SÂNGELE-curs 11

Formă specializată de ţesut conjunctiv, alcătuit din elemente celulare şi substanţă fundamentală fluidă

Componente. Funcţii generale 4 componente majore:

globulele roşii (eritrocite): transportă oxigenul; globulele albe (leucocitele): au rol defensiv, distrugând bacterii şi viruşi; trombocitele: prima linie de apărare împotriva deteriorării vaselor sangvine, aderând de

endoteliul distrus şi participând la formarea trombului; plasma sangvină: soluţie proteică în care circulă elementele figurate, reprezentând un

vehicul pentru hormoni şi vitamine, metaboliţi, anticorpi; în viaţa postnatală, în condiţii normale, elementele figurate sunt formate la nivelul MOH; majoritatea proteinelor plasmatice sunt formate la nivelul ficatului.

Metode de studiuFrotiu din sânge periferic:

Strat subţire, uscat la temperatura camerei Colorare

Metoda de elecţie: May Gruenwald Giemsa, Alternative: Wright, Romanowsky, Metode citochimice: peroxidaza, fosfatazele, rPAS, Metode IHC: markeri leucocitari de membrană,

Examinare Cu obiectiv 40 sau imersie (100oil) Aspect general al frotiului:

Morfologia eritrocitelor Formula leucocitară

Plasma sangvină• Reprezintă 5% din greutatea corpului (în medie 3.500 ml)• Componente: 90% apă, 10% proteine, hormoni, vitamine, lipoproteine, carbohidraţi, metaboliţi şi

electroliţi.• Proteine majore: fibrinogen, albumine, globuline,

– reglează volumul sanguin, – menţin vâscozitatea, – leagă hormonii,

• Secţiuni histologice: masă amorfă, omogen acidofilă, localizată în lumenul vascular.Elementele figurateElemente figurate:

anucleate eritrocite: transportă gazele respiratorii, trombocitele: coagulare.

nucleate leucocitele - tranzitorii în sângele circulant, pe care îl părăsesc la nivelul capilarelor şi

venulelor postcapilare; devin celule conjunctive mobile.

ERITROCITELE Cele mai numeroase elemente figurate Valori normale

Bărbat: 5 mil/mm3 Femeie: 4.5 mil/mm3

Nou-născut: 6-7 mil/mm3 Creşterea numărului: poliglobulie

Sportivi Persoane care trăiesc la altitudine

Scăderea numărului: anemie• Formă: disc biconcav

pe frotiu: rotundă sau uşor ovalară,• Diametru mediu 7µ, considerate etalon,• Nu au nucleu, • Citoplasmă omogenă, roşie-cărămizie (cu eozină)- datorită hemoglobinei• Zona centrală, palid colorată ocupă 1/3 din diametru, Deformare reversibilă la trecerea prin vasele capilare, Mediu plasmatic hipoton: balonizare;

persistenţa mediului hipoton: hemoliză cu apariţia de fantome eritrocitare (resturi membranare)

Membrana eritrocitului Model trilaminat lipoproteic (proteine integrale şi periferice) Lipidele: colesterol, lipide neutre, fosfolipide, glicolipide Enzime: fosfolipaza A şi lizofosfolipaza Raportul colesterol-fosfolipide: menţinerea fluidităţii membranare, relaţie cu durata de viaţă a

eritrocitului (medie: 120 zile) Antigenii de grup sangvin( ABO şi Rh) Degradarea eritrocitelor: în splină, reutilizarea hem-ului şi fierului

Citoplasma eritrocitului Microtubuli şi microfilamente ancorate la membrană Hemoglobina (sinteza globinei, sinteza porfirinei, cuplarea cu fierul)

A1: cantităţi mari la adult A2: cantităţi mici F: fetală

enzime (LDH, peroxidază, catalază, anhidrază carbonică), vitamine B, acid folic Pot persista resturi nucleare (considerate patologice)

Corpi Jolly Inele Cabot

Funcţiile eritrocitelor Transportul gazelor respiratorii Legarea gazelor respiratorii la hemoglobină: catalizată de anhidraza carbonică şi methemoglobin

reductază Hb+O2 – oxihemoglobină Hb+CO2 – carboxihemoglobină Hb+CO – carbohemoglobină, ireversibilă (intoxicaţii)

RETICULOCITELE • Sunt hematiile tinere prezente în circulaţie într-o proporţie de 0,5-1,5%. • Prezintă în citoplasmă: ribozomi, resturi de ARN, care se evidenţiază cu albastru-briliant cresyl,

sub forma unei reţele de filamente şi granule, colorate în albastru.

Trombocitele

(Plachetele sangvine) Origine: măduva hematogenă – megacariocit Durată de viaţă: 8-12 zile Valoare normală: 150.000-400.000/mm3 Denaturare: splină (trombocitoliză) Frotiu: elemente anucleate dispuse în grupuri mici

TROMBOCITUL• Fragment din citoplasma megacariocitului, • Formă de disc biconvex sau neregulată,• Mărime: cel mai mic (2-4µ), • Nu are nucleu, • Are o structură granulară,

– o zonă centrală - granulomer – o zonă periferică – hialomer; conţine actomiozină.

• La nivel membranar are o serie de receptori de tipul: GlicoProteinei I, II, III.• Are rol în coagularea sângelui.

Ultrastructură Granulomer

Granule fine şi vacuole Mitocondrii, lizozomi, vezicule golgiene, peroxizomi Granule alfa (PDGF), Granule dense: serotonină, calciu, epinefrină Canaliculi care se deschid la suprafaţă

Hialomer Microtubuli, microfilamente, rol în menţinerea formei si în mişcări, Factori implicaţi în coagulare (trombostenina)

Membrană Prelungiri scurte şi ramificate Lipoproteine care absorb fibrinogenul şi FVIII Aderenţa la perete vascular lezat

Funcţiile trombocitelor Implicaţii majore în coagulare, Nu aderă la celulele endoteliale normale, Celulele endoteliale: sinteză de FVIII, PG, fibronectină, activator al plasminogenului,

trombostenină, Lezarea peretelui vascular:

aderarea trombocitelor (ATP, PGE, tromboxan, trombină, colagen, calciu, magneziu) agregarea: formarea trombului metamorfoza vâscoasă

Vindecarea plăgilor: eliberarea factorilor de creştere

LEUCOCITELE (Globulele albe)

Origine: măduva hematogenă 4000 - 8000/mm3 >8000: leucocitoză <4000: leucopenie Criteriu de clasificare:

mărimea tinctorialitatea citoplasmei

prezenţa şi tipul granulaţiilor specificeSe recunosc uşor după:

• prezenţa şi forma nucleului,• dimensiuni: de 2 -3 ori >hematiile.

Clasificarea leucocitelor se face după forma nucleului şi după prezenţa granulaţiilor specifice:• Granulocite:

– neutrofile, – bazofile, – Eozinofile,

• Agranulocite: – monocite, – limfocite.

GRANULOCITUL NEUTROFIL• Formă sferică• Mărime: de 2 ori cât o hematie• Nucleu format din 3-5 lobi uniţi între ei• Citoplasmă acidofilă, conţine 2 tipuri de granulaţii:

– neutrofile-specifice: mici, pulverulente, violete, (numeroase)- colagenază şi lactoferină– azurofile-nespecifice (reduse numeric)- lizozomi

1-3% dintre Granulocitele Neutrofile prezintă nuclei nesegmentaţi, fiind considerate forme imature:• în formă de potcoavă (metamielocite)• majusculă I,S,Z (stabkernige

Granulocitul neutrofil segmentat 50-65% în formula leucocitară Origine: măduva hematogenă Sânge circulant: 6-8 ore Ţesuturi: 10-12 zile Neutrofilie, neutropenie

Funcţii Fagocitoză mediată de receptori, anticorpi şi complement

Prima celulă care intervine în infecţii bacteriene Migrează în ţesuturi prin diapedeză Chemotaxia: proprietatea de a recunoaşte şi a răspunde la stimuli Chemokinezia: viteza de locomoţie

Degradează particulele endocitate cu enzimele din granulaţii (lizozomi modificaţi) Poate stoca (fără degradare) unele bacterii: bacil Koch, Legionella pneumophila Incapacitatea genetică de a fagocita: sindrom Chediak-Higashi

GRANULOCITUL ACIDOFIL sau EOZINOFILUL• Formă sferică,• Mărime: de 2 ori cât o hematie,• Nucleu format din 2 lobi uniţi între ei, • Citoplasmă acidofilă, care conţine granulaţii specifice: acidofile - eozinofile, mari, rotunde, egale

ca formă, mărime şi distribuţie.• Membrană cu receptori pt IgE• 2-4%• Origine: măduva hematogenă• Sânge periferic: circulă 6-10 ore,• Trece în ţesutul conjunctiv prin diapedeză,• Variaţie numerică diurnă, • Eozinofilie,

• Eozinopenie.

Funcţii Antihistaminic (număr crescut în boli alergice şi parazitare) Prin eliberarea de histaminază şi arilsulfatază blochează mediatorii eliberaţi în exces de alte

celule, Microfag, capacitate redusă de fagocitoză, Reacţii de apărare de tip imun, Intervin în coagulare prin profibrinolizină, Influenţe hormonale: corticosteroizii determină eozinopenie,

GRANULOCITUL BAZOFIL• Formă sferică,• Mărime: de 2 ori cât o hematie,• Nucleu indentat,• Citoplasmă: acidofilă care conţine numeroase granulaţii specifice, bazofile

– inegale ca formă, mărime şi răspândire, – care acoperă nucleul şi-l fac greu de examinat.

• 0-1% în formula leucocitară• Origine: măduva hematogenă dintr-un precursor comun cu mastocitul (CD34 pozitiv)• Durată de viaţă în sânge circulant: 10-11 zile• Formă rotundă, dimensiuni medii• Similitudini morfologice şi biochimice cu mastocitul,• Prezintă receptori pt IgE produse ca răspuns la diferiţi alergeni,• Intervine în afecţiuni inflamatorii şi alergice.

LEUCOCITELE AGRANULARE LIMFOCITE MONOCITE

LIMFOCITELE 25-35% în formula leucocitară Origine: organe limfopoetice Dimensiuni: mici, mijlocii, mari Celule “cheie” în realizarea răspunsului imun Mobilitate mare intratisulară Peripolesis: dispoziţia în rozetă în jurul macrofagelor, celulelor epiteliale normale şi tumorale Emperipolesis: în citoplasma unor celule

LIMFOCITUL MIC• Formă sferică• Mărime: cât o hematie, cu un diametru de 6-8µ• Nucleu: mare, sferic, heterocromatic, • Citoplasmă: bazofilă, redusă cantitativ, sub forma unui lizereu fin, perinuclear.

LIMFOCIT MARE • Morfologie:

celulă de talie mare care prezintă in citoplasmă granulaţii nespecifice mici, eozinofile,

Clasificarea limfocitelorPe criterii funcţionale, imunologice:

Limfocit B (timo-independent) De memorie Efector: se transformă în plasmocit sub influenţa limfocitului T helper

Imunitatea umorală Markeri: CD20, CD79

Limfocit T (timo-dependent) Helper, supresor, citotoxic Imunitatea celulară, secretă limfokine, factori de creştere, interferoni şi interleukine Markeri: CD3, CD4, CD8

Limfocit non-B timoindependent NK (natural killer), K (killer)

MONOCITUL• Formă sferică• Mărime: cel mai mare dintre leucocite, de 3-4 ori > decât o hematie, (15-21µ) • Nucleul: excentric, forme diferite (reniform, oval, trapezoid), cu cromatina dispusă în lamele sau

blocuri mari,• Citoplasmă bazofilă abundentă, albastră-cenuşie conţine granulaţii nespecifice azurofile

(lizozomi). Prelungiri membranare 5-8% în formula leucocitară Origine: măduvă hematogenă, ganglioni limfatici, splină Durată de viaţă în sângele circulant: 60-72h Precursor al sistemului macrofagic şi al celulelor prezentatoare de antigen

FORMULA LEUCOCITARĂ Reprezintă raportarea procentuală a leucocitelor. Numărarea a minimum 300 elemente nucleate consecutive. La copii, valori mai mari pentru limfocite ( >45%) Variaţii dependente de:

vârstă, sex, moment diurn, stress, efort fizicGranulocite neutrofile segmentate 50-65%

Granulocite neutrofile nesegmentate 1-3%

Granulocite eozinofile 2-4%

Granulocite bazofile 0-1%

Limfocite 25-35%

Monocite 5-8%

Criteriile de diagnostic ale elementelor figurate

• Forma elementului figurat,• Marimea elementului figurat,• Nucleul,• Citoplasma: tinctorialitate, granulaţii,• Raport N/C.

HEMATOPOEZADefiniţie

• Proces permanent de formare a elementelor figurate sanguine pe măsura distrugerii lor.• 1 secundă

– 3-4 milioane hematii– 120 mii leucocite– 3 milioane trombocite

• Are loc la nivelul măduvei roşii hematogene pe toată durata vieţii Teoria unicistă: toate celulele precursoare se formează dintr-o celulă stem multipotentă

CSP• Este o celulă nediferenţiată cu:

– Dimensiuni mici (6-8µ)– Nucleu mare, ovalar, eucromatic, nucleolat– Citoplasmă bazofilă, redusă cantitativ

• Reprezintă 0,2% din populaţia celulară a măduvei hematogene• Funcţie: se divide şi dă naştere precursorilor orientaţi pentru fiecare serie (UFC)

UFC• Sunt celule de tip precursor

– Sunt mici, au citoplasmă bazofilă– Nucleu mare, eucromatic, nucleolat

• Nu pot fi diferenţiate morfologic ci doar imunologic• Nu se pot distinge morfologic de un limfocit• Fiecărei serii îi corespunde o celulă orientată specific

HEMATOPOEZAEtapele parcurse de celule în cursul hematopoezei

• Multiplicarea– Mitoză: homotipică sau heterotipică– Amitoză

• Maturarea: apariţia caracterelor morfologice specifice fiecărei celule• Citodiabaza: diapedeză sau liză

Etapele majore ale hematopoezei Multiplicarea

Prin diviziune mitotică Amitoză: celulele din seria megacariocitară Diviziuni homotipice-homoplastice: celulele rezultate sunt identice cu celula de origine Diviziuni heterotipice-heteroplastice: celule diferite de celula de origine Rata de diviziune: mai mare la celulele iniţiale din fiecare serie

Maturarea: achiziţia de caractere specifice Apariţia Hb în celulele seriei roşii Apariţia granulelor specifice în seria granulocitară

Citodiabaza: elementele mature trec în circulaţie (diapedeză – leucocite, şi liză enzimatică – eritrocite, trombocite)

Stadiile Hematopoezei sunt:• Hematopoeza intrauterină-prenatală

– Stadiul mezenchimal– Stadiul hepatic – Stadiul timic– Stadiul splenic– Stadiul ganglionar

– Stadiul medular• Hematopoeza postnatală

– la nivelul măduvei hematogene• Hepatic

– Dominant între lunile 2 şi 5– Megalocite, eritrocite, granulocite şi tronbocite– Focarele hematopoetice involuează după luna a 5-a, dar reversibil

• Timic– Hemocitoblastele mezenchimale formează limfocite, începând cu luna a 3 a– Limfocitele timice populează primordiile ganglionare şi splenice (ganglionii şi splina

devin organe limfoide)• Splenic

– Hemoclazie intensă, dispariţia megaloblastelor - megalocitelor– Eritropoeză – granulocitopoeză (L.3), apoi limfopoeză– Postnatal: organ limfopoetic, trombolitic şi eritroclazic

• Ganglionar– Iniţial formează eritrocite şi granulocite– După activare timică: limfocite, monocite şi plasmocite

• Medular– Din L.3, devine matură funcţional după L.7 – Postnatal, formează toate elementele figurate sanguine

HEMATOPOEZA PRENATALĂ Stadiul mezenchimal• Începe în ziua 14-18 iniţial la nivelul mezenchimului extraembrionar (insulele Wolff şi Pander)

şi apoi în cel intraembrionar – din partea centrală se formează hemocitoblastele – seria megaloblastică: megalocitele

(până luna aV-a)– din partea periferică se formează angioblastele-celulele endoteliale

HEMATOPOEZA PRENATALĂ Stadiul hepatic

• Între lunile II-V ficatul devine cel mai important organ hemato-limfopoetic• Hemocitoblastele din mezenchim populează mugurele hepatic şi dau naştere seriilor:

– megalocitară (eritrocitară)– granulocitară– trombocitară– limfocitară

• Postnatal, la nivelul ficatului pot apare focare de hematopoeză doar în condiţii patologice HEMATOPOEZA PRENATALĂ Stadiul timic

• Începând cu luna a III-a, hemocitoblastele ajunse la acest nivel se vor diferenţia:– predominant în limfocite T, care vor migra în luna a IV-a şi a V-a în alte organe

limfopoetice: splina şi ganglionii limfatici– în mai mică măsură spre elemente ale seriei eritrocitare– Până la pubertate, timusul rămâne organ limfopoetic

• HEMATOPOEZA PRENATALĂ Stadiul splenicIniţial în splină are loc hemoclazia seriei megalocitare,

• Ulterior are loc: – Eritropoeza– Granulopoeza (luna a III-a)– Limfopoeza (luna aV-a)

• La adult, splina rămâne organ limfopoetic, eritroclazic şi trombolitic

HEMATOPOEZA PRENATALĂ Stadiul ganglionar

• În primordiile ganglionare, hemocitoblastele se diferenţiază iniţial în precursori granulocitari şi eritrocitari

• Odată cu popularea lor de către limfocitele timice are loc o involuţie a funcţiei eritropoetice şi granulocitopoetice

• Postnatal rămân organe limfopoetice, plasmocitopoetice şi monocitopoetice

HEMATOPOEZA PRENATALĂ Stadiul medularMăduva osoasă hematogenă începe să se formeze din luna a III-a (clavicule) fiind complet constituită în luna a VII-VIII-a

• Preia funcţia eritropoetică, granulopoetică, trombocitopoetică, monocitopoetică, limfopoetică şi plasmocitopoetică

• Postnatal este singurul organ care produce toate elementele figurate sanguine

Studiul hematopoiezei

• Puncţie-aspiraţie creasta iliacă, stern, sacrală• Frotiuri medulare• Coloraţii : MGG, Wright, Romanovski, Perls• Parametrii:tipuri celulare, morfologie, procent