PARAZITOLOGIE MEDICALAAN UNIVERSITAR 2014-2015LP 1*

EXAMENUL COPROPARAZITOLOGIC 1.examen macroscopic;

2.Examen microscopic: metode directe (preparat nativ n ser fiziologic; preparat nativ n soluie lugol; frotiu colorat); metode de examinare n strat gros: Kato i Miura; metode de concentrare: metode de flotaie; metode larvoscopice;amprenta anal;

3.Detectarea ADN-ului - reacii de hibridizare, amplificare genic (PCR)

*

EXAMENUL COPROPARAZITOLOGICexamenul parazitologic al materiilor fecale este o metoda de diagnostic folosita pentru evidentierea parazitilor cu localizare intestinala (protozoare, helminti);

frecvent se elimina ouale si larvele parazitilor, precum si chistii si trofozoitii de protozoare; acestea sunt elemente vizibile numai microscopic;

in infectiile masive se elimina viermii adulti vizibili cu ochiul liber.

*

RECOLTAREA SI TRASPORTUL PROBEI

Recoltarea probei de materii fecale pentru examenul parazitologic se va face din:

scaunul emis spontan;

scaunul obtinut dupa administrarea in prealabil a unui purgativ salin in doza laxativa, pentru a antrena trofozoitii de la nivelul ulceratiilor intestinale (pentru depistarea protozoarelor intestinale, la bolnavii cronici si la purtatorii asimptomatici).

*

RECOLTAREA NECESITA URMATOARELE PRECAUTII:

sa se recolteze o cantitate minima de ~ 5-10g din mai multe locuri ale bolului fecal

sa se recolteze orice fragment cu aspect suspect,vizibil macroscopic.

cand se elimina parazitul intreg (Ascaris, Oxyuris) sau fragmente (proglote de tenii), acestea se recolteaza cu o pensa si se introduc intr-un coprocultor cu ser fiziologic.

recoltarea trebuie sa se faca in prima ora de la evacuare (mai ales cand urmarim sa decelam trofozoiti de protozoare- (E.histolitica, Balantidium coli, Lamblia)

*

RECIPIENTE COLECTOARE SI TRANSPORTUL PROBEI:

recoltarea probelor se face in colectoare speciale furnizate de laborator (coprocultor),care nu trebuie sa fie steril si nici sa contina mediu de transport;

este recomandabil ca proba sa fie expediata la laborator in maxim 2-3 ore de la recoltare;

cand nu exista posibilitatea expedierii:vor fi pastratate la +40C (temperatura de +40C asigura o conservare a oualor de helminti si a chistilor de protozoare pentru cateva saptamani)conservate in solutii fixatoare (formol 10%, iod).

*

COPROCULTOR*

EXAMENUL MACROSCOPIC

Examenul de ansamblu al materiilor fecale, facut imediat cu ochiul liber sau cu lupa, poate furniza date de diagnostic privind:

culoarea;

consistenta;

mirosul;

prezenta de elemente patologice (puroi, mucus, sange)- mucozitatile sanguinolente atrag atentia asupra unei eventuale amibiaze sau balantidioze;

prezenta parazitului (Ascaris, Oxyuris) sau fragmente din parazit (proglote de tenie).

*

EXAMENUL MICROSCOPIC

Preparatele examinate la microscop se obtin prin: 1.Metode directe:Preparatul nativ -in ser fiziologic -in solutie lugolFrotiul colorat

2. Metode de examinare n strat gros: Kato i Miura

3.Metode de concentrare: Metoda Willis-Hung Metoda Bailenger4. Metode larvoscopice

5. Amprenta anal

*

EXAMENUL MICROSCOPIC*

A. PREPARAT NATIV N SER FIZIOLOGIC:este preparatul umed, ntre lam i lamel;

se realizeaz o suspensie de materii fecale n ser fiziologic;

examinarea se face cu microscopul optic, cu obiective uscate, condensator cobort;

permite studierea:mobilitii,morfologiei.

*

B.PREPARAT NATIV N SOLUIE LUGOL

la preparatul nativ n ser fiziologic se adaug o pictur de soluie lugol;

chistii protozoarelor se coloreaz n galben-brun, oule de helmini n brun-rocat intens

*

C.FROTIUL COLORAT

se efectueaz un frotiu subire pe o lam din materiile fecale diluate n ser fiziologic;

se coloreaz MGG ( May Grunwald Giemsa) i se studiaz la microscopul optic cu obiectiv cu imersie, cu condensator ridicat;

se pot decela trofozoii (nucleul rou, citoplasma violet-albastr) sau chiti.

*

2. METODE DE EXAMINARE N STRAT GROS: KATO I MIURA

se recomanda pentru decelarea oualor de helminti cu localizare intestinala: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Taenia spp;

- examinandu-se o cantitate mai mare de materii fecale, creste probabilitatea de depistare a oualor, chiar si in cazul infestarilor cu eliminare redusa a acestora in materiile fecale;

- majoritatea oualor isi pastreaza caracteristicele morfologice, fiind usor de identificat.

*

Metode de examinare n strat gros: Kato i Miura Tehnica:

50 mg materii fecale (ct un bob de gru) se depun pe o lam de sticl;

se acoper cu o foi de celofan tratat n prealabil cu soluie Kato-Miura (soluie de glicerin i verde de malachit);

se preseaz celofanul cu un corp solid pn cnd preparatul devine plat;

se las 30 minute pe mas, timp n care materiile fecale sunt clarificate de soluie lasnd s se vad prin transparen oule de helmini;

se examineaz la microscopul optic, cu obiective uscate;

oule sunt de 5-20 ori mai frecvente dect n preparatul nativ.

*

3.METODE DE CONCENTRARE: METODE DE FLOTAIESe clasific n 2 grupe dup principiul lor de baz:

ridicarea elementelor parazitare dintr-un mediu lichid hiperton (principiul flotaiei Metoda Willis-Hung);

coborrea elementelor parazitare ntr-un mediu hipoton, cu un anumit pH (principiul centrifugrii- Metoda de concentrare Bailenger).

*

METODA WILLIS-HUNG

se recomanda pentru decelarea oualor usoare de helmintiTaenia, Hymenolepis.

*

METODA WILLIS-HUNGTehnica:

se pune 1g materii fecale intr-un flacon de sticla peste care se adauga o cantitate mica de solutie Willis;

se omogenizeaza bine cu o bagheta de sticla dupa care flaconul se umple complet cu solutie Willis pana se formeaza un usor menisc;

se aplica deasupra flaconului o lamela de sticla;

se lasa 10-15 min, dupa care se ridica vertical lamela si se aplica cu fata cu care a stat in contact cu lichidul pe o lama;

preparatul obtinut se examineaza imediat la microscop pentru a evita uscarea si cristalizarea solutiei saturate pe lama.

*

METODA DE CONCENTRARE BAILENGEReste indicata pentru evidentierea oualor grele de helminti: Ascaris, Trichocephalus, Fasciola, Dicrocelium.

si a chistilor de protozoare: Entamoeba, Lamblia (Giardia).

*

METODA DE CONCENTRARE BAILENGERTehnica:

intr-un borcan cu dop de 50 ml care contine cateva perle de sticla se pun 2 g de materii fecale peste care se adauga 20 ml solutie aceto-acetica;

se inchide bine recipientul si se agita manual 1-2 min;

peste emulsia rezultata se adauga o cantitate de 10 ml eter sulfuric,

se inchide bine recipientul si se agita din nou 1-2 min;

se toarna amestecul intr-o eprubeta de centrifuga si se centrifugheaza 1-2 min la 1500 TPM;

dupa centrifugare din sedimentul format se fac preparate intre lama si lamela si se examineaza la microscop cu ob x10 si x40.

*

4.METODELE LARVOSCOPICE

sunt utilizate n suspiciunea unor helmintiaze care se transmit prin sol sub form de larve;

constau n evidenierea larvelor existente n scaun, sau a larvelor rezultate din oule eliminate n mediul extern odat cu scaunul.

*

5. AMPRENTA ANAL

se realizeaza inaintea defecatiei si igienei locale;

este metoda cea mai buna pentru diagnosticul oxiurozei si teniazei cu Taenia saginata.

*

Metoda Graham: Tehnica:se aplica o bucata de celofan adeziv (tip scotch) pe o lama de sticla;

se pune lama pe manerul unei baghete de sticla cu capatul rotunjit, cu banda adeziva deasupra, apoi se trage incet celofanul peste capatul baghetei;

se tine cu mana dreapta strans lama de bagheta si cu extremitatea cu celofan se sterg pliurile anale;

se ia deoparte bagheta si se intinde inapoi celofanul adeziv, prin presare cu un tampon de vata;

se examineaza preparatul obtinut la microscop cu ob. x10.

Metoda Hall:are acelasi principiu ca si metoda Graham, dar, banda adeziva este inlocuita cu celofan.

*

Metoda Graham*

DETECTAREA ADN-ULUI

Diagnosticul molecular consta in evidentierea ADN-ului parazitar, utilizandu-se ca primeri, secvente de ADN specifice, folosind reactii de polimerizare in lant (tehnica P.C.R. - polymerase chain reaction).

Metodele de extragere a ADN-ului se bazeaza mai ales pe fragilizare fizica sau chimica a peretelui formatiunii parazitare.

Purificarea ADN-ului se realizeaza prin metode clasice.

*

Entamoeba coliEntamoebahistolyticaEntamoeba hartmanni EndolimaxGiardiaChilomastix Petite Douve segmente embryonneBothriocphaleTaeniaHymenolepis nanaTrichocphale OxyureAnkylostomeDipylidium*