Diagnostic de laborator in neuroviroze2 aspecte clinice Meningite virale Encefalite virale

Definitie de caz meningita virala Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre: Cefalee sever i persistent; Redoare de ceafa Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele: Fotofobie Greata Vrsturi; Faringita exudativa Dureri abdominale La sugari si copii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei Algoritm de diagnostic virusologic SINDROM ETIOLOGIE Produs IZOLARE Dg. Dg. POSIBILA Patologic + DIRECT INDIRECT IDENTIFICARE =detectie =serologie directa 80% MF De electie PCR DA Enterovirusuri SNF Culturi Polio LCR celulare Cocsackie Animal de MENINGITA A si B laborator ASEPTICA E.C.H.O. 20% LCR De electie PCR DA alte virusuri: Culturi VVZ-VZV celulare V. URLIAN Animal de VHS-HSV laborator VCM-CMV V. PARAGRIPALE

EnterovirusuriPolioviruses 1, 2, 3 Coxsackie A1-24/ B1-6 ECHO - 33 (Enteric cytopatogenic human orphans) Enteroviruses 68-71 Herpangina - A2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 Rinofaringita A21; Conjunctivit hemoragic A24; Stomatit veziculoas A i B; Pleurodinie Bornholm B; Miocardita B3,B4; infecia mamei n primele luni de sarcin duce la malformaii cardiace ale ftului. Pericardita B3, B4, B5 Meningita acut seroas - A i B; cu faringita sau herpangina. Encefalita B3, B5, este letal; Nevrite paralizii faciale -A i poliradiculonevrite - B; Boal diareic acut B4, B5 Hepatita viral -B3, B5 .

V. Poliomielitice Paralizie flasca Distala Asimetrica Sesibilitate pastrata

Produse patologiceSuspensia de Materii Fecale(MF) Recoltare. ca atare in cantitate de 4-8 grame ( falanga distala index) in solutie 1 M de Mg SO4 suspensie 20% (stabilizeaza infectivitatea) tuseu rectal cu un mic tampon umectat in mediu de transport viral Precizari. enterovirusurile se excreta saptamani la rand , dar sansele de izolare scad, se recomanda recoltarea a 2 -3 probe la interval de 24-48 ore Stocare si transport. la 2-4 C, maxim 2 ore Prelucrare. Se amesteca MF cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile Se centrifugheaza la 1500- 10 si se recolteaza supernatantul Se adauga de gentamicina 100 ug/ml. Lichid cefalorahidian (LCR) Recoltare. punctie la nivelul L4-L5, cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte de inceperea tratamentului antibiotic, asepstic. - 5-6 ml in 3 tuburi sterile se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia, clorurorahia si presiunea LCR. pleiocitoza (cresterea nr. de celule limfo-monocitare in LCR) 1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice. Stocarea. la 2-8 C, fara mediu de transport 1ora Transportul. Rapid. Daca se depaseste 1 ora de la recoltare se face obligatoriu pe gheata sau la -70 C. Prelucrare. se utilizeaza ca atare. Spalatura nazo faringiana(SNF) Recoltare. tampoan steril cu coada introdus in cornetul nazal inferior, secretii de la nivelul peretelui posterior al nazofarinxului. tampon prin cavitatea bucala pentru secretii de pe peretele posterior al faringelui cu evitarea atingerii tamponului de limba, obraji sau buze. Stocare si transport. optim imediat dupa recoltare (cand nu este posibil: -70 C, cu transport pe zapada carbonica) Prelucrare. tamponul se dispune in tub steril cu 15 ml mediu pt. 1 ora centrifugare la 2500 - 15 minute, la 4 C supernatantul este indepartat si sedimentul se resuspendat in 3-4 ml TFS

INFECII CU VIRUSURI COXSACKIE1. Izolarea virusului pe culturi celulare (exceptnd unele virusuri Coxsackie grup A) se face n culturi primare de rinichi de maimu (Macaccus rhesus) sau n culturi diploide umane. 2. Izolarea pe animale prin inoculare pe diverse ci (intracerebral, intramuscular, intraperitoneal) la oarece sau hamster, nou-nscut, pentru virusurile Coxsackie grup A (paralizie flasca geeralizata) i unele virusuri Coxsackie grup B (paralizie localizata cu tonus pastrat).

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI DE CELULE ECP PICNOTIC LITIC(microscop cu inversie de faza)

Reactia de seroneutralizare Capacitatea anticorpilor de a neutraliza infectivitatea virusurilor Identifica : - Virusurile (virus neutralizare) : se folosesc dilutii de virus; serul este constant - Titreaza anticorpii (seroneutralizare) : dilutii de ser; virusul este constant

RSN: IDENTIFICAREA VIRUSURILOR=VIRUS NEUTRALIZARE TITRAREA ANTICORPILOR= REACTIA DE SERONEUTRALIZARE VIRUSNEUTRALIZARE = VIRUS NECUNOSCUT/ANTICORPI CUNOSCUTI (SER IMUN DE REFERINTA) SE FOLOSESC DILUTII DE VIRUS SI SE MENTINE SERUL IMUN DE REFERINTA CONSTANT

REACTIA DE SERONEUTRALIZARE= ANTICORPI NECUNOSCUTI/ VIRUS CUNOSCUT

SE FOLOSESC DILUTII DIN SERUL IMUN DE REFERINTA SI SE MENTINE VIRUSUL CONSTANT

ETAPE 1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE 2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE 3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE metoda plajelor Dilutii seriale ale virusului

Insamantare pe celule susceptibile dupa adsorbtie, 1h la 37, se acopera cu agar

Restrictia raspandirii virusului determina liza focalizata a

monostratului celular vizibila sub forma plajelor, PFU

Metoda plajelor

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE = Repetarea etapei 1 cu amestecurile antigen-anticorp

Tabla de sahPrimul set : 8 amestecuri A-H cuprind antiseruri anti 42 serotipuri de enterovirusuri ce pot fi izolate in culturi celulare A,B,C,D,G si H cate 10 antiseruri specifice E si F cate 11 Al doilea set : 7 amestecuri J-P cu antiseruri anti 19 virusuri Coxsackie A

`

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologicSINDROM ETIOLOGIE POSIBILA Prod. Patologic IZOLARE Dg. Dg. DIRE INDIRECT CT =serologie

=detec t. directa HERPESVIRUSURI: HSV1 HSV2 VZV ENCEFALITA EBV ACUTA CMV ARBOVIRUSURI: MENINGOENCEFALITA TOGAVIRUSURI FLAVIVIRUSURI ENCEFALOBUNYAVIRUSURI MIELITA V. RABIC LCR BIOPSIE CEREBRALA PCR NU Culturi IF celulare Animal de laborator PCR De electie Culturi IF pt. ARBO celulare VIRUSURI Animal de laborator

SALIVA, AMPRENTE DERMICE, CORNEENE, LCR SANGE BIOPSIE CEREBRALA POSTINFECTIOASE: SNF V. RUJEOLOS LCR V. URLIAN V. GRIPALE BIOPSIE VVZ CEREBRALA

Culturi celulare

PCR NU IF