

Documents

Transcript of PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag · 2 5- REACTIVI Platelia™ Aspergillus Ag: produs Nr. 62794 (96 Teste)...