Cuaderno de Practicas de Microbiologia

8/10/2019 Cuaderno de Practicas de Microbiologia

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PRCTICAS DEL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA:BACTERIOLOGA Y MICOLOGA

M PAZ MERINO JIMNEZ

MIREIA LLINARES MARCELO


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Autoras: M Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo

Maquetacin: Patricia Penavella Soto

Edita: Educlia Editorial, S.L.

Imprime: Publidisa SA

ISBN: En curso

Depsit Legal: En curso

Printed in Spain/Impreso en Espaa.

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PREFACIO

El Cuaderno de Prcticas de Microbiologa es un

trabajo fundamental en el desarrollo de la asignatura de

FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS

MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga

terica que paralelamente tiene que ir desarrollada con

prcticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe

existir una consecucin en la ejecucin de las prcticas al

mismo tiempo que se vaya impartiendo la teora.

Con este cuaderno el desarrollo de las prcticas

seguira un orden, fundamental para cumplir los protocolos

de actuacin en el laboratorio de Microbiologa. El alumno

siguiendo los pasos de dicho cuaderno ir desarrollando la

prctica con correccin hasta la obtencin de los resultados

finales que es lo que se pretende.


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INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

1. MANEJO DEL MICROSCOPIO

2. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL

3. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.

4. ESTERILIZACIN POR CALOR SECO.

5. ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO.

6. ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN.

7. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

8. CNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

9. URINOCULTIVO

10.PLEGADO DE UN FILTRO

11.INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LASBACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.

12.PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LATINCION SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.

13.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR

14.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR

15.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS

16.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS


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17.REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.

18.REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.

19.REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM

20.REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDOALCOHOL RESISTENTE.

21.REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS

22.REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRIO DE LA TINTA CHINA.

23.PRUEBAS BIOQUMICAS.

24.ANTIBIOGRAMA.

25.HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS

26.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DELPORTAOBJETOS

27.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DELCUADRADITO DE AGAR

28.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL HOYO ENPLACA

29.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUBREESCAVADO EN PLACA

30.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DE LA GOTAPENDIENTE

31.TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACINDIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.


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PRCTICA 26. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

PORTAOBJETOS.

VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Portaobjetos

-

Placa Petri

- Papel filtro

-

Agua destilada

-

Medio de cultivo Sabouraud- Pipeta Pasteur estril

- Asa de siembra

-

Muestra de hongos

- Estufa Pasteur

TCNICA

1. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Prctica 7.6).

2. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.

3. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todava en estado lquido)

con la ayuda de una pipeta Pasteur estril.

4. Dejar secar el medio.

5. Recortar un crculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.

6. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada paramantener el ambiente hmedo para el crecimiento del hongo.

7. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estril tomar un poco de

muestra.

8. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeo movimiento

circular con el asa.

9. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.

10. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.


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VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

-

Cubreobjetos

- Pipeta Pasteur

-

Colorante azul de lactofenol

- Muestra ya incubada (tcnica del portaobjetos)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

-

Microscopio

TCNICA

1. En el portaobjetos donde habamos realizado la tcnica, echamos una gota de azul de

lactofenol.

2. Poner un cubreobjetos encima.

3. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Gota azul en porta

1 2

Cubre sobre la muestra

Observar al microscopio

3


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INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO


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CUADRADITO DE AGAR.

VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Placa Petri con medio agar Sabouraud

-

Bistur

- Pinzas

-

Asa de siembra

-

Muestra con hongos- Portaobjetos

- Cubreobjetos

-

Placa Petri vaca

- Papel filtro

- Agua destilada

-

2 capilares de microhematocrito

- Estufa

- Regla

-

Tijeras

TCNICA

1. Dibujar en un papel un cuadradito de 15x15 cm. Colocar sobre el papel la placa con agar

Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las lneas dibujadas anteriormente con la ayuda de

un bistur.

2. Con unas pinzas estriles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un

portaobjetos. El portaobjetos deber haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.

3. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.

4. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.

5. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.

6. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.

7. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.


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Cortar cuadrado de agar

1 2

Colocar en portaobjetos

3

Co er muestra

4

Sembrar en los laterales

5

Colocar cubreobjetos Colocar en la cmara hmeda

6


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INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO


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VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

-

Portaobjetos

- Cubreobjetos

-

Pipeta Pasteur

- Colorante azul de lactofenol

- Muestra ya incubada (tcnica del cuadradito de agar)

- Pinzas

-

Mechero Bunsen

- Microscopio

TCNICA A

1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.

2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el

cuadradito de agar.

3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.

4. Poner el cubre sobre la gota de azul.



Limpiar portaobjetos

1 2

Coger el cubre

Poner gota de azul

3

Poner cubre sobre la gota de azul

4


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TCNICA B

1. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.

2. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedar sobre el

portaobjetos.

3. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol.

4. Poner el cubreobjetos limpio sobre la gota de azul.




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HOYO EN PLACA.

VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Placa de Petri (la que hemos usado en la prctica 27)

-

Cubreobjetos

- Asa de siembra

-

Muestra con hongos

-

Pinzas

TCNICA

1. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.

2. Cogemos la placa que hemos usado en la prctica anterior, y sembramos en las paredes del

hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.

3. Con una pinza estril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado

con alcohol y flameado).

4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.


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INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

Coger un poco de muestra

1 2

Sembrar paredes del hoyo

3

Colocar cubreobjetos


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VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

-

Portaobjetos

- Pipeta Pasteur

-


- Muestra ya incubada (tcnica del hoyo en placa)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

-

Microscopio

TCNICA


2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el hoyo.





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INDICA RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO


1 2

Coger el cubre

Poner gota de azul

3


4


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CUBRE ESCAVADO EN PLACA.

VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.

-

Cubreobjetos

- Asa de siembra

-

Muestra con hongos

-

Pinzas

TCNICA

1. Con unas pinzas estriles, colocar 3 4 cubreobjetos limpios en un ngulo de 45o en la

placa con medio Sabouraud.

2. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estril.

3. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.

4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo


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VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

-

Portaobjetos

- Pipeta Pasteur

-


- Muestra ya incubada (tcnica del cubre inclinado en placa)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

-

Microscopio

TCNICA


2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habamos puesto en la

placa.





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1 2

Coger el cubre

Poner gota de azul

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PRCTICA 31. TCNICA DE VISUALIZACIN DE HONGOS.

VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA

ADHESIVA.

MATERIAL

-

Alcohol

- Mechero Bunsen

- Pipeta Pasteur estril

-

Cinta adhesiva transparente

- Portaobjetos

- Azul de lactofenol

-

Muestra con hongos

- Microscopio

TCNICA

1. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.

2. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran

los hongos.

3. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.

4. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.



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INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO


1 2

Tomar muestra

3

Gota de azul en orta Colocar cinta sobre la ota

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