12.11.2010

1

BIOLOGIA VIRUSURILOR.

DIAGNOSTICUL DE

LABORATOR AL VIROZELOR.

Particularitile virusurilor

1. Reprezint structuri acelulare cu potenial

infecios

2. Dimensiuni de rangul nm (20-400 nm)

3. Genomul viral este constituit dintr-un singur tip de

AN (ADN sau ARN)

4. Sunt lipsite de metabolism propriu, fiind parazii

obligai intracelulari

5. Nu cresc i nu se divid, se reproduc n celule vii

6. Nu pot fi cultivate pe medii artificiale

7. Rezisten natural la antibiotice

CLASIFICAREA VIRUSURILOR

Dup tipul AN (cu genom ARN/ADN)

Dup dimensiuni (mici 20-50 nm, medii

50-150 nm, mari peste 150 nm)

Dup tipul de simetrie a capsidei

(helicoidal, cubic, mixt)

Dup compozitia chimic (simple,

complexe)

Dup gazd (om, animal, insect, bacterie)

Dup sensibilitatea n mediul extern,

substane chimice, etc

Ordin (-virales)

Familie (-viridae)

Subfamilie (-virinae)

Gen (-virus)

Specie (Virusul gripal,

poliomielitic, al hepatitei B,

etc)

http://en.wikipedia.org/wiki/Order_%28biology%29http://en.wikipedia.org/wiki/Family_%28biology%29http://en.wikipedia.org/wiki/Family_%28biology%29http://en.wikipedia.org/wiki/Subfamilyhttp://en.wikipedia.org/wiki/Subfamilyhttp://en.wikipedia.org/wiki/Genushttp://en.wikipedia.org/wiki/Genushttp://en.wikipedia.org/wiki/Specieshttp://en.wikipedia.org/wiki/Species

12.11.2010

2

Virion unitate structural infecioas a

virusului

Viroid ARNm.c., circular, asociat cu boli

la plante

Prion protein termostabil infecioas,

cauzeaz la om boala Kuru, Creutzfeldt-

Jacob, sindromul Gerstmann-Straussler,

scrapie la oi

COMPOZIIA CHIMIC I STRUCTURA

VIRIONULUI

Virusurile simple acid nucleic (AN) i

nveli proteic capsida (ansamblu numit

nucleocapsid)

Virusurile complexe nucleocapsid i un

nveli extern, lipoglicoproteic

(supercapsid, peplos)

Acidul Nucleic ADN sau ARN, mono- sau

bicatenar, liniar, circular sau

fragmentat.

ARN monocatenar : ARN+ (caten cu sens,

funcie de ARNm) sau ARN- (caten

fr sens, este necesar prezena

enzimei polimeraza)

Funcia AN asigurarea replicrii AN i

expresia genomului pentru sinteza

proteinelor virale

Virusuri ADNd.c.: Hepadnaviridae,

Adenoviridae, Herpesviridae, Poxviridae

Virusuri ADNm.c.+: Parvoviridae

Virusuri ARNm.c.+: Picornaviridae,

Caliciviridae, Togaviridae, Flaviviridae,

Coronaviridae, Retroviridae

Virusuri ARNm.c.- : Rhabdoviridae,

Paramyxoviridae, Orthomyxoviridae,

Bunyaviridae, Arenaviridae, Filoviridae

Virusuri ARNd.c. : Reoviridae

12.11.2010

3

I: Double-stranded DNA (e.g. Adenoviruses, Herpesviruses, Poxviruses)

II: Single-stranded (+) sense DNA (e.g. Parvoviruses)

III: Double-stranded RNA (e.g. Reoviruses)

IV: Single-stranded (+) sense RNA (e.g. Picornaviruses, Togaviruses)

V: Single-stranded (-) sense RNA (e.g. Orthomyxoviruses, Rhabdoviruses)

VI: Single-stranded (+) sense RNA with DNA intermediate in life-cycle (e.g. Retroviruses)

VII: Double-stranded DNA with RNA intermediate (e.g. Hepadnaviruses)

Capsida format din uniti proteice, capsomere,

aranjate simetric.

1. Simetrie helicoidal capsomerele se fixeaz

pe catena de AN, form de bastona

2. Simetrie cubic (icosaedric) capsomerele se

aranjeaz n jurul AN, formnd un icosaedru

(poliedru regulat cu 20 fee triunghiulare i 12

vrfuri), eikos=20

3. Simetrie mixt (bacteriofagii, poxvirusurile)

Funcia capsidei protecia AN, rol antigenic,

adeziune

http://en.wikipedia.org/wiki/Adenovirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Herpesvirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Poxvirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Parvovirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Reovirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Picornavirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Togavirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Orthomyxovirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Rhabdovirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Retrovirushttp://en.wikipedia.org/wiki/Hepadnavirushttp://rsb.info.nih.gov/nih-image/java/rotator/hsv.html

12.11.2010

4

Supercapsida structur glucido-lipido-proteic,

derivat din membrana celulei gazd. Lipidele

provin din membrana celular, iar glicoproteinele

sunt de origine viral (ex.: hemaglutinina,

neuraminidaza)

Funcie protecie, antigene de suprafa, adeziune

Unele virusuri conin enzime polimeraze,

transcriptaze, etc.

Aciunea factorilor fizici, chimici

Virusurile sunt foarte sensibile la cldur, desicare,

raze UV. Detergenii i solvenii inactiveaz

virusurile cu supercapsid.

Pot fi conservate prin liofilizare sau la -80

C

REPRODUCEREA VIRUSURILOR

I ADSORBIA virusului la celula-gazd prin intermediul

receptorilor specifici (tropism)

II PENETRAREA virusului n celul

a) Pinocitoz (viropexis)

b) Fuziunea membranelor

c) Translocare

d) Injectarea AN n citoplasm (bacteriofagii)

III DECAPSIDAREA ( cu enzime celulare). Din acest

moment urmeaz faza de eclips.

12.11.2010

5

IV BIOSINTEZA (sinteza proteinelor i replicarea AN)

Are loc n citoplasm (virusuri cu ARN) sau n nucleul

celulei (virusuri cu ADN)

Biosinteza virusurilor ADN

ADNdc transcrierea ARNm replicarea,

translaia (precoce, tardiv) sinteza proteic

Biosinteza virusurilor ARN

ARN+ replicare, translaie sinteza proteic

ARN- transcriere ARNm replicare, translaie

sinteza proteic

Retrovirusuri (ARN+) transcriere ADN- ADNdc

transcriere ARNm replicare, translaie,

sinteza pr. (sau integrare n cromosom)

12.11.2010

6

RNA VIRUSES THAT DO NOT HAVE A DNA PHASE

Genome

RNA-dependent

RNA polymerase (=transcriptase)

in virion

Infectivity of RNA

Initial event in cell

RNA + No Infectious Translation

RNA - Yes Non-infectious Transcription

RNAd.c. Yes Non-infectious Transcription

RETROVIRUSES

Genome RNA-dependent RNA

polymerase

(=transcriptase) in virion

Infectivity of RNA

Initial event in cell

RNA + Yes Non-infectious

Reverse transcription

V. MORFOGENEZA (asamblarea) i maturizarea virionilor

Proteinele capsidale particip la formarea nucleocapsidei (n nucleu sau citoplasm) iar glicoproteinele sunt inserate n MCP, substituind proteinele celulare. n aceast faz apar incluziunile virale sau corpusculii elementari.

VI. ELIBERAREA virionilor (liza celulei, nmugurire, exocitoz). Nr lor poate atinge 100.000 per/celul

Ciclul reproductiv viral are durata variabil de la cteva ore pn la cteva zile (ex.: 8h poliovirus, 72h citomegalovirus).

Interferena viral fenomen n care, consecutiv infeciei unei celule cu 2 virusuri, multiplicarea unuia este inhibat (virus interferat / virus interferent)

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/de/4/46/Virus-Budding-001.gif

12.11.2010

7

12.11.2010

8

RELAII VIRUS-CELULA GAZD

Infecie viral productiv, citocid

Virusul este infecios iar celula permisiv (receptiv). La nivelul ma/o corespunde infeciilor acute, aparente sau inaparente (grip, rujeol ...)

Infecii virale persistente

Celulele infectate supravieuiesc, cu producerea permanent sau intermitent a virusului.

1. Infecii abortive (cu virioni defectivi) infecia nu se exprim, are loc transformarea celulelor prin proteine virale. Ele devin int pentru efectorii imunitii (macrofage, T-limfocite) n cursul unor infecii cronice (ex.: Panencefalita Sclerozant Subacut (PESS) post-rujeolic)

2. Infecii integrate (virusuri ADN sau copii de ADN ale

Retrovirusurilor). Consecine:

- Transformarea malign a celulei gazd

- Infecii lente - manifestarea infeciei dup o

perioad de incubaie ndelungat cu expresia

integral a genomului viral (ex.: HIV-SIDA)

- Infecii latente - reactivri ocazionale, repetate ale

infeciei cu exprimarea integral a informaiei

genetice virale (ex.: infecia herpetic)

- Infecii cronice perioade de remisie i acutizare,

virusul este prezent permanent, chiar n absena

simptomelor (ex.: hepatita viral B)

CULTIVAREA VIRUSURILOR

Virusurile sunt cultivate pentru:

- Stabilirea diagnosticului etiologic

- Testarea infeciozitii virusurilor

- Testarea preparatelor antivirale

- Producerea vaccinurilor

SISTEME DE CULTIVARE

1. Culturi de celule

2. Ou embrionat de gin

3. Animale de laborator

Animalele de laborator se utilizeaz limitat

(receptivitate selectiv, preexistena

infeciilor, cost avansat). Se recurge numai

cnd nu exist alte posibiliti (VHB, HIV,

Coxsackie, etc). Constituie modele de

cercetare sau de control al vaccinurilor.

Animale utilizate curent oriceii albi nou-

nscui, dar pot fi utilizai obolani, cobai,

maimue, etc.

Regulile de lucru cu animalele de laborator

(selectare, inoculare, examinare) sunt

identice cu cele din infeciile bacteriene.

Oul embrionat de gin (5-13 zile) reprezint un

mediu de celule nedifereniate, cu multiplicare

activ, steril i lipsit de mijloace de aprare

antiinfecioas. Se utilizeaz n prepararea unor

vaccinuri virale (ex.: gripal)

- Iniial se verific viabilitatea embrionului la ovoscop

n camera obscur.

- Prelevatul se inoculeaz steril cu seringa n

cavitatea amniotic sau alantoidean, sau pe

membrana chorioalantoidean (utiliznd metoda

deschis sau nchis).

- Orificiul se parafineaz i se incubeaz la 35-37

C

timp de 48-72 ore

12.11.2010

9

Culturile de celule (1949 - Enders, Weller, Robbins).

Celule provenite din esuturi adulte sau embrionare, normale sau tumorale. Plasate ntr-un mediu adecvat (nutrieni, pH, t) rmn viabile i se multiplic. Pentru cultivarea virusurilor se utilizeaz culturile n monostrat celular.

Tipurile de culturi de celule (CC):

Culturi primare (primar tripsinizate). Sunt obinute din esuturi adulte sau embrionare de origine animal sau uman. Suport 4-6 pasaje (subcultivri)

Culturi diploide. Obinute din esut embrionar (MRS5, fibroblaste umane). Pot fi subcultivate 40-50 generaii

Linii continui de celule. Obinute din esut tumoral. Pot fi subcultivate nelimitat.

HeLa carcinom de col uterin

KB tumoare a rinofaringelui

Hep-2 tumoare canceroas a laringelui

Obinera culturilor de celule primar tripsinizate:

- Prelevarea esutului (ex.: rinichi de maimu)

- Fragmentarea i splarea cu sol. fiziologic

- Dezagregarea tisular cu enzime proteolitice

(tripsina)

- Separarea celulelor prin centrifugare

- Dozarea suspensiei - 105 106 celule/ml

- ntroducerea celulelor n mediu nutritiv i repartizarea

n recipiente sterile

- Incubarea pn la formarea monostratului celular

(inhibiie de contact)

- Monostratul poate fi infectat cu virus sau servete

drept surs de celule pentru o nou cultivare (pasaj)

Mediile de cultur pentru culturi de celule (Eagle,

Hanks, 199, hidrolizat de lactalbumin, etc),

conin AA, Vit, factori de cretere, sruri

minerale, rou fenol pentru monitorizarea pH

(vireaz n galben n mediu acid). Varietati:

1. Mediile de cretere (pentru cultivarea CC) sunt

mbogite cu ser sangvin (uman, animal)

2. Mediile de ntreinere se utilizeaz pentru

meninerea monostratului n procesul

reproducerii virale. Nu conin ser.

CC reprezint sistemul virus-gazd predilect n

virologia clinic i cercetare.

Inocularea CC

- Se aleg tuburi cu monostrat bine format

- Se nltur mediul de cretere, se spal cu

sol. Hanks

- Se inoculeaz 0,1 0,2 ml de prelevat

- Peste 30-60 min n tuburi se toarn cte

1 ml mediu de ntreinere

- Se ntroduc n termostat la temperatura

adecvat 3 - 4 zile

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

AL VIROZELOR

Indicaii:

- Boli cu msuri terapeutice sau profilactice speciale

(SIDA, hepatite, rubeola, etc)

- Elucidarea etiologiei virale a unor izbucniri

epidemice (meningite, gastro-enterite, pneumonii,

etc)

- Supravegherea epidemiologic

Prelevate: LCR, snge, exsudate, secreii nazale, rino-

faringiene, mase fecale, urin, coninutul veziculelor

i ulceraiilor cutaneo-mucoase, bioptate, etc.

12.11.2010

10

Eficacitatea diagnosticului este condiionat

de:

1. Examinarea precoce (la debutul bolii)

2. Alegerea corect a prelevatelor, calitatea

lor

3. Transportarea rapid a probelor sau

utilizarea mediului de transport

4. Respectarea regulilor de autoprotecie i

de protecie a anturajului la recoltarea,

transportarea i examinarea probelor

METODELE DE DIAGNOSTIC AL VIROZELOR

METODE DIRECTE

- Examenul virusoscopic (evidenierea direct a virionului sau a componentelor lui n prelevate)

- Examenul virusologic (izolarea i identificarea virusului)

- Detectarea Ag virale n prelevat

- Identificarea genomului viral (hibridizarea AN, amplificarea genic PCR)

METODE INDIRECTE

- Serodiagnosticul (creterea de cel puin 4 ori a titrului Ac n dinamic)

EXAMENUL VIRUSOSCOPIC

1. Microscopia optic depistarea n prelevat a incluziunilor virale specifice (corpusculii Guarnieri n variol, Babe-Negri n rabie) sau nespecifice, citoplasmatice sau nucleare. Se prepar frotiuri sau frotiuri-amprente colorate Romanovschi-Giemsa, cu hematoxilin-eozin sau cu fluorocrom

2. Microscopia electronic

3. Imunoelectronomicroscopia mai sensibil, mai specific. Se examineaz complexele imune virus Ac

4. Imunofluorescena (direct i indirect) utilizat n diagnosticul rapid al virozelor

12.11.2010

11

EXAMENUL VIRUSOLOGIC

Prelucrarea prealabil a prelevatelor:

- Omogenizarea (dup necesitate)

- nlturarea elementelor celulare, inclusiv

bacteriene (centrifugare, ultrafiltrare)

- Tratarea cu antibiotice pentru prevenirea

creterii bacteriilor i fungilor contaminani

(penicilin - 500 UA/ml, streptomicin

500 UA/ml, nistatin - 20 UA/ml)

ETAPELE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC

1. Izolarea virusului

2. Evidenierea (indicarea) reproducerii virale

3. Identificarea virusului

Izolarea virusului se realizeaz prin inocularea cu material de examinat a animalelor de laborator, embrionilor de gin sau a culturilor de celule. Alegerea sistemului de cultivare se efectueaz n funcie de particularitile biologice ale agentului etiologic probabil i posibilitile laboratorului.

Indicarea virusului

n culturi de celule

1. ECP (efect citopatic) modificri

degenerative i distrugere celular, rezultat

al multiplicrii virale (rotunjire sau retracie

celular, citoliz, apariia vacuolelor sau

granulelor n citoplasm, picnoza nucleului,

fuziunea membranelor, etc). ECP poate fi

studiat la microscopul optic pe celule

necolorate sau colorate cu hematoxilin-

eozin, Giemsa, fluorocrom.

2. Formarea plajelor

Reprezint focare de celule alterate n

monostratul celular acoperit cu agar.

Numrarea plajelor permite cuantificarea

virusului infectant.

3. Incluziuni virale

Reprezint acumulri paracristaline de

virioni sau de componente virale n locul

de replicare i asamblare a virusurilor

(citoplasm, nucleu). Coloraia Giemsa,

hem-eozin, fluorocrom.

Localizarea, forma i afinitatea tinctorial

(bazofile, acidofile) sunt particulariti

diagnostice pentru unele viroze.

12.11.2010

12

4. Hemaglutinarea (Reacia de HA)

Unele virusuri posed n componena capsidei, n special a supercapsidei, glicoproteine care pot adera la suprafaa hematiilor hemaglutinine (HA).

RHA este caracteristic pentru virusurile cu HA acumulate n mediul de ntreinere. n acest caz mediul de ntreinere aglutineaz eritrocitele unor specii de mamifere sau psri.

5. Hemadsorbia (Reacia de HAd) RHAd este caracteristic virusurilor cu HA care se afl intracelular. n procesul asamblrii acestor virusuri, HA lor se afl deja nserate n MCP a celulei-gazd la nivelul viitorului mugure. Dac la aceast etap n recipientul cu monostrat celular se adaug suspensie de hematii i se menine 15-20 min la temperatura caracteristic fiecrui virus, la microscop pot fi urmrite hematiile fixate la suprafaa celulelor infectate (RHAd).

12.11.2010

13

6. Proba culorii

- Metabolismul celular neafectat virajul culorii mediului din rou n galben (pH acid)

- Metabolismul celular inhibat culoarea mediului nu se modific

7. Interferena

Ex.: V.rubeolic nu produce ECP, dar determin fenomenul de interferen. Pentru detectarea V.rubeolei se infecteaz CC cu virus citopatogen. Lipsa multiplicrii acestui virus confirm prezena V.rubeolic

Indicarea virusului n oul embrionat de gin

Oule se rcesc 18 ore la +4 grade C pentru vazoconstricie maxim, apoi aseptic se taie coaja, se recolteaz lichidul alantoic sau amniotic, iar MCA i embrionul se ntroduc n cutii Petri sterile. Se observ:

1. Moartea embrionului

2. Apariia modificrilor (hemoragii, pustule) pe MCA

3. Acumularea de HA n lichide

Indicarea virusului pe animale de

laborator

1. Boala manifest a animalului, deces

2. Urmrirea virusului n organele-int:

- Hemaglutinare

- Infeciozitatea omogenatelor

- Examene histopatologice (leziuni

inflamatorii, degenerare, incluzii virale

specifice: corp. Babe-Negri n neuronii

infectai cu V.rabic, etc)

Identificarea virusurilor

Determinarea genului, speciei i serotipului de virus prin

stabilirea structurii antigenice.

Se efectueaz cu ajutorul serurilor imune specifice

antivirale n diferite reacii serologice:

- RN

- RLA

- RIHA/RIHAd

- RFC

- RIF

- RIE (ELISA)

- ARI, etc

DETECTAREA AG VIRALE N PRELEVATE

Avantaje: simplitatea i rapiditatea examenului, nu necesit meninerea infeciozitii virusului

Dezavantaje: sensibilitate direct proporional cu cantitatea virusului din prelevat

Se utilizeaz Ac policlonali de origine uman (seruri imune) sau Ac monoclonali (de origine murin)

Reacii: RHAI, RLA, RIF, RIE (ELISA), Western-blot, ARI, etc.

12.11.2010

14

IDENTIFICAREA GENOMULUI VIRAL

(punerea n eviden a AN virali din prelevate n cursul infeciilor virale acute sau cronice i monitorizarea tratamentului).

Pot fi examinate toate esuturile i lichidele biologice

Hibridizarea acizilor nucleici fr amplificare

Hibridizarea dup amplificare (PCR i variantele ei)

DIAGNOSTICUL SEROLOGIC

Esena: depistarea Ac sintetizai de gazd n

rspuns la o infecie viral.

Dup o primo-infecie are loc inducerea

formrii Ac, iar dup o reinfecie sau

reactivare titrul Ac crete n dinamic.

n serodiagnosticul virozelor este obligator de a

examina 2 probe de ser de la bolnav (seruri-

perechi): prima prelevat la debutul bolii, a

doua prelevat peste 15 zile.

Ac sunt depistai n ser, uneori n LCR, exsudate, lichid articular, etc.

Pentru depistarea Ac se utilizeaz Ag virale de referin (suspensie viral inactivat, proteine virale native sau recombinante, oligopeptide sintetice).

Tehnici utilizate: RFC, RIHA, RHAI, RN, RIFI, ARI, AIE (ELISA), etc.

Semnificaie diagnostic prezint trecerea titrului de Ac de la 0 la pozitiv (seroconversie, primo-infecie) sau creterea titrului Ac de cel puin 4 ori n cursul infeciei. Ambele seruri vor fi testate n aceeai zi, prin tehnici identice i n acelai laborator.

TERAPIA ANTIVIRAL

Dificulti:

- Toxicitate (imposibil de a distruge virusul fr afectarea celulei!)

- Apariia mutantelor rezistente

- Activitate asupra virusului n faz de multiplicare

- Costul avansat al tratamentului

Primele preparate antivirale anticanceroase.

Preparatele antivirale contemporane:

- Nu manifest activitate virucid, doar inhib reproducerea viral

- Sunt dirijate contra etapelor reproducerii virale

Adeziunea virusului la celul

Mecanismul blocarea receptorilor celulari (HIV-oligopeptidul T, care reproduce gp120; CD4 solubili)

Dificulti: afinitate redus, degradare rapid

Fuziunea, penetrarea

Reprezint peptide sintetice (pentafuzida-T20, T1249) blocheaz fuziunea virusului HIV cu membrana celular (dificultate injecii s/c zilnice)

Decapsidarea

Amantadina, rimantadina inhib decapsidarea virusului gripal A

Utilizare limitat dezvoltarea rezistenei

Replicarea

Mecanismul blocheaz activitatea enzimelor virale de reproducere (transcriptaze, polimeraze, replicaze)

Avantaj nu influeneaz componentele celulei-gazd

1. Analogi nucleozidici

Se disting de nucleozidele naturale prin modificarea componentului glucidic sau a bazei purinice sau pirimidinice. Blocheaz elongarea catenei de ADN n curs de formare.

- Antiherpetice (aciclovir, ganciclovir, penciclovir, idoxuridin)

- Anti-HIV (zidovudin, didanozin, zalcitabin, stavudin, lamivudin, etc)

- Anti-HBV (entecavir, LdT, LdC faz de cercetare)

12.11.2010

15

2. Analogi nucleotidici

- Cidofovir - CMV, HSV

- Adefovir - HIV, HBV, HSV, CMV

- Tenofovir HIV, HBV

3. Analog al pirofosfatului

- Foscarnet HSV, CMV (HIV, HBV -?)

4. Inhibitori nenucleozidici ai RT HIV

(nevirapin, delavirin, efavirenz)

Blocarea activitii polimerazelor virale se realizeaz prin:

1. Competiie cu substratul natural al enzimei

2. ngrmdirea steric a centrului activ al enzimei

3. Incorporarea n catena de ADN n curs de sintez

4. Blocarea procesului de elongare a catenei de ADN prin incapacitatea de a fixa un alt nucleozid pe analogul su artificial

Asamblarea, eliberarea

- Inhibitori ai proteazei HIV (sanquinavir,

ritonavir, indinavir, amprenavir,

lopinavir, nelfinavir, etc) toxicitate,

rezisten

- Inhibitori ai neuraminidazei virusurilor

gripale (zanamivir, oseltamivir). Activ

contra gripei A i B (efect preventiv,

curativ, rezisten rar)

INTERFERONII (IFN)

IFN ansamblu de proteine capabile s confere celulelor o stare de rezisten la o infecie viral.

IFN tip 1 (clasic, antiviral):

1. IFN-alfa (leucocitar)

2. IFN-beta (fibroblastic)

Inductori ai IFN 1: virusuri, LPS, ARN bicatenar

IFN-gamma, tip 2, imun, produs de LT activate, NK. Manifest activitate munomodulatoare

- IFN acioneaz asupra ciclului de replicare viral prin intermediul celulei: interaciunea IFN-alfa cu receptorul su induce sau stimuleaz expresia unor gene celulare, rezultnd o activitate antiviral (blocarea translaiei ARNm viral, degradarea ARNm viral). Este posibil i blocarea asamblrii i nmuguririi virusului (HIV)

- IFN mresc expresia moleculelor clasa I a CMH, iar IFN-gamma i a celor de clasa II

- IFN mresc activitatea macrofagelor i manifest activitate antiproliferativ

- IFN-gamma activeaz celulele NK

Utilizarea terapeutic a IFN hepatite B i C cronice, infecii herpetice, sarcomul Kaposi, limfome, leucemii

Alte citokine (TNF-a, IL-2, IL-4, IL-10, IL-12) sunt la etapa de testare in vitro.

12.11.2010

16

TERAPIA CELULAR (CMV, EBV)

Fondat pe administrarea CTL (limfocite Tc) autologe.

- Prelevarea sngelui de la bolnav

- Izolarea CTL specifice

- Clonarea i proliferarea CTL in vitro

- Reinjectarea la pacient

VIITOR: fototerapia, imunizarea intracelular (introducerea unei gene ce codific un anticorp antiviral)