Medii de Cultura Lp4 Lumi

of 42

  • date post

    13-Oct-2015
  • Category

    Documents

  • view

    25
  • download

    0

Embed Size (px)

Transcript of Medii de Cultura Lp4 Lumi

  • MEDII DE CULTURACATEDRA DE MICROBIOLOGIELP 4

  • Cultivarea bacteriilor in microbiologia clinica are drept scop:

    izolarea bacteriilor din prelevatele patologice

    identificarea bacteriilor

    testari pentru initierea si monitorizarea terapiei antimicrobiene.

  • Prelevatele patologice odata receptionate si triate calitativ, microbiologul trebuie sa hotarasca:

    mediile de cultura si metodele indicate pentru izolare

    atmosfera, temperatura si intervalul de timp, necesare pentru izolarea tuturor microorganismelor cu semnificatie clinica din prelevatul examinat

  • izolatele cu semnificatie clinica, algoritmul si stadiul pana la care conduce identificarea acestora

    daca antibiograma este indicata si care din rezultatele ei se impun communicate.

  • Mediile de cultura sunt folosite pentru cultivarea bacteriilor.

    Ele se comercializeaza ca atare, sub forma liofilizata, gelificata sau gata turnate in placi Petri sau pot fi manufacturate in multe laboratoare.

    Ingredientul de baza al mediilor de cultura este geloza sau agar agar.

  • agar-agarul (numit i geloz) este un produs organic, hidro - coloidal ce se ntlnete ntr-o serie de alge marine alge rosii (agarofite), din care este extras cu ajutorul apei fierbini.

    se prezint sub form de fii semitransparente de culoare cafenie-glbuie.

  • conine: 7080% polizaharide, 1020% ap i 1,54% substane minerale.

    este format din resturi galactozidice esterificate la C6 cu o grupare sulfonic.

    are o putere de gelificare foarte mare.

  • Agarul este folosit la prepararea mediilor de cultura pentru ca asigura suprafata solida pe care cresc bacteriile si fungii.

    Cresterea bacteriilor nu distruge structura gelului deoarece cele mai multe bacterii sunt incapabile sa utilizeze agarul pentru metabolism.

  • Agarul este comercializat sub forma de pulbere, care in amestec cu apa si incalzit la 100 C ramane lichid, iar pe masura ce se raceste la 40 C se gelifica.

    Mediul cu agar este un mediu relativ inert.

    Alte ingrediente, nutrienti, factori de crestere, indicatori de pH sunt adaugati in mediul cu agaroza.

  • MEDII DE CULTURACLASIFICAREDin punct de vedere a starii de agregare: medii lichide

    medii solide

    medii semisolide

  • MEDII DE CULTURACLASIFICAREMedii lichide bulioane

    Au utilizare restransa: izolarea din prelevate necontaminate (ex. sange, exsudate din seroase, aspiratii din colectii purulente profunde, biopsii tisulare prin ac

  • MEDII DE CULTURAMedii lichideIzolarea in medii lichide:Avantaje: cea mai sensibila metoda de izolare in vitro (cultura poate fi initiata de un numar redus de bacterii, volumul prelevatului insamantat poate fi crescut) neutralizeaza prin dilutie factori antimicrobieni din prelevatul examinat

  • MEDII DE CULTURACLASIFICAREMediile solide pot fi:

    neselective

    diferentiale

    selective

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDEMedii neselective: agarul imbogatit cu 5% sange de berbec mediul neselectiv cel mai folosit pentru insamantarea prelevatelor necontaminate si a unora din cele contaminate Ex.: - exsudate din caile respiratorii si din cavitatile conecte - exsudat conjunctival - puroi

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDEMedii diferentiale contin substratul pentru o anumita enzima sau citotoxina bacteriana si un indicator de pH Ex.: - geloza sange: diferentiaza bacteriile hemolitice de cele nehemolitice - medii lactozate, cu variati indicatori de pH, diferentiaza enterobacteriile care fermenteaza lactoza (lactozo pozitive) de cele care nu fermenteaza lactoza (lactozo negative)

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDEMedii selective contin substante care inhiba dezvoltarea bacteriilor de contaminare a prelevatelor.

    Exista o diversitate de medii selective.

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDE SELECTIVEPentru izolarea enterobacteriaceelor din prelevate contaminate exista medii cu trei niveluri de selectivitate: slab selective: - mediul Mac Conkey (agenti inhibitori: saruri biliare si cristal violet) - mediul EMB (Levin) (agenti inhibitori: eozina Y si albastru de metilen) Inhiba bacteriile Gram (+).

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDE SELECTIVE moderat selective: - mediul Salmonella Shigella - mediul ADCL (Agar Dezoxicholat Citrat Lactoza) - mediul Hektoen - mediul XLD - mediul Istrati Meitert Agenti inhibitori: saruri biliare si verde briliant Inhiba bacteriile Gram (+) si o parte din bacilii Gram (-) comensali.

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDE SELECTIVE medii inalt selective: - mediu Wilson BlairAgent inhibitor: verde briliantInhiba o gama larga de bacterii pentru a facilita izolarea salmonelelor.

  • MEDII DE CULTURAMEDII SOLIDE SELECTIVEAgarul sange poate fi facut selectiv pentru izolarea unor patogeni pretentiosi nutritiv prin adaos de antibiotice: colimicina si acidul nalidixic: inhiba dezvoltarea bacteriilor Gram () si favorizeaza dezvoltarea celor Gram (+) bacitracina: inhiba dezvoltarea bacteriilor Gram (+) si favorizeaza izolarea hemofililor kanamicina si vancomicina: favorizeaza izolarea bacililor Gram (-) anaerobi etc.

  • MEDII DE CULTURA

    MEDII DE IMBOGATIRE: - medii lichide, care prin anumite substante inhibitoare prelungesc faza de lag a bacteriilor de contaminare, fara a intarzia insa intrarea anumitor patogeni in faza exponentiala. Ex.: bulion cu selenit acid de Na.: preincubarea materiilor fecale 18 h. la 37C in acest mediu, favorizeaza izolarea salmonelelor.

  • INCUBAREA CULTURILOR - temperatura: 37C majoritatea bacteriilor 20 - 30C unele bacterii (Yersinia enterocolitica, Y. pseudotuberculosis, Listeria monocytogenes) 42C altele: Campylobacter jejuni / coliSe foloseste pentru incubare termostatul.

  • INCUBAREA CULTURILOR

    Atmosfera: in prezenta O2 bacterii aerobe si facultativ anaerobe in mediu cu 5 10 % CO2 bacterii carboxifile in mediu cu O2 (5 7 %), CO2 (8 10%), N2 (85%) bacterii microaerofile

  • INCUBAREA CULTURILOR in mediu anaerob: Procedee chimice: bulioane cu ingrediente reducatoare (acid thioglicolic sau thioglicolat de Na. tehnica OTT: incinta etansa in care O2 este indepartat prin reactia cu pirogalolul in mediu alcalin.Procedee biologice: procedeul Tarozzi: utilizeaza tuburi cu bulion nutritiv in care agent reducator sunt fragmente de organe proaspete de animal prelevate aseptic (ficat, rinichi)

  • CARACTERE DE CULTURAExigente de cultivareIntervalul necesar pentru obtinerea culturiiAspectul si consistenta coloniilorModificari ale mediuluiMirosul degajat de cultura

    Aceste caractere orienteaza identificarea izolatelor!

  • CARACTERE DE CULTURA Exigente de cultivareBacterii nepretentioase

    Bacterii cu anumite exigente nutritive:Strict aerobeStrict anaerobeFacultativ anaerobeMicroaerofileCarboxifile

  • CARACTERE DE CULTURAIntervalul necesar pentru aparitia culturiiMicroorganisme cu crestere rapida: cultura apare dupa 18 24 h. (frecvent peste noapte)Microorganisme cu crestere lenta: necesita zile sau saptamani pentru aparitia culturii

  • CARACTERE DE CULTURAMorfologia coloniilor1. Dimensiune: mm. colonii mici ( < 1 mm.) colonii mijlocii ( ~ 1 mm.) microcolonii (vizibile numai cu stereomicroscopul) colonii mari ( > 2 mm.)2. Forma: punctiforme circulare neregulate (in harta geografica) filamentoase dendritice lenticulare

  • CARACTERE DE CULTURAMorfologia coloniilor3. Relieful: plane aplatizate convexe bombate acuminate pulvinate ombilicate

  • CARACTERE DE CULTURAMorfologia coloniilor4. Marginile: intregi ondulate lobate zimtate filamentoase cu valuri succesive de invadare a mediului

  • CARACTERE DE CULTURASuprafata coloniilorNeteda, umeda, lucioasa forma de cultura S conditionata de hidrofilia si incarcatura electronegativa a structurilor microbiene de invelisMata, uscata, rugoasa forma de cultura R a microorganismelor cu hidrofilie si incarcatura electronegativa reduse

  • CARACTERE DE CULTURASuprafata coloniilorAlte aspecte: - suprafata papilata - cu striuri radiare - zbarcita - catifelata - pufoasa - lanoasa - prafoasa

  • CARACTERE DE CULTURADensitatea opticaColonii: transparentesemitransparenteopace

  • CARACTERE DE CULTURA

    Irizatii ale suprafetei unor colonii: pot fi surprinse anumite unghiuri de iluminareCuloarea coloniilor: albagalbenaaurieneagra, in functie de varietatea pigmentilor produsi sau a virajului de culoare a unor indicatori introdusi in mediu.

  • CARACTERE DE CULTURA

    Modificari ale mediului din jurul coloniilor: pot fi produse de citotoxine, enzime sau pigmenti difuzibili. Hemoliza pe agar sange Reactii pe medii diferentiale zaharate Reactii pe mediul cu galbenus de ou Pigmentogeneza

  • CARACTERE DE CULTURAHemoliza pe agar - sangealfa: zona de inverzire a mediului cu numeroase hematii intacte din cauza hemolizei partialebeta: zona complet clara, incolora, din cauza hemolizei completealfa prim: halou de hemoliza incompleta cu inverzire, imediat inconjurat cu o zona de hemoliza clara, completagamma: absenta hemolizeicald rece: zona clara de hemoliza completa (aparuta dupa incubare la 37C) inconjurata cu o zona de hemoliza mai putin clara, dar fara modificare de culoare a mediului (aparuta dupa incubarea in continuare la frigider)

  • CARACTERE DE CULTURAReactii pe medii diferentiale zaharateVirajul de culoare a mediuluiCuloarea coloniilor in functie d