DETERMINAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICEANTIBIOGRAMA

Scopul antibiogramei(ABG) este de a determina sensibilitatea unui germen la unul sau mai multe antibiotice in vederea instituirii unei conduite terapeutice eficiente

In acelasi timp, ABG serveste si la supravegherea epidemiologica a rezistentei bacteriene, precum si la identificarea bacteriana

ABG se efectueaza prin tehnici cantitative si calitative

1.TEHNICI CANTITATIVE

1.1.Determinarea CMI(concentratia minima inhibitoare)

- CMI=concentratia minima de antibiotic care inhiba cresterea vizibila a unui germen in 24 de ore

- CMI determina practic efectul bacteriostatic al unui antibiotic

- Principiu: o incarcatura bacteriana standardizata(inocul) se pune in contact cu o serie de concentratii crescande de antibiotic realizand dilutii in progresie geometrica in baza 2

a. Tehnica dilutiilor in mediu lichid

- Inoculul bacterian se distribuie intr-o serie de tuburi sau in godeuri ce contin bulion Mueller-Hinton cu antibioticul in concentratii crescande(0; 0,25; 1; 2; 4; 8;16)

- Inoculul=suspensie dintr-o tulpina bacteriana diluata de ordinul 10⁵ germeni/ml

- Dupa incubare, CMI este data de tubul/godeul care contine cea mai mica concentratie de antibiotic la care cresterea bacteriana nu mai este vizibila

- Metoda are cost ridicat si este laborioasa→situatii de urgenta

b. Tehnica dilutiilor in mediu solid

- Metoda de referinta, folosita pentru cercetari speciale

- Rezervata laboratoarelor mari

- Antibioticul de concentratie data este incorporat in mediul gelozat turnat in placi Petri

- Dupa incubare, CMI este determinata prin inhibarea cresterii pe mediul care contine concentratia cea mai mica de antibiotic

O tulpina se considera sensibila(S) la actiunea unui antibiotic atunci cand CMI a antibioticului respectiv este net inferioara concentratiei sangvine obtinute dupa administrarea unei doze utilizabile in terapeutica

- Rezistenta(R) atunci cand CMI a antibioticului este prea ridicata pentru a putea fi atinsa in vivo fara a utiliza doze toxice

- Intermediara(i) cand CMI nu poate fi atinsa de catre o antibioterapie standard, dar ar putea fi realizata prin doze mari pe cale generala

c. Epsilometrul sau E-testul

- Permite estimarea indirecta a CMI

- Se folosesc bandelete impregnate cu un gradient exponential continuu din antibioticul de testat

- E-testul asociaza metodele de difuzie cu cele de dilutie in mediu solid

- Bandeletele se aplica pe suprafata unui mediu gelozat insamantat in prealabil cu un inocul din tulpina de testat

- Dupa incubare, inhibitia cresterii se traduce printr-o elipsa de inhibitie ale carei puncte de intersectie cu bandeleta definesc CMI

1.2. Determinarea CMB(concentratia minima bactericida)=cea mai mica concentratie de antibiotic care omoara o proportie definita de bacterii intr-un interval de timp si in conditii precise

- Rezervata testarii izolatelor de la bolnavii imunodeprimati sau cand infectia este situata in zone greu accesibile

2.TEHNICI CALITATIVE

2.1. METODA DIFUZIMETRICA

- principiu: pe suprafata unei geloze nutritive turnata intr-o cutie Petri si insamantata uniform cu suspensia bacteriana de testat aflata in faza de crestere exponentiala, se depun microcomprimate de hartie de filtru imbibate cu o cantitate predefinita de antibiotice pe care le elibereaza intr-o cantitate fixa, riguros egala

Insamantarea propriu-zisa

- Germenul de testat provine dintr-o cultura pe mediul lichid sau recoltand cu ansa 5-6 colonii de pe suprafata unui mediu solid neselectiv dupa incubare la 37°

- Coloniile se suspenda direct, fie in solutie cloruro-sodica tamponata, cu ph de 7,2, fie in bulion si se ajusteaza la turbiditatea standard folosind etalonul 5 din scara Mc Farland

- Depunerea inoculului se face fie prin inundare cu produs, fie cu ajutorul unui tampon de vata steril care se imbiba cu suspensie bacteriana

- Se depun discurile

Microcomprimatele sunt comercializate de diferite firme, sunt standardizate, se pastreaza la frigider in ambalaje perfect etanse

- Se depun la distante de minim 15 mm, de marginea placii si 30 mm intre centrele a doua discuri vecine

- Se incubeaza la 37° pentru 24 de ore

- A doua zi se citesc rezultatele

- Diametrele zonelor de inhibitie se raporteaza la tabele interpretative pentru fiecare substanta antimicrobiana, permitand transformarea rezultatelor in categorii de sensibilitate, rezistenta sau sensibilitate moderata

2.2.CAUZE CE POT INFLUENTA INTERPRETAREA ANTIBIOGRAMEI

- Continutul in Ca⁺ si Mg⁺: concentratiile prea mari inhiba actiunea aminozidelor, tetraciclinelor si a polimixinelor

- Continutul in timina: trebuie sa fie fix, altfel deterioreaza activitatea sulfamidelor

- Ph-ul: influenteaza activitatea mai multor antibiotice

- Grosimea stratului de geloza: conditioneaza concentratia sursei de antibiotic; max.4 mm

- Pastrarea microcomprimatelor- in conditii optime

- Densitatea inoculului bacterian-ajustat cu ajutorul unui etalon de opacitate(scara etalon McFarland)

- Temperatura si durata de incubare- trebuie sa fie fixe:18-24h la 35-37°