ghid633

7/21/2019 ghid633

1/15

GHIDUL DE STUDIU

Catedra Microbiologie - MedicinGeneralAn IILucrri practice semestrul I

Tabla de materii:

Sterilizarea i dezinfecia

Recoltarea produselor patologice

Preparate microscopice. Coloraia simpl. Coloraia Gram

Coloraia Ziehl-Neelsen. Coloraii speciale

Medii de cultur

Teste biochimice utilizate pentru identificarea bacteriilor

Reacii antigen-anticorp. Generaliti. Reacia de aglutinare. Reacia de precipitare

Reacia de fixare a complementului (RFC). Reacii antigen-anticorp cu reactani marcai:IF; ELISA

Reacia de fixare a complementului (RFC)

Teste care utilizeazvizualizarea complexelor antigen-anticorp prin artificii tehnice

Antibiograma metoda difuzimetric

Antibiograma metoda E-test, metoda diluiilor (CMI)

Schema de diagnostic etiologic n bolile infecioase

Resurse bibliografice

Sterilizarea i dezinfecia

Sterilizarea

Esenial:

Definiie- este procedeul prin care sunt ndeprtate sau distruse toate microorganismele (forme

vegetative i spori) de pe suprafaa i din interiorul unor obiecte.

Pregtirea obiectelor pentru sterilizare.

Metode de sterilizare:1. Sterilizarea prin caldur(uscatsau umed)

a) Caldura uscat:- nclzirea la incandescen- Sterilizarea cu aer supranclzit ( cuptorul Pasteur = Poupinel)

7/21/2019 ghid633

2/15

3. Sterilizarea cu radiaii ionizante4. Sterilizarea prin filtrare

Important

La fiecare metodse precizeazparametrii se sterilizare, materialele care pot fisterilizate prin metoda respectivi metodele utilizate pentru control.

Dezinfecia

Esenial:

Definiie- distrugerea i/sau ndeprtarea numai a anumitor microorganisme (n special a celor

patogene) de pe suprafaa i din interiorul unor obiecte.

Metode de dezinfecie:1. Dezinfecia prin cldur

a) Clduruscat:- Flambarea

b) Cldurumed:- fierberea- pasteurizarea- tindalizarea- sterilizarea cu vapori cureni

2. Dezinfecia prin radiaii3. Dezinfecia cu substane chimice. Antiseptice i dezinfectante, grup heterogen de substane

care nu se supun principiului toxicitii selective.

Ce trebuie stie studenii:

Definiia sterilizrii i a dezinfecie cu precizarea diferenelor.Metodele de sterilizare i de dezinfecie.

Ce trebuie sfacstudenii:

Spregateacmaterialele pentru a fi sterilizate.Ssterilizeze ansa bacteriologic.Stransfere mediu de culturlichid dintr-un balon Erlenmeyer ntr-o eprubetcu aplicareaflambrii.

ntrebri de control:

1. Sterilizarea prin caldura uscata:a) se face prin autoclavare;b) se utilizeaza pentru sterilizarea sticlariei de laborator;

c) se utilizeaza pentru sterilizareainstrumentarului chirurgical;d) se utilizeaza pentru sterilizarea anseibacteriologicee) se poate efectua prin incalzirea la incandescenta;

2. Flambarea este utilizata pentru sterilizarea:a) medii de cultura cu zaharuri;b) t l b t l i b l l i t l tili ii

7/21/2019 ghid633

3/15

Recoltarea produselor patologiceEsenial:

Diagnosticul etiologic depinde n mare masurde recoltarea corecti nsmnarea pe

medii corespunztoare a probelor patologice.Pentru fiecare boalinfecioastrebuie cunoscut:

DE UNDE/ CUM/ CND/ CT- se recolteazDE UNDE- selectarea produsului patologic se face n raport cu localizarea infeciei

(poarta de intrare, ci de diseminare, ci de eliminare)CUM- tehnica corectde recoltareCND momentul se stabilete n raport cuperioada evolutiva bolii i obligatoriu

nainte de administrarea de chimioterapiceCT- existo cantitate suficientpentru examenul bacteriologic/serologic

Important:

Definiia produsului patologic

Util:

Reguli generale de recoltare- Prelevarea produsului patologic se face steril- Proba patologicse eticheteaz- Proba patologicprelevatn teren se ambaleazcorespunztor- Expedierea la laborator se face ct mai rapid asigurnd condiii de temperatur,

aerare sau anaerobiozcorespunztoare- Insmnarea pe medii de culturadecvate se va face ct mai repede dup

recoltare i, daceste necesar chiar la patul bolnavului

Recoltarea produselor patologice de la bolnavi sau purttori- de la nivelul tractului respirator- de la nivelul tubului digestiv- de la nivelul tractului genito-urinar- sngele- lichidul cefalorahidian- puroiul- fragmente de esut

Ce trebuie stie studenii:- regulile generale de recoltare- particularitile recoltrii diferitelor produse patologice


- recoltarea unei secreii faringiene

ntrebri de control:

1. Urina in vederea efectuarii uroculturii, se recolteaza:a) Prin metoda jetului intreruptb) Din prima urina de dimineatac) Dupa toaleta riguroasa a organelor genitale externed) In orice moment al zileie) Intotdeauna seara

2. In microbiologie se utilizeaza pentru diagnosticul etiologic al unei boli infectioase:

7/21/2019 ghid633

4/15

Preparate microscopice. Coloraia simpl. Coloraia Gram

Esenial:

Tipuri de preparate microscopice:1. Preparatul nativ:

- Definiie- Aplicaii n microbiologie

2. Frotiul- Definiie- Timpii de executie ai frotiului- Aplicaii n microbiologie

Coloraia simpl- se face cu albastru de metilen sau cu fucsin- Este utila in diagnosticul prin ex. microscopic direct din produsul patologic n gonoree,

meningita cerebrospinalepidemicetc.

Coloraia Gram- permite clasificarea bacteriilor n Gram-pozitiv i Gram-negativ pe baza diferenelor de

structurale peretelui celular- tehnica de colorare

1. frotiul fixat este acoperit cu violet de genian: 1-2 min.(Se spalcu apde la robinet).2. se acopercu o soluie de lugol pentru mordansare, 2 min.(Se spalcu ap).

3. decolorare cu alcool-acetontimp de 20 sec, pnnu se mai dizolvcolorant. (Se spalcu ap).4. se recoloreazcu fuxindiluat/ safranin, 2 min.( Se spalcu ap)5. se usucfrotiul i se examineaz cu imersie.

Important:

Aplicaii n diagnosticul de laborator a coloraiilor studiate

Ce trebuie stie studenii:- Timpii de efectuare a preparatelor microscopice

- Timpii coloraiilor


- sefectueze preparate microscopice i coloraii

- sexamineze la microscopul optic frotiul realizat- sobserve proprietile morfo-tinctoriale ale diferitelor specii bacteriene

ntrebri de control:1. Coloratia Gram evidentiaza:

a) coci asezati in gramezi;b) coci asezati in lanturi;c) bacilli asezati in lanturi;d) bacilli asezati izolat;e) coci asezati in diplo;

2. Coloratia Gram:a) in coloratia Gram decolorarea se face prin tratare cu alcool-acetona;b) d l f id lf i i l l tili

7/21/2019 ghid633

5/15

Coloraia Ziehl-Neelsen. Coloraii specialeEsenial:

Coloraia Ziehl-Neelsen

- evideniazbacili acido-alcoolo rezisteni (BAAR) genulMycobacterium- timpii coloraiei (se pornete de la preparatul etalat, uscat i fixat):

- se acoperlama cu fucsina concentrat5-10 min. i se nclzete pnla emisia de vapori (nuse ajunge la fierbere)- se decoloreazcu acid sulfuric 20% - 30 sec ( se spalcu ap)- se decoloreazcu alcool etilic 96% pnla ndepartarea colorantului - 30 sec (se spalcu ap)- se recoloreazcu albastru metilen 2 min.- se spala frotiul cu ap- se lasa la uscat in stativ

Important:

Citirea si interpretarea:- se folosete obiectivul de imersie- Micobacteriile (bacilul tuberculos, bacilul leprei) apar colorate in rosu pe fond albastru =bacili acido-alcoolo rezistenti = BAAR, celelalte specii i elementele celulare apar colorate nalbastru.

Util:

Coloratii speciale

1. Coloraia pentru capsul(metoda Burri)- cu tude China = pe fond negru bacteriile aparcolorate in rosu, cu o zona clar, incolorn jur (aceasta zoncorespunde capsulei, carenu se coloreaz).

2. Coloraia Mller pentru spori = sporii se coloreazn rou, formele vegetative nalbastru.

3. Coloraia cu verde malachit i safraninpentru spori = sporii se coloreazn verde,formele vegetative n rou.

4. Coloraii pentru cili: metoda Leifson i impregnare argenticZettnov.5. Coloraia Neisser pentru evidenierea corpusculilor Babe-Ernst la Corynebacterium

diphteriae.6. Coloraia Fontana Tribondeau pentru spirochete.

Ce trebuie stie studenii:- Timpii coloraiei Ziehl-Neelsen i ce proprietate evideniazaceastcoloraie- Coloraii speciale pentru formaiuni celulare facultative

Ce trebuie sfacstudenii:- Scoloreze prin metoda Ziehl-Neelsen un frotiu din sput- Sexamineze la MO frotiul colorat- Sexamineze frotiurile model pentru formaiunile facultative (capsul, spori)

ntrebri de control:1. Pe un frotiu din sputa colorat Ziehl- Neelsen:

a) bacteriile Gram(+) apar in albastru;a) bacteriile Gram(-);b) leucocitele apar rosii;c) bacteriile acido-alcoolo rezistente apar albastre;d) Mycobacterium se coloreaza in rosu.

2 Caracterul de acido alcoolo rezistenta este

7/21/2019 ghid633

6/15

d)Bacillus.e) Streptococcus

Medii de culturEsenial:

Definiie

Condiiile pe care trebuie sle ndeplineascorice mediu de culturpentru ca spoatfi utilizat

Important:

Cum se obine un mediu de cultur etape

Criterii de clasificare ale mediilor de cultur:

- Dupconsisten: lichide, solide, semisolide- Dupprovenien: naturale, sintetice- Dupcompoziie i scop: simple, complexe i speciale

Medii de cultur(duputilizarea lor n laborator):- medii complexe- de utilitate general: uzuale, cu proteine native- medii speciale, pentru izolarea i identificarea anumitor bacterii- selective- de mbogire- pentru cultivarea bacteriilor anaerobe

- pentru cultivarea fungilor- pentru teste biochimice

Util:

nsmnarea produselor patologice i izolarea n culturpurnsmnare = punerea n contact a unei culturi bacteriene sau a unui produs patologic

cu mediile de cultur.

Tehnici de nsmnare- Tehnica nsmnrii prin epuizare:

Scop: obinerea coloniilor izolate, folosite n continuare pentru obinerea deculturpur

- nsmnarea prin nepare (pe medii solide aflate n tuburi)- nsmnarea n pnz

Caracterele culturilor microbiene- n mediu lichid- Pe mediu solid

Colonii S (smooth), exempleColonii R (rough), exemple

Ce trebuie stie studenii:- Ce este un mediu de cultur- Caracterele culturilor microbiene pe medii lichide i solide- Diferenele dintre coloniile S i R

Ce trebuie sfacstudenii:- nsmnarea pe medii solide folosind tehnica epuizrii ansei- Examinarea placilor cu medii de culturnsmnate cu diferite specii bacteriene

7/21/2019 ghid633

7/15

c) Lowenstein-Jensend) Levine) Drigalski

2. Medii de cultura pentru fungi pot fi:

e) Drigalskif) Geloza-socolatieg) Muller-Hintonh) Sabouraudi) Lowenstein-Jensen

Teste biochimice utilizate pentru identificarea bacteriilor

Important:

Bacteriile pot fi identificate i prin comportarea lor metabolic, prin produsele care rezultn urma reaciilor biochimice.

Util:

I Teste rezultand din metabolismul energetic bacterian

1. Precizarea tipului de respiraie.Cultura se nsmaneazprin ncorporare n gelozVeillon n tuburi Weinberg. Bacteriile

strict aerobe se dezvoltnumai la suprafa(B.subtilis),cele anaerobe (Clostridium perfringens)

numai n profunzime,zona de la suprafaunde mai e dizolvat oxigen rmannd fara cultur,iarbacteriile aerob-anaerob-facultative se dezvoltn toatcoloana mediului (Enterobacteriaceae).2. Proba oxidrii si fermentriipune n evidencapacitatea unei bacterii de a

degrada un substrat (zahr, polialcool, etc.) pe cale oxidativfermentativsau prin ambelemodaliti. Se utilizeazo gelozsemimoale, tamponatcu adaos de glucozsau alt substrat i unindicator de pH (albastru de brom-timol) .

Bacteriile care degradeazoxidativ glucoza (Pseudomonas aeruginosa) vireazn galbennumai la suprafa. Bacteriile care degradeazoxidativ i fermentativ glucoza vor vira n galbentoatcoloana mediului iar cele care degradeaznumai fermentativ glucoza vireazculoareamediului n galben numai n profunzime (Clostridium).

3. Cercetarea catalazei.Catalaza este o enzimcare scindeazapa oxigenatn

oxigen i ap, fiind prezentla bacteriile cu metabolism oxidativ. Stafilococul este catalazo-pozitiv, iar streptococul este catalazo-negativ.4. Reducerea nitratilor n nitriti.Aceastproprietate se pune n evidena prin

cultivarea bacteriei n appeptonatce conine 0,1 % nitrat de potasiu.5. Testul oxidazelorse aplicla identificarea meningococilor i gonococilor.

II Teste rezultnd din tipurile fermentative

1. Testul rou metilevideniazfermentarea glucozei cu scderea pH-lui sub 5.2. Testul Voges-Proskauerpune n evidenfermentarea acetoinica glucozei.3. Testul beta-galactozidazei.Pentru identificarea multor bacterii, degradarea

lactozei prin beta-galactozidazare mare importan, dar n aceastdegradare alturi de enzimintervine i sistemul de transport (permeaza) pentru lactoz.

4. Testul fermentrii carbohidrailor se urmrete n appeptonatla care seadaugun carbohidrat (glucoza, lactoza, manitol, maltoz, zaharoz, etc.) n proporie de 1% i unindicator de pH. n urma fermentrii carbohidrailor mediul ce acidifici indicatorul de pHvireazn culoarea corespunzatoare zonei acide.

III. Teste rezultate din metabolizarea compusilor azotai

7/21/2019 ghid633

8/15

3. Producerea de hidrogen sulfuratpune n evidendescompunereaaminoacizilor cu sulf n special sub aciunea cistein-desulfhidrazei.

4. Evidenierea L- i D-fenilalanindezaminazei.Aceste enzime scindeaz Lrespectiv D-fenilalanina cu formare de acid fenilpiruvic, care cu clorura fericda o culoare verde.

5. Testul ureazei.Ureaza este o enzimcare descompune ureea n amoniac i dioxid de

carbon.

IV. Teste rezultate din necesiti nutritive minimale

1. ntrebuinarea citratului pe mediul Simmons.Bacteriile din genulKlebsiellaiSalmonella cresc pe acest mediu utilizand citratul ca unicsursde carbon.Escherichia colineavnd sistemde transport pentru citrat nu se dezvoltpe acest mediu.

2. Dezvoltarea pe mediul cu acetat.E.colifolosete acetatul ca unicsursde carbon(prin ciclul glioxilic) i se dezvolta pe un mediu minimal ce conine acetat de sodiu ca unicsursa de carbon iun indicator de pH. Prin acest test fi diferentiat genulEscherichiade genul Shigella, care nu poate utilizaacetatul ca unica sursa de carbon.

Ce trebuie stie studenii:- Aplicarea testelor biochimice pentru identificarea unor specii bacteriene mai

importante

Ce trebuie sfacstudenii:- Cteva teste biochimice: testul catalazei, testul rou metil, testul Voges Proskauer,

testul fenilalanin dezaminazei.

ntrebri de control:1. Testele biochimice :

a) Permit identificarea bacteriilorb) Ne ajuta la stabilirea tratamentului ce trebuie utilizat intr-o anumita infectiec) Au la baza fenomenul de degradare a unor substraturi de catre bacteriid) Sunt necesare in vederea identificarii bacteriilor din Genul Staphylococcuse) Sunt necesare doar pentru identificarea bacteriilor acido-alcoolo rezistente

2. Studierea proprietatilor biochimice:a) Reprezinta o etapa a diagnosticului de laborator intr-o boala infectioasab) Reprezinta o etapa a diagnosticului clinic al unei boli infectioasec) Este importanta pentru stabilirea genului bacteriand) Este importanta pentru stabilirea speciei bacterienee) Esteneimportantainmicrobiologie

Reacii antigen-anticorp. Generaliti. Reacia de aglutinare.Reacia de precipitare

Aglutinarea bacterian

Esenial:

Definiie- este o reactie antigen-anticorp de agregare, n care antigenul este reprezentat de celulebacteriene sau fragmente de celule bacteriene n suspensie (antigen particulat). Sub aciuneaanticorpilor specifici, complexele imune antigen-anticorp formeazreele tridimensionale nprezenta unor electrolii din mediu i n anumite condiii de temperatura i pH, constituind agregatevizibile. Reactia de aglutinare se foloseste n identificarea unor bacterii pe baza proprietilorantigenice, ct i pentru evidenierea anticorpilor aglutinani din serul de bolnav.

7/21/2019 ghid633

9/15

1. Aglutinarea pe lama. Se folosete preponderent n diagnosticul direct bacteriologic ,pentru identificarea rapidpe baza proprietilor antigenice a unor tulpini izolate din produsulpatologic (n primul rnd bacterii gram-negative) i mai puin n diagnosticul indirect serologic.

Aglutinarea pe lama drelaii de ordin calitativ, evideniind o corespondenntre serulimun folosit i antigenul de identificat. Este o reacie de orientare i se continucu o reacie de

aglutinare n tuburi pentru confirmare.

2. Aglutinarea n tuburise efectueazde obicei n 6 eprubete n care se realizeazdiluiicrescnde din serul imun standard sau din serul de cercetat.

n aglutinarea bacterian, dupnatura i localizarea antigenului care participla reacie,existdoutipuri principale de aglutinare: somaticsau aglutinare O i ciliarsau aglutinare H.

Reacia de aglutinare n tuburi se folosete n douscopuri principale : pentru identificareaunui microorganism (antigen) izolat dintr-o infecie i n diagnosticul serologic al unei infeciipentru evidenierea anticorpilor din serul de bolnav fade un antigen standard.

Util:

Cele mai importante reacii de aglutinare folosite n diagnosticul serologic al bolilor infecioase sunt:reacia Widal, n febra tifoidi febrele paratifoide, reacia Wright n brucelozi reacia Weil-Felix n tifosulexantematic i alte rickettsioze.

3. Reacia de aglutinare pasivsau aglutinarea pe suport se utilizeazatunci cnd antigenul este osoluie molecular. n urma fixrii pe un suport particulat acesta devine aglutinabil n prezena serului imun.Reaciilese pot folosi att la identificarea unui antigen, ct i la cercetarea anticorpilor corespunztori folosindun antigen cunoscut.

- latex aglutinare- hemaglutinare (ex: TPHA test de confirmare n diagnosticul sifilisului)

REACIA DE PRECIPITARE

Definiie

Esenial:

- este o reacie antigen-anticorp de agregare, n care antigenul este reprezentat de macromomoloculen soluie coloidal. Punerea n contact a antigenului cu anticorpul corespunztor duce la formarea unorcomplexe antigen-anticorp care precipitatunci cand elementele ce participn reacie se gsesc n proporieoptim.

Important:

Tipuri de reacii de precipitare

1. Reacia de precipitare inelar

- se folosete n diagnosticul bolilor infecioase - reacia Vincent-Bellot i Ascoli- n industria alimentarpentru a diferenia originea crnii sau a produselor de carne date n comer- n medicina legalpentru a identifica originea petelor de snge (specia de la care provin)|

2. Reacia de floculare- este o reacie n care precipitarea apare prin amestecul antigenului cu serul imun (n toat

masa amestecului) sub formde flocoane. Aceastreacie se utilizeazn principal pentrutitrarea toxinelor microbiene i a serurilor antitoxice pornindu-se de la observaia cflocularea apare prima datn eprubeta n care existproporie optimde antigen ianticorp (reacia de floculare Ramon).

- VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) n diagnosticul sifilisului

3 P i it l tili l d di l b l l t

7/21/2019 ghid633

10/15

- difuzia dubln care ambii reactani difuzeazi formeazlinii de precipitare la locul dentalnire

- difuzia n camp electric- imunoelectroforeza (IEF) este o metodcare asociazprincipiul

electroforezei (EF) cu principiul difuziunii n gel

- contraimunelectroforeza

Ce trebuie stie studenii:- care sunt reaciile de agregare antigen-anticorp- diferenele dintre reacia de aglutinare i reacia de precipitare- tipuri de reacii de aglutinare cu exemple- tipuri de reacii de precipitare cu exemple

Ce trebuie sfacstudenii:- reacia de aglutinare pe lam- examinarea altor reacii de agregare antigen-anticorp (TPHA, reacia de

aglutinare n tuburi)

ntrebri de control:1. Tipuri de aglutinare in tuburi:a) Reactia Weil-Felixb) Reactia Widalc) Reactia Wrightd) Reactia de aglutinare somaticae) Reactia de aglutinare flagelara

2. Tipuri de reactii de precipitare pot fi :

a) Precipitarea inelarab) Reactia de flocularec) Reactia Ascolid) Reactia de fixare a complementuluie) ReactiaVincentBellot

Reacia de fixare a complementului (RFC). Reacii antigen-anticorp cu reactani marcai: IF; ELISA

Reacia de fixare a complementului (RFC)

Esenial:

Definiie - este o reacie antigen-anticorp cu participarea complementului. Evideniereareaciei se face utiliznd sistemul hemolitic.

Important:

Tehnici1. Bordet - Wassermann: era utilizatn diagnosticul serologic al sifilisului (reacia Bordet-Wassermann

n bruceloz, tuse convulsiv, etc2. Ida Bengston :folositn diagnosticul leptospirozelor, rickettsiozelor, a infeciilor cu chlamydii, etc.3. Kolmer. sau fixarea complementului la rece4. Breadstreet i Taylor, larg aplicatn ultimul timp n infeciile virale, infecii cu mycoplasme,febrQ

Teste care utilizeazvizualizarea complexelor antigen-anticorp prin artificiitehnice

Util:

Sensibilitatea reaciilor antigen-anticorp poate fi mritlegnd de anticorp (mai rar de antigen) un

7/21/2019 ghid633

11/15

Ce trebuie stie studenii:- definiia RFC i elementele care intrntr-o astfel de reacie- care sunt reaciile antigen-anticorp cu reactani marcai


- sinterpreteze o reacie de fixare a complementului folositn diagnosticul direct i/sau ndiagnosticul serologic al unei boli infecioase

ntrebri de control:1. Tehnici ce au la baza reactia de fixare a complementului:a) tehnica Wassermannb) tehnica Ida-Bengstonc) tehnica Breadstreet si Taylord) Ascolie) Widal

Antibiograma metoda difuzimetricEsenial:

Definiia antibiogramei- metodde laborator folositpentru testarea sensibilitii unei tulpini bacteriene izolate

dintr-un produs patologic fade diverse antibiotice.Important:

Metode folosite pentru testarea sensibilitatii in vitro la antibiotice

1. metode calitativea. metoda difuzimetricKirby Bauer - clasicb. metoda cu antibiotic incorporat in mediu semisolid kit-ul comercial ATB

Biomerieux, Franta modern

2. metode cantitativea. metoda diluiilor n mediu lichid - clasicb. metoda Etest AB BIODISK , Suedia modern

1.a Metoda difuzimetric(Kirby-Bauer)Principiul metodei:

- antibioticul difuzeazn mediu i inhibmultiplicarea bacteriilor n funcie de gradientulde concentraieTehnica de lucruInterpretare (sistemul SIR sensibil, intermediar sensibil, rezistent)

1.b Metoda cu antibiotic incorporat in mediu semisolid kit-ul comercial ATBBiomerieux,Franta

PrincipiuGaleria ATBpermite determinarea sensibilitii microbiene la un set de agenti antibacterieni /antifungici , incorporate ntr-un mediu semisolid. Este alctuitdin 16 perechi de godeuri, dincare 4 nu conin antibiotice i sunt martori de cretere.

Celelalte perechi de godeuri conin diferite antibiotice n cite douconcentraii (c= concentratiemai mica i C= concentratie mai mare) pentru a putea eticheta fiecare tulpintestatca fiindsensibil, intermediarsau rezistent.Citire si Interpretare

- Dacnu existcretere la nici o concentraie nseamntulpinsensibil, daca existacretere numai n godeul cu concentraia mai miccnseamnsensibilitate intermediar,daca exista cretere n ambele godeuri (ci C) semnificrezistenla respectivul agentantimicrobian.

7/21/2019 ghid633

12/15

Ce trebuie stie studenii:- definiia i principiul antibiogramei- tehnicile de realizare ale antibiogramei- interpretarea antibiogramei prin metoda difuzimetric


- realizarea unei antibiograme prin metoda difuzimetric- interpretarea unor antobiograme demonstrative

ntrebri de control:

1. Antibiograma prin metoda difuzimetrica poate preciza:a) Concentratia minima inhibitorie a unui antibiotic

b) Antibioticul la care bacteria este sensibilac) Antibioticul la care bacteria este rezistentad) Antibioticul la care bacteria este intermediar-sensibila

e) Nu poate preciza concentratia minima inhibitorie a unui antibiotic

Referine bibliografice:http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10

http://www.abbiodisk.com/bd_company.html

Antibiograma metoda E-test, metoda diluiilor (CMI)

Important:

2.a Metoda dilutiilor in medii lichide:

Se folosete pentru determinarea concentraiei minime inhibitorii (CMI).Tehnica de lucru

La diluii crescnde de antibiotic n mediu de culturse adaugaceeai cantitate din tulpina detestat.

Interpretare

Ultimul tub limpede indica limita sensibilitatii germenului, fata de substante sau concentraia

minimainhibitorie activa( CMI).

2.b E-Test

Tehnica de lucru

Pe suprafata unei placi cu mediu agarizat prensmnatcu tulpina testatn condiiistandardizate sunt depuse radiar bandeletele pe care este fixat un gradient exponenial deantibiotic .

Interpretare

Dupa incubare corespunzatoare, CMI este indicatde intersecia dintre zona elipticdeinhibiie a culturii i scala de gradiente a langhetei.

Util: interpretarea antibiogramei
http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.abbiodisk.com/bd_company.htmlhttp://www.abbiodisk.com/bd_company.htmlhttp://www.abbiodisk.com/bd_company.htmlhttp://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10

7/21/2019 ghid633

13/15

Referine bibliografice:http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10

http://www.abbiodisk.com/bd_company.html

Ce trebuie stie studenii:- definiia antibiogramei prin metoda E-test i prin metoda diluiilor

Ce trebuie sfacstudenii:- interpretarea unor antibiograme demonstrative

ntrebri de control:

1. Concentratia minima inhibitorie poate fi precizata prin:a) Metoda dilutiilorb) Metoda difuzimetricac) E-testd) Prin orice tehnica de efectuare a antibiogrameie) Teste serologice

Schema de diagnostic etiologic n bolile infecioaseEsenial:

Metodele folosite n diagnosticul etiologic sunt grupate n :

A.) Metode de diagnostic direct sau bacteriologic

B.) Metode de diagnostic indirect :

- diagnostic serologic

- diagnostic biologic prin intradermoreacii

Important: etapele de diagnostic

A.) Diagnosticul bacteriologicurmrete evidenierea agentului patogen din produsul

patologic, de obicei prin izolarea i identificarea lui. Se poate efectua din primele zile de

boal. Principalele etape sunt:

I. Recoltarea produselor patologice(vezi recoltarea produselor patologice).

II. Examenul microscopic direct din produsul patologic(vezi preparate

microscopice)

13
http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.abbiodisk.com/bd_company.htmlhttp://www.abbiodisk.com/bd_company.htmlhttp://www.abbiodisk.com/bd_company.htmlhttp://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10

7/21/2019 ghid633

14/15

III. Izolarea agentului patogenprin nsmnarea produselor patologice pe medii

de culturpentru obinerea de culturpurcare se folosete la:

IV. Identificarea agentului patogen prin:

1. Cercetarea proprietilor morfotinctoriale

2. Caracterizarea proprietilor de cultura

3. Cercetarea proprietilor biochimice

4. Stabilirea structurii antigenice

5. Cercetarea proprietilor de patogenitate in vivosau in vitroprin reproducerea

infeciei experimentale pe animale de laborator, evidenierea eliberrii de toxine

sau produi extracelulari netoxici (coagulaza, fibrinolizina, hialuronidaza, etc.).

V. Determinarea sensibilitii la antibiotice( antibiograma) este o etap

obigatorie dupa identificare, constituind baza aplicrii unei terapii

raionale.

Stabilirea tipului fagic (lizotipia) pentru multe specii bacteriene este o metoda complementar

pentru clasificarea unei tulpini bacteriene n cadrul unui gen sau specie, utilizatn

investigaii epidemiologice.

B.)Diagnosticul indirectevideniazinstalarea imunitii n urma trecerii prin infecie. Se

efectueazprin:

I. Metode de diagnostic serologic, care se bazeazpe apariia anticorpilor specifici n

serul bolnavilor. Se recolteazcel puin douprobe de ser, una la nceputul bolii i

alta la interval de 10-14 zile, pentru a urmri creterea n dinamica titrului de

anticorpi (vezi reacii antigen-anticorp).

II. Metode de diagnostic biologic care folosesc o intradermoreacie (IDR) care

evideniazfie:

- imunitatea umoral(IDR Shick n difterie sau IDR Dick n scarlatin)

- starea de hipersensibilitate tardiv, aspect al imunitii mediate celular (IDR latuberculin)

14

7/21/2019 ghid633

15/15

15

Util:Schema de prelucrare a produselor patologice

Produs patologic

Preparat nativ(urina, lcr,

secretia vaginala,secretia uretrala )

Preparat colorat(Frotiu)

( Sputa,lcr,urina )

Cultura

1. Identificareabacteriilor2. Antibiograma

Ce trebuie stie studenii:

- cum se face un diagnostic etiologic n bolile infecioase (etape)

Ce trebuie sfacstudenii:- surmreascetapele de diagnostic alegnd o boalinfecioas

Resurse bibliografice

1. Ivanof A, sub redacia. Lucrri practice de microbiologie. Ed II. Litografia IMF Cluj-Napoca 1983

2. Junie M. Microbiologie fumdamental. Editura MedicalUniversitarIuliuHaieganu 2004

3. Junie M. Infecii bacteriene, virale, parazitare, fungice. Editura MedicalUniversitarIuliu Haieganu 2007

4. Matinca D, Hodrnu C. Lucrri practice de microbiologie pentru studenii Facultiide Farmacie. Editura MedicalUniversitarIuliu Haieganu 2003

5. Blbe V, Pozsgi N, sub redacia. Bacteriologie medical. Vol II. Editura medical1985

ghid633

Documents

Transcript of ghid633