Medii de Cultura

download Medii de Cultura

of 56

  • date post

    12-Dec-2015
  • Category

    Documents

  • view

    232
  • download

    11

Embed Size (px)

description

Microbiologie

Transcript of Medii de Cultura

  • MEDII DE CULTURACLASIFICAREPREZENTARE MEDIITEHNICI DE INSAMANTARE IN BULION SI PE GELOZA ( agar) -INSAMANTARE PRIN DISPERSIE IN VEDEREA OBTINERI DE COLONII IZOLATE

  • INSAMANTAREAReprezinta operatia de introducere a unei cantitati de germeni intr-un mediu de cultura artificial

  • INOCULAREAReprezinta introducerea unei cantitati de germeni in interiorul unei culturi celulare (de origine animala) sau ou embrionat sau animal de experienta.

  • TULPINA BACTERIANAReprezinta populatia microbiana alcatuita din descendentii unei singure izolarii in cultura puraCultivarea se realizeaza prin insamantarea microorganismului pe medii de culturaTotalitatea microorganismelor acumulate prin multiplicarea intr-un mediu de cultura poarta numele de cultura

  • CLASIFICAREA MEDIILORMedii celulare - care includ celule vii, animale de laborator, oua embrionate sau culturi de celule (virusuri,rickettsi,chlamydii)Medii necelulare artificiale si medii de cultura (bacterii,fungii)

  • MEDIILE ARTIFICIALEavantaje si conditiiSunt mai ieftine si se pot prepara usorConditii:- nutritive -sterile -un anumit PH (7.2-7.6) -umiditate favorabila -o anumita presiune osmotica - alte conditii

  • SCOPURIIzolarea in cultura puraIdentificareaDiagnostic ,tratamentProductia industriala a unor substante (preparare de vaccinuri)

  • INGREDIENTEPeptonaExtracte sau infuzii de carneAgenti de solidificare: agarIndicatori de PH :turnesol, rosu fenolAgenti selectiviZaharuri

  • PREPARAREA MEDIILOR DE CULTURAAmestecul ingredientelor: proportia si ordinea indicataAjustarea PHRepartizarea in recipiente adecvateSterilizareaControlul sterilizarii si al calitatii mediului

  • CLASIFICAREA MEDIILORDE CULTURADupa consistenta: lichide (apa peptonata,bulion nutritiv,bulion selenit) solide (AABTL,ADCL,Chapman,geloza-agar) semisolide (Cary-Blair,MIU,Stuart)

    Dupa provenienta: naturale sintetice Dupa compozitie : simple (agar,bulion simplu) complexe (agar-sange,geloza-chocolate,MUELER-HINTON) speciale

    Dupa scopul urmarit: de transport (Stuart,apa peptonata alcalina) de izolare(agar-sange,Lowenstein,sabouraud) de identificare(TSI,MIU,truse API) de conservare(agar nutritiv in coloana)

  • MEDIILE SPECIALEElective (Loffler)Selective(agar-sange, Chapman, MacConkey, Tinsdale cu telurit de potasiu, medii cu antibiotice)De imbogatire (apa peptonata alcalina, bulion selenit)Diferentiale (AABTL, ADCL, agar-sange, MIU,TSI)

  • ELECTIVContin ingrediente care convin cel mai bine dezvoltarii unor bacteriiLoffler cu ser coagulat de bou pentru dezvoltarea bacilului difteric

  • SELECTIVMediu selectiv si diferential(evidentiaza o proprietate biochimica a tulpinii)Contine substante antimicrobiene care inhiba dezvoltarea altor bacterii decat cea a carui izolare o urmarim CHAPMANContine: geloza-simpla,NaCl,manitol si rosu fenolSelectiv pentru Stafilococcus aureus

  • CHAPMAN

  • Medii lichide si de imbogatire Exemplu : - apa peptonata alcalina - bulion selenit, bulion simplu etc.Mediu lichid este considerat mediu de bazaComponenete: macerat de carne, peptona, NaCl0.5%Utilizare:pentru germeni nepretentiosi

  • Medii diferentiale folosite la enterobacteriiMediu diferential contine un indicator de PH si un anumit substrat ( ex. Zahar) care poate fi sau nu metabolizat se detecteaza prin modificarea PH-ului si a culorii indicatorului modificand aspectul culturiiDrigalski,Istrati,McCONKEY,LevineBaterii care degradeaza lactoza=lactozo POZ.Cele care nu degradeaza lactoza=lactozo NEG

  • Genul Escherichia coli

    LevineDrigalski

  • Mediu ADCL(Leifson)-dezoxicolat citrat lactozatCategoria mediului selectivo-diferentialGeloza simpla +saruri biliare+lactoza+rosu neutruUtilizat in cultivarea Salmonelelor si shigelelor

  • E. coli-ADCL Fermentarea lactozei

  • Klebsiela KlebsielaGeloza-sange ADCLColonii mucoase COLONII MUCOASE

  • ADCL- H2S HECTOEN

  • Mediu specialUtilizare: efectuarea antibiogramei

  • Geloza simplaCategoria:mediu de bazacomponenete:bulion simplu+AGAR

  • Mediu diferentialComponente :geloza simpla +lactoza+albastru bromtimolutilizare:studierea fermentarii lactozei

  • TSI- 3 zaharuri si Fe MIU(mobilitate,indol, uree)

  • AGAR-SANGEAgar nutritiv,sange defribinat,

  • AGAR CHOCHOLATECategoria:mediu specialComponente: geloza simpla racita la 60-80C+sangeUtilizare: cultivarea neisseriilor,hemofililor

  • LOWENSTEIN -JENSENInclude 3 componente:- sol. de saruri si amidon -sol. verde malachite - omogenizatul de oua - idenyificarea bacilului Koch

  • Mediul OCSTMediul de imbogatire(favorizeaza cresterea bacteriilor, mai ales cand acestea sunt in concentratie micaComponente: ou+cisteina+ser+telurit de potasiuUtilizare: cultivarea bacililor difterici

  • Mediul SabouraudMediu specialGlucoza simpla+maltoza/glucoza+antibioticeUtilizare:cultivarea levurilor

  • METODE DE INSAMANTAREIn bulion mediu lichid

    Pe geloza mediu solid-insamantarea prin dispersie pentru obtinere de colonii izolate

  • Insamantarea punerea in contact a unei culturi bacteriene sau a unui produs patologicIzolarea repicarea unei singure colonii pe alte medii de cultura cu scopul de a obtine cultura puraCultura bacteriana-totalitatea bacteriilor crescute in suprafata unui mediu de cultura

  • Tehnici de insamantarePrin epuizare: pentru obtinerea coloniilor izolate-in pentagon deschisInsamantarea prin intepare ( pe medii solide aflate in tuburi)Insamantarea in panzaInsamantarea cu ansa calibrata: se utilizeaza pentru uroculturaInsamantarea cu tamponul sau cu bagheta de sticla in L

  • Dispersia I

  • Dispersia II

  • Dispersia III

  • Urocultura Metoda cantitativa0,001 ml0,01 ml

  • Cultura microbiologica ICultura microbiologica este o metoda de multiplicare a organismelor microbiene lasandu-le sa se inmulteasca intr-un mediu de cultura potrivit in conditii de laborator. Culturile microbiene sunt utilizate pentru a determina tipul de organism cat si cantitatea acestora in proba testata, sau ambele. Ea este una dintre metodele principale de diagnostic ale microbiologiei si este utilizata ca instrument in determinarea cauzei bolii infectioase, lasand microorganismul sa se multiplice in mediu potrivit.

  • Cultura microbiologica II Izolarea unei culturi pure de microorganisme este esentiala. O cultura pura reprezinta o populatie de celule sau organisme multicelulare care cresc in absenta altor specii sau tipuri. O cultura pura poate proveni dintr-o singura celula sau un singur organism, caz in care celulele sunt clone genetice.

  • Cultura microbiologica III Culturile microbiologice pot fi crescute in placi petri de diferite dimensiuni care contin un strat subtire de mediu de crestere (agar). Odata ce mediul de crestere din placutele petri este insamantat cu bacteria dorita, acestea sunt incubate la temperatura optima de crestere a bacteriilor selectate ( 37 C pentru culturile umane si animale)

  • Cultura microbiologica IVO alta metoda de cultura bacteriana este cultura lichida, in care bacteriile dorite sunt insamantate intr-un bulion lichid mediu nutritiv. Acestea sunt ideale pentru prepararea unor teste antimicrobiene. Acest bulion lichid insamantat cu bacteria dorita este lasat la incubat peste noapte la 37C in 24 h.

  • Proba ofera informatii despre forma bacteriei: coci, bacili, cocobacili sau vibrio. De asemenea putem afla si dimensiunea bacteriei in microni. Proba ofera caracteristicile de cultura ale bacteriei in functie de mediul de crestere folosit, precum si detalii despre morfologia coloniei bacteriene

  • Morfologia coloniei bacteriene IDefinitie: O grupare de bacterii derivata dintr-o singura clona bacteriana. morfologia coloniei se refera la caracteristicile vizibile ale ei. Coloniile care arata diferit sunt tulpini bacteriene diferite dupa specie si gen.

    Morfologia coloniei nu este o modalitate de incredere in identificarea bacteriilor, intrucat multe tipuri de colonii se aseamana intre ele.

  • Pe mediul (agar) solid:1. dimensiune (< 1mm, 1mm . 3-5 mm)2. suprafata neteda/ rugoasa3. margini rotund/ ondulat 4. nivel plat/ bombat/ convex/ mamelonat/ombilicat 5. pigmentatie transparent/ colorat (gri/galben..)6. miros fructat/ floral/ neplacut 7. agar modificat cu hemoliza/fara , lactoza positiv/ negativMorfologia coloniei bacteriene II

  • Bacterial Colony Morphology III

  • Modificarea gelozei sange hemolitica si nehemolitica

  • Klebsiella pneumoniae on Deoxycholate Citrate Agar (lactose positive ) Pseudomonas aeruginosa Deoxycholate Citrate Agar (lactose negative)

  • pigment transparent/ colorat (gri/galben)

  • margins/ edges round/ wavy (wrinkled surface smooth/ roughlactose positive, metallic sheen

  • Pe mediu sau bulion lichid