LP Micropropagarea Culturi in Vitro

2
Micropropagarea “in vitro” la speciile cu înmulţire vegetativă 1. Terminologie Agar – produs extras din alge, utilizat pentru solidificarea mediilor de cultură Auxine – substanţe regulatoare de creştere, implicate în: - alungirea celulei vegetale - dominanţa apicală - iniţierea rizogenezei (formării rădăcinilor) Citochinine – substanţe regulatoare de creştere, responsabile de: - diviziunea celulară - diferenţierea celulelor - formarea de muguri - eliminarea dominanţei apicale a mugurelui terminal Clonă –grup de indivizi descendenţi dintr-un unic individ, fără fecundare, pe cale vegetativă, identici d.p.v. genetic între ei şi cu organismul mamă Explant – fragment dintr-un organism (apex, organ sau fragment de organe), detaşat de locul de origine şi care, prin cultivare, poate genera un organism nou In vitro – proces desfăşurat în condiţii sterile şi controlate de cultură, pe medii artificiale, în recipienţi de sticlă sau plastic Meristem ţesut vegetal tânăr de la extremitatea organelor, în care celulele se înmulţesc continuu, asigurând creşterea organismelor Mediu de cultură de bază – mediu de control al unei culturi, cu compuşi organici şi anorganici de creştere de bază,fără regulatori de creştere şi vitamine Mediu de cultură – totalitatea factorilor pt. supravieţuirea explantului “in vitro” , regenerarea celularăşi evoluţia sa în direcţia propusă (macroelemente, microelemente, componente organice, regulatori de creştere, apă, stabilizatori osmotici şi de pH, antioxidanţi etc.) Micropropagare – propagarea sau înmulţirea pe cale asexuată/vegetativă a plantelor “in vitro” (microînmulţire) Plantulă – tulpiniţă generată “in vitro”şi înrădăcinată ori embrionul germinat 2. Amenajarea şi dotarea laboratorului de culturi “in vitro” Condiţii de mediu şi facilităţi: - lipsa poluării - spaţii de aclimatizare (sere, solarii) amplasate în apropiere - apă potabilă, curent electric, gaz metan, evacuarea apei reziduale - aer condiţionat (încălzire, ventilare-aerisire) - spaţii interioare etanşeizate, pardosite cu materiale ce pot fi spălate şi dezinfectate Constructiv, laboratorul se amenajează pe un singur nivel şi va avea delimitate 3 zone sau spaţii distincte: - zona nesterilă (spălător, depozite, camere pt autoclave, distilatoare apă, laborator foto, birouri) - zona sterilă (boxe sau nişe aseptice cu flux de aer laminar, laborator de pregătire a mediilor de cultură, camere frigorifice) - zona de creştere şi aclimatizare (rafturi climatizate, instalaţii de iluminat etc) Dotarea laboratorului: instalaţii, mobilier, aparatură, materiale, instrumente şi substanţe chimice - Aparatură: balanţe, agitatoare magnetice, plite electrice, băi marine, pH-metre, microscoape, lupe binoculare, autoclave, distilatoare şi bidistilatoare pentru apă, maşină de spălat sticlărie de laborator, frigidere, congelatoare, pipete, seringi, vase de sticlă/plastic, instrumente de laborator (stative, pensete, ace spatulate, anse, foarfece, becuri de gaz, bidoane etc)

description

lp

Transcript of LP Micropropagarea Culturi in Vitro

Page 1: LP Micropropagarea Culturi in Vitro

Micropropagarea “in vitro” la speciile cu înmulţire vegetativă

1. TerminologieAgar – produs extras din alge, utilizat pentru solidificarea mediilor de culturăAuxine – substanţe regulatoare de creştere, implicate în:- alungirea celulei vegetale- dominanţa apicală- iniţierea rizogenezei (formării rădăcinilor)Citochinine – substanţe regulatoare de creştere, responsabile de:- diviziunea celulară- diferenţierea celulelor- formarea de muguri- eliminarea dominanţei apicale a mugurelui terminalClonă –grup de indivizi descendenţi dintr-un unic individ, fără fecundare, pe calevegetativă, identici d.p.v. genetic între ei şi cu organismul mamăExplant – fragment dintr-un organism (apex, organ sau fragment de organe), detaşat delocul de origine şi care, prin cultivare, poate genera un organism nouIn vitro – proces desfăşurat în condiţii sterile şi controlate de cultură, pe medii artificiale,în recipienţi de sticlă sau plasticMeristem – ţesut vegetal tânăr de la extremitatea organelor, în care celulele se înmulţesccontinuu, asigurând creşterea organismelorMediu de cultură de bază – mediu de control al unei culturi, cu compuşi organici şianorganici de creştere de bază, fără regulatori de creştere şi vitamineMediu de cultură – totalitatea factorilor pt. supravieţuirea explantului “in vitro” ,regenerarea celulară şi evoluţia sa în direcţia propusă (macroelemente, microelemente,componente organice, regulatori de creştere, apă, stabilizatori osmotici şi de pH,antioxidanţi etc.)Micropropagare – propagarea sau înmulţirea pe cale asexuată/vegetativă a plantelor “invitro” (microînmulţire)Plantulă – tulpiniţă generată “in vitro”şi înrădăcinată ori embrionul germinat

2. Amenajarea şi dotarea laboratorului de culturi “in vitro”Condiţii de mediu şi facilităţi:- lipsa poluării- spaţii de aclimatizare (sere, solarii) amplasate în apropiere- apă potabilă, curent electric, gaz metan, evacuarea apei reziduale- aer condiţionat (încălzire, ventilare-aerisire)- spaţii interioare etanşeizate, pardosite cu materiale ce pot fi spălate şi dezinfectateConstructiv, laboratorul se amenajează pe un singur nivel şi va avea delimitate 3 zone sauspaţii distincte:- zona nesterilă (spălător, depozite, camere pt autoclave, distilatoare apă, laborator

foto, birouri)- zona sterilă (boxe sau nişe aseptice cu flux de aer laminar, laborator de pregătire a

mediilor de cultură, camere frigorifice)- zona de creştere şi aclimatizare (rafturi climatizate, instalaţii de iluminat etc)Dotarea laboratorului: instalaţii, mobilier, aparatură, materiale, instrumente şi substanţe

chimice- Aparatură: balanţe, agitatoare magnetice, plite electrice, băi marine, pH-metre,

microscoape, lupe binoculare, autoclave, distilatoare şi bidistilatoare pentru apă,maşină de spălat sticlărie de laborator, frigidere, congelatoare, pipete, seringi, vase desticlă/plastic, instrumente de laborator (stative, pensete, ace spatulate, anse, foarfece,becuri de gaz, bidoane etc)

Page 2: LP Micropropagarea Culturi in Vitro

- Etichete şi markere speciale pentru vasele de cultură- Substanţe chimice pentru prepararea mediilor de cultură, sterilizare etc:

- macroelemente (azotat de amoniu, sulfat de amoniu, clorură de calciu, azotat decalciu, sulfat de magneziu, clorură de potasiu, azotat de potasiu)- microelemente (acid boric, clorură de cobalt, sulfat de cupru, sulfat de mangan,iodură de potasiu, molobdat de sodiu, sulfat de zinc, sulfat de fier, natri fier EDTA,acid clorhidric, acid natriuetilendiaminotetraacetic)- glucide şi polialcooli (fructoză, zaharoză, glucoză, manitol, sorbitol)- vitamine şi aminoacizi (biotină, tiamină, riboflavină, glicină, acid ascorbic, acidnicotinic, acid folic, piridoxină)- regulatori de creştere (auxine: acid clorfenoxiacetic, acid 2,4 diclorfenoxiacetic,acid β-indolilacetic, acid indolilbutiric, acid α-naftilacetic, acid β-naftoxiacetic,citochinine şi gibereline: adenină, sulfat de adenină, 6-benziladenină, 6-dimetilalilaminopurină, 6-furfurilaminopurină, zeatină, acid giberelinic)- agar- extract de drojdie- hidrolizat de cazeină- cărbune activ

3. Etapele tehnologiei de cultivare “in vitro”- Alegerea materialului biologic donator de explante şi sterilizarea acestuia- Izolarea şi prelevarea explantelor- Inocularea şi incubarea (transferarea pe mediul de cultură) explantelor- Multiplicarea într-un număr variabil de cicluri a materialului biologic- Aclimatizarea plantulelor (trecerea de la condiţiile de mediu aseptice şi total

controlate din laborator la condiţii de seră sau solar)4. Importanţa (avantajele) utilizării culturilor “in vitro”

- Micromultiplicarea (clonarea) rapidă, pe cale vegetativă, a plantelor- Obţinerea de material biologic liber de agenţi patogeni (viroze etc)- Introducerea rapidă în cultură a soiurilor noi la speciile cu înmulţire vegetativă- Folosirea culturilor “in vitro” în ameliorare (- Folosirea culturilor “in vitro” în fitopatologie- Obţinerea de haploizi şi hibrizi somatici- Obţinerea de linii celulare cu randament sporit în sinteza unor produşi metabolici

secundari (medicină)- Obţinerea organismelor modificate genetic (OMG)- Crioconservarea culturilor “in vitro”Bibliografie

Creţu L., 2004 – Culturi “in vitro”, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iaşi.

Blidar C.F., Petruş –Vancea Adriana, 2006 – Biotehnologie, Lucrări practice de

laborator, Universitatea din Oradea.