prelegere>Fiziologia bacteriilor

8/19/2019 prelegere>Fiziologia bacteriilor

http://slidepdf.com/reader/full/prelegerefiziologia-bacteriilor 1/107

FIZIOLOGIAFIZIOLOGIABACTERIILOR.BACTERIILOR.

METABOLISMULMETABOLISMULMICROBIAN.MICROBIAN.CULTIVAREACULTIVAREA



Fiziologia bacteriaFiziologia bacteria!! studiază viaţastudiază viaţaşi activităţile bacteriilor – nutriţia,şi activităţile bacteriilor – nutriţia,

metabolismulmetabolismul, creşterea şi, creşterea şimultiplicarea, condiţiile de cultivare amultiplicarea, condiţiile de cultivare abacteriilor.bacteriilor.Metaboli"#$lMetaboli"#$l bacterian reprezintăbacterian reprezintă

ansamblul de reacţii biochimice careansamblul de reacţii biochimice careau loc în celula vie.au loc în celula vie.- CatabolismCatabolism – reacţii chimice de– reacţii chimice de

descompunere a substanţelordescompunere a substanţelorcomplexe în elemente simple, însoţităcomplexe în elemente simple, însoţităde degajarea energiei (metabolismde degajarea energiei (metabolismenergeticenergetic

- Anabolism Anabolism – reacţii chimice de sinteză– reacţii chimice de sintezăa substanţelor complexe din elementea substanţelor complexe din elemente

simple, necesită energie (metabolismsimple, necesită energie (metabolismconstructiv de sintezăconstructiv, de sinteză



%artic$larit!&ile #etaboli"#$l$i%artic$larit!&ile #etaboli"#$l$ibacteriabacteria!!

".". #ste un metabolism#ste un metabolism necompartimentatnecompartimentat ,,toate procesele metabolice se des$ăşoarătoate procesele metabolice se des$ăşoarăintr-o singură celulăintr-o singură celulă

%.%. #ste $oarte &exibil, realiz'ndu-se prin#ste $oarte &exibil, realiz'ndu-se prindiverse căi metabolice (bacteriile sediverse căi metabolice (bacteriile seadaptează rapid la condiţiile mediuluiadaptează rapid la condiţiile mediului

.. #ste $oarte intens (viteza reacţiilor este#ste $oarte intens (viteza reacţiilor estemaremare

).). *rodusele intermediare din procesele*rodusele intermediare din proceselecatabolice pot + utilizate directcatabolice pot + utilizate direct î î n calitaten calitatede precursori pentru reacde precursori pentru reacţţiile anaboliceiile anabolice(am+bolism(am+bolism

n toate reacţiin toate reacţiile metabolicele metabolice intervinintervin--



Ezi#ele bacterieeEzi#ele bacteriee.. aracterearacteregenerale!generale!- ubstanţe proteiceubstanţe proteice- /ctive în limite largi de temperaturi/ctive în limite largi de temperaturi

(0-12(0-1233 şi de p4 (%-5 şi de p4 (%-5- peci+citate de substrat şi de acţiunepeci+citate de substrat şi de acţiune

(reacţionează cu un substrat(reacţionează cu un substrat

cataliz'nd un tip de reacţiecataliz'nd un tip de reacţie

- peci+citatea este determinată depeci+citatea este determinată decentrul activ al enzimei,centrul activ al enzimei,complementar cu receptorul de pecomplementar cu receptorul de pe

substratsubstrat



Cla"i'carea eCla"i'carea ezzi#elor bacterieei#elor bacteriee

I.I. Co"tit$ti(eCo"tit$ti(e ((permanentepermanente

II.II. I)$cti(eI)$cti(e ((adaptiveadaptive, se sintetizează în, se sintetizează înprezenţa substratului (ex.! lactazaprezenţa substratului (ex.! lactazaIII.III. Re*re"i(e+Re*re"i(e+ sinteza lor este inhibată desinteza lor este inhibată de

acumularea în exces a proacumularea în exces a proddusuluiusuluireacţiei catalizatereacţiei catalizate

,$*! loc$l )e ac&i$e,$*! loc$l )e ac&i$e ((exoenzime,exoenzime,endoenzimeendoenzime

,$*! ti*$l reac&iei catalizate,$*! ti*$l reac&iei catalizate ((oxido-oxido-reductaze, hidrolaze, transferaze, liaze,reductaze, hidrolaze, transferaze, liaze,izomeraze, ligazeizomeraze, ligaze

,$*! i#*act$l a"$*ra #a-o,$*! i#*act$l a"$*ra #a-o - Enzime metaboliceEnzime metabolice- Enzime de patogenitateEnzime de patogenitate, responsabile de, responsabile de

modi+cări patologice ale ţesuturilor,modi+cări patologice ale ţesuturilor,

celulelor ma7o !celulelor ma7o ! hialuronidaza,hialuronidaza,cola enaza, lasmocoa ulaza,colagenaza, plasmocoagulaza,



I#*orta&a *ractic! a "t$)ieriiI#*orta&a *ractic! a "t$)ierii

ezi#elorezi#elor".". 8ol în identi+carea şi clasi+carea8ol în identi+carea şi clasi+carea

bacteriilor (enzimele determinăbacteriilor (enzimele determinăactivitatea biochimică speci+că aactivitatea biochimică speci+că abacteriilorbacteriilor

%.%. 9nele substanţe chimice, antibiotice9nele substanţe chimice, antibioticeinter$erează cu activitatea unorinter$erează cu activitatea unor

enzime, inhib'nd creştereaenzime, inhib'nd creştereabacteriilor (tratamentbacteriilor (tratament

.. :eterminarea mecanismelor:eterminarea mecanismelor

patogenezei in$ecţiilor (unelepatogenezei in$ecţiilor (unele



NUTRIŢIA BACTERIANĂNUTRIŢIA BACTERIANĂ

N$tri&iaN$tri&ia – modalităţile prin care bacteriile– modalităţile prin care bacteriileasimilează din mediu substanţeleasimilează din mediu substanţelenecesare pentru metabolism.necesare pentru metabolism.

Mo)$lMo)$l (tipul de nutriţie la bacterii este(tipul de nutriţie la bacterii esteab"orbti(ab"orbti(..N$trie&iN$trie&i – substanţe, soluţiile cărora pot– substanţe, soluţiile cărora pot

traversa ;* pentru a + antrenate întraversa ;* pentru a + antrenate în

metabolismul celulei. e obţin dinmetabolismul celulei. e obţin dinali#eteali#ete prinprin solviresolvire (săruri minerale,(săruri minerale,<<%%, <, <%% sau după o sau după o digestiedigestie prealabilăprealabilă(proteine, polizaharide, lipide.(proteine, polizaharide, lipide.

=a bacterii digestia este extracelulară (la=a bacterii digestia este extracelulară (la--



6utrienţii servesc în calitate de6utrienţii servesc în calitate dematerial de construcţiematerial de construcţie şişi sursăsursă

de energiede energie pentru sintezapentru sintezacompuşilor şi menţinerea vieţiicompuşilor şi menţinerea vieţiibacteriei.bacteriei. ?ransportul transmembranar ?ransportul transmembranar

".".,i$zie "i#*l!,i$zie "i#*l!

+ *a"i(+ *a"i(

!!

(con$orm gradientului de(con$orm gradientului deconcentraţie, $ărăconcentraţie, $ără consum deconsum de energie! <energie! <%%, <, <%%, acizi graşi,, acizi graşi,

nutrienţi liposolubilinutrienţi liposolubili



%.%. ,i$zie acilitat!,i$zie acilitat! (con$orm(con$orm

gradientului de concentraţie – permitegradientului de concentraţie – permitetransportul transmembranar altransportul transmembranar almoleculelor mari prin intermediulmoleculelor mari prin intermediulproteinelor de transport speci+ceproteinelor de transport speci+ce

integrate in ;*integrate in ;* -- permeaze permeaze.... Tra"*ort acti(Tra"*ort acti( (contra(contragradientului de concentraţie, necesităgradientului de concentraţie, necesităenergie. *articipăenergie. *articipă permeazele şi altepermeazele şi alte

proteine de transportproteine de transport 7+xare7+xare speci+ce.speci+ce.6utrienţii nu suportă modi+cări.6utrienţii nu suportă modi+cări.).). Tra"loca&ieTra"loca&ie – substratul este– substratul estemodi+catmodi+cat chimicchimic (ex.! $os$orilat în(ex.! $os$orilat întimpul transportului membranar@timpul transportului membranar@



ubstanţele care au pătruns înubstanţele care au pătruns în

citoplasmă sunt descompuse de cătrecitoplasmă sunt descompuse de cătreenzimele bacteriene con$orm căilorenzimele bacteriene con$orm căilormetabolice proprii +ecărei speciimetabolice proprii +ecărei specii

bacteriene (ex.! #mbden-;eAerho$,bacteriene (ex.! #mbden-;eAerho$,#ntner-:oudoroB, ciclul pentozelor,#ntner-:oudoroB, ciclul pentozelor,ciclul Crebs, etc. elula obţineciclul Crebs, etc. elula obţineenergie şi precursori care vor +energie şi precursori care vor +

antrenaţi în biosinteză (anabolism.antrenaţi în biosinteză (anabolism.#xcreţia metaboliţilor – di$uzie,#xcreţia metaboliţilor – di$uzie,

proteine de transport, liza bacterieiproteine de transport, liza bacteriei



Nece"it!&ile $triti(e aleNece"it!&ile $triti(e ale

bacteriilorbacteriilor- Nece"it!&i ele#etareNece"it!&i ele#etare, de bază!, de bază! ,,

4, <, 64, <, 6 în cantităţi importante în cantităţi importante@@ , *, De,, *, De,a, ;g, C a, ;g, C în cantităţi mici şi urme de în cantităţi mici şi urme de

o, u, En, ;oo, u, En, ;o.. FacteriileFacteriile *rototroe*rototroe sunt capabile a-şisunt capabile a-şi

realiza integral sinteza metaboliţilorrealiza integral sinteza metaboliţilor

esenţiali.esenţiali.

-- Nece"it!&i "*eci'ceNece"it!&i "*eci'ce.. FacFacteriiteriilele a$/otroea$/otroe solicită suplimentarsolicită suplimentarcompuşi organici pre$ormaţicompuşi organici pre$ormaţi ((factori defactori de

creşterecreştere , care nu pot + sintetizaţi de, care nu pot + sintetizaţi de



Cla"i'carea bacteriilor )$*! "$r"a )eCla"i'carea bacteriilor )$*! "$r"a )ecarbocarbo

FacteriiFacterii a$totroea$totroe – utilizează <– utilizează <%% cacaunică sursă de carbon (nepatogeneunică sursă de carbon (nepatogeneFacteriiFacterii 0eterotroe0eterotroe – utilizează– utilizează

carbonul din compuşii organici (glucide,carbonul din compuşii organici (glucide,

acizi graşi, alcooli, etcacizi graşi, alcooli, etc- Facteriile care utilizează materiaFacteriile care utilizează materiaorganică moorganică moaartărtă suntsunt saprotesaprote (reciclarea materiei organice(reciclarea materiei organice

-FacteriiFacteriilele parazite parazite (obligate, $acultative(obligate, $acultative trăiesc pe contul organismelor vii,trăiesc pe contul organismelor vii,aduc'ndu-le prejudiciiaduc'ndu-le prejudicii

- FacteriileFacteriile patogen patogenee reprezintreprezintă parazită parazitee care a$ectează grav gazda, provoc'ndcare a$ectează grav gazda, provoc'nd

maladie sau moartemaladie sau moarte..



S$r"e )e azotS$r"e )e azot

- // sau acizi nucleici// sau acizi nucleici- ăruri de amoniu, nitriţi, azotăruri de amoniu, nitriţi, azot

atmos$ericatmos$eric

S$r"e )e "$b"ta&e #ieraleS$r"e )e "$b"ta&e #ierale!!- - din //, sul$uri, sul$aţi@ - din //, sul$uri, sul$aţi@

- * - din $os$aţi* - din $os$aţi@@- C, ;g, a, 6a - din săruri minerale@C, ;g, a, 6a - din săruri minerale@- En, u, ;n, ;o – din apăEn, u, ;n, ;o – din apă



Cla"i'carea bacteriilor )$*! "$r"a )eCla"i'carea bacteriilor )$*! "$r"a )eeergieeergie

FacteriiFacterii ototroeototroe – utilizează energia– utilizează energiasolară ($otosintsolară ($otosint

FacteriiFacterii c0e#otroec0e#otroe – $olosesc energia– $olosesc energiadegajată din reacţiile chimice de oxido-degajată din reacţiile chimice de oxido-reducere. #le necesită un substratreducere. #le necesită un substrat donor donor dedehidrogenhidrogen (e(e-- şi 4şi 4GG şi un substrat şi un substrat acceptor acceptor de hidrogende hidrogen. n trans$er participă. n trans$er participătransportori intermediari de electroni (lanţultransportori intermediari de electroni (lanţul

respirator, 6/:, 6/:respirator, 6/:, 6/:44, D/:, etc., D/:, etc.- FacteriileFacteriile chemolitotrofechemolitotrofe – donorul de 4– donorul de 4este o substanţă anorganicăeste o substanţă anorganică

- FacteriileFacteriile chemoorganotrofechemoorganotrofe – donorul de 4– donorul de 4

este o substanţă organică (glucoza,este o substanţă organică (glucoza,li ide...li ide...



Mecai"#ele )e ob&iere a eergieiMecai"#ele )e ob&iere a eergiei la c0e#oorgaotroela c0e#oorgaotroe în $uncţie de în $uncţie de

acceptorul +nal de 4 !acceptorul +nal de 4 ! Re"*ira&ie aerob!Re"*ira&ie aerob!. /cceptorul +nal. /cceptorul +nal

este oxigenul gazoseste oxigenul gazos !agent oxidant!agent oxidant

externextern. Hmplică lanţul respirator de. Hmplică lanţul respirator detransport al electronilor asociat ;*.transport al electronilor asociat ;*.*rodus +nal – 4*rodus +nal – 4%%< sau 4< sau 4%%<<%% ..

Re"*ira&ie aaerob!Re"*ira&ie aaerob!. /cceptori +nali. /cceptori +nali– compuşi anorganici (nitrat, sul$at– compuşi anorganici (nitrat, sul$at, , ..

?ransportul de electroni prin lanţul ?ransportul de electroni prin lanţulrespirator. *roduse +nale – nitritul,respirator. *roduse +nale – nitritul,

amoniacul, sul$uraamoniacul, sul$ura (( î î n prezenn prezenţţa <a <22 ––



Fer#eta&ieFer#eta&ie. ubstratul organic este. ubstratul organic este

metabolizat $ără intervenţia unuimetabolizat $ără intervenţia unuiagent oxidant extern. onstă înagent oxidant extern. onstă înprocese de ox-red care realizeazăprocese de ox-red care realizeazănumai o oxidare parţială anumai o oxidare parţială a

substratului, donorul şi acceptorul desubstratului, donorul şi acceptorul de44GG +ind substanţe organice. /st$el se+ind substanţe organice. /st$el seajunge de la un substrat mai redus laajunge de la un substrat mai redus la

o moleculă mai oxidată (ex.!o moleculă mai oxidată (ex.!$ermentare lactică, $ermentare$ermentare lactică, $ermentarealcoolică, acidă mixtă, acetoinică,alcoolică, acidă mixtă, acetoinică,etc. Dermentaţia se poate des$ăşuraetc. Dermentaţia se poate des$ăşura

în prezenţa < în prezenţa <%%, dar $ără intervenţia, dar $ără intervenţia



Co"er(area eergieiCo"er(area eergiei < parte din energia eliberată se pierde< parte din energia eliberată se pierde

sub $ormă de căldură sau poate +sub $ormă de căldură sau poate +utilizată direct sub $ormă de energieutilizată direct sub $ormă de energieelectro-chimică ($pmelectro-chimică ($pm-$orta proton-$orta protonmotricemotrice la nivelul ;* (ex.! rotaţia la nivelul ;* (ex.! rotaţia&agelilor, transport transmembranar&agelilor, transport transmembranar

sausau "tocat!"tocat! în compuşi chimici în compuşi chimicimacroergici Ibogaţi în energieJ!macroergici Ibogaţi în energieJ! AT%AT% ((sintetizat prin $os$orilare oxidativă sausintetizat prin $os$orilare oxidativă sau$os$orilare la substrat$os$orilare la substrat,, o"oeol1o"oeol1

*ir$(at+ acetilo"at 2i acetil1CoA.*ir$(at+ acetilo"at 2i acetil1CoA.

n procesele de respiraţie se elimină main procesele de respiraţie se elimină maimultă energie dec't din $ermentaţiemultă energie dec't din $ermentaţie (( în înglicoliză dintr-unglicoliză dintr-un molmol dede glucozglucozăă - K mol- K molii /?*/?*, prin $ermentaţie -, prin $ermentaţie - %% molimoli /?*/?*. n. n

procese de $ermentare se $ormeazăprocese de $ermentare se $ormeazădeşeuri rejetate de către celulă.deşeuri rejetate de către celulă.



Clasificarea bacteriilor dupăClasificarea bacteriilor după

sursele de energie şi carbonsursele de energie şi carbonI.I. Bacterii fotoautotrofe (energie solară,Bacterii fotoautotrofe (energie solară,

COCO22))

II.II. Bacterii fotoheterotrofe (en. sol.,Bacterii fotoheterotrofe (en. sol.,subst.org)subst.org)

III.III. Bacterii chemoautotrofeBacterii chemoautotrofe

IV.IV. Bacterii chemoheterotrofeBacterii chemoheterotrofe(chemolitoheterotrofe,(chemolitoheterotrofe,cheoorganoheterotrofecheoorganoheterotrofe))



CRE3TEREA 3I MULTI%LICAREACRE3TEREA 3I MULTI%LICAREABACTERIILORBACTERIILOR

CreştereaCreşterea – mărirea coordonată a masei şi – mărirea coordonată a masei şiolumului structurilor bacteriene ca re!ultat alolumului structurilor bacteriene ca re!ultat al"roceselor de sinte!ă"roceselor de sinte!ă

!ultiplicarea!ultiplicarea – creşterea numărului de celule "e – creşterea numărului de celule "eo unitate de su"rafa#ă sau de olumo unitate de su"rafa#ă sau de olum

$ %ii!i%ii!iuune binarăne binară$ &nmugurire (leuri, ciu"erci leuriforme) &nmugurire (leuri, ciu"erci leuriforme)

$ 'utore"roducere (irusuri) 'utore"roducere (irusuri)$ "ori (micete)"ori (micete)$ ragmentare (actinomicete)ragmentare (actinomicete)



Ciclul celular Ciclul celular – "rocesele care au loc – "rocesele care au loc dede

la formareala formarea celulcelulei "ei "**na la urmna la urmăătoareatoarea dii!iundii!iunee

+.+. a!a C – re"licarea '%a!a C – re"licarea '%

2.2. a!a - – de laten#ă, segregareaa!a - – de laten#ă, segregareacromo!omilor cromo!omilor

.. a!a % – de dii!iune, formarea se"tuluia!a % – de dii!iune, formarea se"tului

/e"licarea '% de"inde de masa critică a/e"licarea '% de"inde de masa critică a

celulei, iar se"ararea cromo!omilor şicelulei, iar se"ararea cromo!omilor şidii!iunea interin 0n momentul c*nddii!iunea interin 0n momentul c*ndcelula atinge o lungime $ limităcelula atinge o lungime $ limită



1erioada dintre 2 dii!iuni re"re!intă1erioada dintre 2 dii!iuni re"re!intă timpultimpul

(perioada) de generaţie(perioada) de generaţie ((--))..

%urata %urata -- de"inde de s"ecie şi de condi#iile dede"inde de s"ecie şi de condi#iile decreştere (condi#ii o"time – ite!ă ma3imă)creştere (condi#ii o"time – ite!ă ma3imă)

Bacteria TG in vitro (min) T

G in vivo (ore)

Escherichia coli 20-40 5

Staphylococcus aureus 40 3-5

Vibrio cholerae 10 2-3

Mycobacterium tuberculosis 120-240 24-48



CU"TI#AREA BACTERII"$RCU"TI#AREA BACTERII"$R

Creşterea bacteriilor 0n laborator –Creşterea bacteriilor 0n laborator – culti%areculti%are..e cultiă bacteriile "entru i!olarea lor dine cultiă bacteriile "entru i!olarea lor dinmedii naturale ("releate "atologice,medii naturale ("releate "atologice,alimente, a"ă, etc).alimente, a"ă, etc).

I!olarea bacteriilor se reali!ea!ă "entru4I!olarea bacteriilor se reali!ea!ă "entru4+.+. Identificarea mi5o (sco" de diagnostic)Identificarea mi5o (sco" de diagnostic)2.2. estaestar r ea sensibilită#ii lor fa#ă de antibioticeea sensibilită#ii lor fa#ă de antibiotice

.. Ob#inerea unor "roduşi de biosinte!ăOb#inerea unor "roduşi de biosinte!ă(antibiotice, ''), bioconersie (hormoni(antibiotice, ''), bioconersie (hormonisteroi!i), fermentare (alcooli, aci!i organici,steroi!i), fermentare (alcooli, aci!i organici,etc), "roducerea accinurilor,etc), "roducerea accinurilor, eueubioticelor...bioticelor...



1entru creştere bacteriile au neoie de1entru creştere bacteriile au neoie denutrien#i şi condi#ii fi!ico$chimice adecate.nutrien#i şi condi#ii fi!ico$chimice adecate.

Condi&iile 'principiile(Condi&iile 'principiile( dede culti%areculti%are$ ursă nutritiă adecatăursă nutritiă adecată$ ursă de energieursă de energie

$ '"ă '"ă$ em"eratura "otriităem"eratura "otriită$ "6 adecat"6 adecat

$ Concentra#ie o"timă a o3igenului şi aConcentra#ie o"timă a o3igenului şi a COCO22 $ 1resiune osmotică adecată1resiune osmotică adecată



Teperatura de creştereTeperatura de creştere

73istă tem"eraturi minime, ma3ime şi o"time73istă tem"eraturi minime, ma3ime şi o"timede de!oltare a bacteriilor. &n ra"ort cude de!oltare a bacteriilor. &n ra"ort cutem"eratura o"timă deosebim4tem"eratura o"timă deosebim4

+.+. BacteriiBacterii "sichrofile"sichrofile – t – t88 o"timă +9$29o"timă +9$2988 C.C.

Cresc şi la 9Cresc şi la 988 C.C.2.2. BacteriiBacterii me!ofileme!ofile – o"timum – o"timum 9$:9$:88 CC

(limite +;$<;(limite +;$<;88 C)C)

.. BacteriiBacterii termofiletermofile – o"timum ;9$=9 – o"timum ;9$=988 CC("*nă la >;("*nă la >;88 C)C)<.<. BacteriiBacterii hi"ertermofilehi"ertermofile (cresc la :9–++9(cresc la :9–++988 C)C)



p)p)+.+. BacteriiBacterii neutrofileneutrofile (ma?oritatea, inclusi cele(ma?oritatea, inclusi cele

"atogene) –"atogene) – "6 =$:,;"6 =$:,;2.2. BacteriiBacterii acidofileacidofile – "6 2$= – "6 2$= (@actobacillus)(@actobacillus).. BacteriiBacterii alcalofile – "6alcalofile – "6 AA (1seudomonas,(1seudomonas,

Vibrio)Vibrio) *resiunea osotică*resiunea osotică+.+. BacteriiBacterii halotolerantehalotolerante (osmotolerante) – cresc(osmotolerante) – cresc

0n concentra#ii reduse de aCl (mediu i!otonic 0n concentra#ii reduse de aCl (mediu i!otoniccu mediul intern al ga!dei) – mi5o "atogenecu mediul intern al ga!dei) – mi5o "atogene

2.2. BacteriiBacterii halofilehalofile – "referă concentra#ii mari de – "referă concentra#ii mari deaCl (+$9) – stafilococi, ibrioni (aCl (+$9) – stafilococi, ibrioni (V V ibrioibrio parahaemolyticus parahaemolyticus))



$+igenul$+igenul+.+. BacteriiBacterii strict aerobestrict aerobe – cresc doar 0n "re!en#a O – cresc doar 0n "re!en#a O22

molecular. Ob#in energia "rin res"ira#ie aerobămolecular. Ob#in energia "rin res"ira#ie aerobă

2.2. BacteriiBacterii microaerofilemicroaerofile – necesită concentra#ii reduse – necesită concentra#ii redusede Ode O22 şi 2$+9 şi 2$+9 COCO22. Ob#in energia "rin res"ira#ie. Ob#in energia "rin res"ira#iesau fermenta#ie (eisseria, Brucella,sau fermenta#ie (eisseria, Brucella,Cam"Dlobacter Cam"Dlobacter ))

.. BacteriiBacterii strict anaerobestrict anaerobe – cresc doar 0n absen#a O – cresc doar 0n absen#a O22..Ob#in energia "rin fermenta#ie sau uneori res"ira#ieOb#in energia "rin fermenta#ie sau uneori res"ira#ieanaerobă. o3icitatea Oanaerobă. o3icitatea O22 – formarea 6 – formarea 622OO22,,,, aaradicalilor su"ero3i!i Oradicalilor su"ero3i!i O22

$$, sau "ero3i!i O, sau "ero3i!i O222$2$ "e care"e care

anaerobii nu le "ot descom"une (absen#a catala!ei,anaerobii nu le "ot descom"une (absen#a catala!ei,su"ero3id dismuta!ei, "ero3ida!ei) – Clostridium,su"ero3id dismuta!ei, "ero3ida!ei) – Clostridium,BacteroidesBacteroides

<.<. BacteriiBacterii anaerobe aerotoleranteanaerobe aerotolerante – "ot creşte 0n – "ot creşte 0n"re!en#a O"re!en#a O22, ob#in energia "rin fermenta#ie, "osedă, ob#in energia "rin fermenta#ie, "osedă"ero3ida!ă (@actobacillus, stre"tococi)"ero3ida!ă (@actobacillus, stre"tococi)

;.;. BacteriiBacterii facultativ anaerobefacultativ anaerobe – cresc 0n orice condi#ii, – cresc 0n orice condi#ii,ob in ener ia rin res ira ie sau fermenta ieob in energia "rin res"ira ie sau fermenta ie



!ediile de cultură!ediile de cultură – solu#ii sau substrate solide – solu#ii sau substrate solidecare asigură nutrien#ii şi condi#iile fi!ico$chimicecare asigură nutrien#ii şi condi#iile fi!ico$chimicenecesare cultiării bacteriilor. 7le "ot fi utili!atenecesare cultiării bacteriilor. 7le "ot fi utili!ate"entru c"entru cultiaultiarearea (i!olarea)(i!olarea) bacteriilor, testareabacteriilor, testareasensibilită#ii la antibiotice, stocarea sau trans"ortulsensibilită#ii la antibiotice, stocarea sau trans"ortulculturilor bacculturilor bacteteriene.riene.

Cerin&ele fa&ă de ediile de culturăCerin&ele fa&ă de ediile de cultură

$ ă asigure necesită#ile nutritie şi energeticeă asigure necesită#ile nutritie şi energetice alealebacteriilor bacteriilor $ Emiditate o"timalăEmiditate o"timală$ "6 o"timal (:,2$:,<) şi constant (caracter de"6 o"timal (:,2$:,<) şi constant (caracter de

tam"on)tam"on)$ 1oten#ial de o3ido$reducere o"timal (anaerobi $1oten#ial de o3ido$reducere o"timal (anaerobi $

r6r622FF;, aerobi – r6;, aerobi – r622AA+9)+9)$ ă fie i!otonice (9,; aCl)ă fie i!otonice (9,; aCl)$ ă fie sterile şi trans"arenteă fie sterile şi trans"arente



C"A,I-ICAREA !E.II"$R .E CU"TURĂC"A,I-ICAREA !E.II"$R .E CU"TURĂ

.upă pro%enien&ă.upă pro%enien&ă 1.1. Empirice, naturaleEmpirice, naturale. 'u la ba!ă "roduse de. 'u la ba!ă "roduse de

origine animală sau egetală (s*nge, ser,origine animală sau egetală (s*nge, ser,la"te, ouă, cartof, e3tracte din carne, cord,la"te, ouă, cartof, e3tracte din carne, cord,

creier, ficat, "eşte, leuri, etc)creier, ficat, "eşte, leuri, etc). C. Com"o!i#iaom"o!i#ialorlor chimică "recisă nu "oate fi controlatăchimică "recisă nu "oate fi controlată

2.2. SinteticeSintetice – includ ingrediente chimic – includ ingrediente chimicee "ure,"ure,com"o!i#ia chimică este cunoscută cucom"o!i#ia chimică este cunoscută cue3actitatee3actitate

.. SemisinteticeSemisintetice



.upă consisten&ă.upă consisten&ă1.1. !edii lichide!edii lichide (bulion)– utili!ate "entru(bulion)– utili!ate "entru

ob&inerea bioasei bacterieneob&inerea bioasei bacteriene şi aşi a"roduselor lor (antibiotice, en!ime, to3ine)"roduselor lor (antibiotice, en!ime, to3ine)

2.2. !edii solide!edii solide – con#in +9$+; gelatină sau 2$ – con#in +9$+; gelatină sau 2$agar$agar ("oli!aharid e3tras din alge roşii,agar$agar ("oli!aharid e3tras din alge roşii,

ttGG to"ire 9$+99to"ire 9$+99GGC, solidificare <2C, solidificare <2GGCC))..1laca de gelo!ă 0n cutii 1etri1laca de gelo!ă 0n cutii 1etri este utili!ateste utili!atăă"entru"entru i/olarea culturilor purei/olarea culturilor pure, gelo!a, gelo!a 0nclinată (0n "antă) – "entru 0nclinată (0n "antă) – "entru acuulareaacuularea

culturilor pureculturilor pure.. !edii semisolide!edii semisolide – 9,2 – 9,; agar$agar. e – 9,2 – 9,; agar$agar. eutili!ea!ă "entruutili!ea!ă "entru studierea acti%ită&iistudierea acti%ită&iibiochiice sau a obilită&ii bacteriilor0biochiice sau a obilită&ii bacteriilor0



.upă copo/i&ia chiică.upă copo/i&ia chiică (com"le3itate)(com"le3itate) şişidestina&iedestina&ie

A0 !edii u/uale 'uni%ersale1 siple(A0 !edii u/uale 'uni%ersale1 siple(1.1. "p# peptonat# "p# peptonat# (a"ă(a"ă HH + "e"tonă+ "e"tonă HH 9,;9,;

aCl)aCl)

2.2. $ulion peptonat $ulion peptonat – B1 – B1 (e3tract a"os din carne(e3tract a"os din carneH + "e"tonăH + "e"tonă HH 9,; aCl)9,; aCl)

.. %elo&a%elo&a nutritiv#nutritiv# (B1 H 2$ agar$agar)(B1 H 2$ agar$agar)

'.'. %elatina nutritiv#%elatina nutritiv# (B1 H +9$+; gelatină)(B1 H +9$+; gelatină)

unt utili!ate "entru creşterea bacteriilorunt utili!ate "entru creşterea bacteriilorne"reten#ioase la cultiarene"reten#ioase la cultiare

terili!area "rin autoclaare4 +29terili!area "rin autoclaare4 +29GGC, 29 minC, 29 min



B0B0 !edii cople+e!edii cople+e

I.I. Medii electiveMedii elective – formate din medii sim"le cu – formate din medii sim"le cuadaos de com"onente care "ermit creştereaadaos de com"onente care "ermit creşterea mi5omi5oe3igente nutriti (e3igente nutriti (bulion$ser, bulion gluco!at, gelo!ă$bulion$ser, bulion gluco!at, gelo!ă$s*nges*nge – – streptococi,streptococi, neisserii neisserii ser coagulatser coagulat – –corinebacterii corinebacterii , etc), etc)

II. Medii selectiveII. Medii selective – medii solide cu adaos de – medii solide cu adaos decom"onente sau cu condi#ii fi!ico$chimice "articularecom"onente sau cu condi#ii fi!ico$chimice "articularecare stimulea!ă creşterea unor s"ecii şi inhibăcare stimulea!ă creşterea unor s"ecii şi inhibăcreşterea altor s"ecii (creşterea altor s"ecii (gelo!a salinăgelo!a salină $$ stafilococi stafilococi ,,gelo!a alcalinăgelo!a alcalină $$ vibrioni vibrioni , mediul, mediul 1losJire1losJire $$Salmonella, Shigella, etc)Salmonella, Shigella, etc)



!ediile de mbog#ţire!ediile de mbog#ţire re"re!intă medii selectiere"re!intă medii selectielichide, utili!ate "entru 0mbogă#irea floreilichide, utili!ate "entru 0mbogă#irea florei

"atogene şi inhibarea florei de asocia#ie dintr$"atogene şi inhibarea florei de asocia#ie dintr$un "releat "lurimicrobian (e34 materii fecale)un "releat "lurimicrobian (e34 materii fecale)..7ta"7ta"ă "remergătoare 0nsăm*n#ării "e mediiă "remergătoare 0nsăm*n#ării "e mediiselectie.selectie.

$ Kediul Kuller Kediul Kuller

(B1H@ugolHCaCO(B1H@ugolHCaCO

Hhi"osulfit ) –Hhi"osulfit ) –

"entru"entru SalmonellaSalmonella

$ Kediul LauffmannKediul Lauffmann ((mediulmediul KullerHbilăHerdeKullerHbilăHerdede briliant) –de briliant) – SalmonellaSalmonella

$ Bulion cu selenitBulion cu selenit – – Shigella, SalmonellaShigella, Salmonella$ '"ă "e"tonată alcalină '"ă "e"tonată alcalină ("6("6MM)) – –Vibrio choleraeVibrio cholerae

$ Litt$ar Litt$ar r r o!!io!!i (B1H9,; gluco!ăHbucă#i de ficat)(B1H9,; gluco!ăHbucă#i de ficat) – "entru – "entru anaerobi anaerobi



III. Medii diferenţial-diagnostice (DD)III. Medii diferenţial-diagnostice (DD) – "ermit – "ermitdiferen#ierea s"eciilor bacteriene 0n ba!a actiită#iidiferen#ierea s"eciilor bacteriene 0n ba!a actiită#iilor biochimice (!aharolitice, "roteolitice, li"olitice,lor biochimice (!aharolitice, "roteolitice, li"olitice,de o3ido$reducerede o3ido$reducereNN))unt construite du"ă următoarea schemă4unt construite du"ă următoarea schemă4Ba!ă nutritiăHsubstratHindicator (la necesitate)Ba!ă nutritiăHsubstratHindicator (la necesitate)

!edii .. pentru i/olarea culturii pure!edii .. pentru i/olarea culturii puretudierea "ro"rietă#ilortudierea "ro"rietă#ilor !aharolitice!aharolitice7ndo7ndo (gelo!ăHlacto!ăHfucsinăHhi"osulfit(gelo!ăHlacto!ăHfucsinăHhi"osulfit de ade a))@ein@einee (gelo!ăHlacto!ăHeo!inăHalbastru metilen)(gelo!ăHlacto!ăHeo!inăHalbastru metilen)

1losJire1losJire 5 agar 5 agar (gelo!ăHlacto!ăHroşu(gelo!ăHlacto!ăHroşuneutruHsăruri de aci!i biliariHerde de briliant)neutruHsăruri de aci!i biliariHerde de briliant)ColoniileColoniile lacto!o$"o!itielacto!o$"o!itie or fior fi coloratecolorate ((roroii ii "e"e7ndo, 1losJire,7ndo, 1losJire, albastru*violetealbastru*violete "e"e @ein@ein)) – – mediimedii

cromogenecromogene



tudierea "ro"rietă#ilor de o3ido$reduceretudierea "ro"rietă#ilor de o3ido$reducere

Kediul cu sulfit de BiKediul cu sulfit de Bi

– "entru almonella – "entru almonella

(c(colonii negreolonii negre – reducerea – reducerea sulfituluisulfitului 0 0 n sulfuran sulfurade Bi)de Bi)



Kediul LlaubergKediul Llauberg (gelo!ă$s*nge cu telurit de(gelo!ă$s*nge cu telurit deL) –"entruL) –"entru +orynebacterium diphtheriae+orynebacterium diphtheriae

(colonii negre)(colonii negre)tudierea "ro"rietă#ilor li"oliticetudier ea "ro"rietă#ilor li"olitice

-elo!a cu gălbenuş de ou-elo!a cu gălbenuş de ou – bacteriile cu – bacteriile cu

lecitina!ă formea!ă un halou o"ac 0n ?urullecitina!ă formea!ă un halou o"ac 0n ?urulcolonieicoloniei



tudierea "ro"rietă#ilor hemoliticetudier ea "ro"rietă#ilor hemolitice

-elo!a$s*nge-elo!a$s*nge (gelo!aH;$+; s*nge(gelo!aH;$+; s*nge

defibrinat)defibrinat) &n ca!ul hemoli!ei 0n ?urul coloniilor a"are o &n ca!ul hemoli!ei 0n ?urul coloniilor a"are o!onă clară!onă clară



!edii .. ultitest pentru acuularea culturii pure!edii .. ultitest pentru acuularea culturii pure

şi identificare preliinarăşi identificare preliinară/ussel/ussel –gelo!ăH+ lacto!ă, 9,+ gluco!ă, indicator –gelo!ăH+ lacto!ă, 9,+ gluco!ă, indicator Lligler Lligler – identic /usselHsulfat de e (detectarea 6 – identic /usselHsulfat de e (detectarea 622))

OlJeni#JiOlJeni#Ji – identic LliglerH+ !aharo!ăHuree – identic LliglerH+ !aharo!ăHuree

Indicatorul 'ndrede – fucsinăHaO6Indicatorul 'ndrede – fucsinăHaO6Scindarea glucidelor Scindarea glucidelor ((acid $ 'acid $ ',, acidacid şişi ga!ga! $$ '-) duce la '-) duce lamodificarea "6 şi ira?ul culorii mediului din roşu 0nmodificarea "6 şi ira?ul culorii mediului din roşu 0ngalben.galben.

&n "antă &n "antă se a"recia!se a"recia!ă lacto!a5!aharo!ă lacto!a5!aharo!aa (o3idare), 0n(o3idare), 0ncoloană$gluco!a (fermentare).coloană$gluco!a (fermentare).roducerea - roducerea - 2 2 SS – 0n – 0nnnegrirea mediuluiegrirea mediului



!edii .. pentru identificarea!edii .. pentru identificarea finalfinalăă

aa culturii pureculturii pure$$ irul "estri# 6issirul "estri# 6iss (lichid sau semi$solid)– un şir(lichid sau semi$solid)– un şir

de tuburi ce con#in solu#ii 9,; de diferitede tuburi ce con#in solu#ii 9,; de diferiteglucide şi indicator.glucide şi indicator.

'"recierea – du"ă modificarea culorii (acid $ ') '"recierea – du"ă modificarea culorii (acid $ ')şi a"ari#ia bulelor de ga! (acid şi ga! $ '-)şi a"ari#ia bulelor de ga! (acid şi ga! $ '-)$ Kedii cu '' (li!ină, arginină, ornitină) şiKedii cu '' (li!ină, arginină, ornitină) şi

indicatoriindicatori

IV. Medii specialeIV. Medii speciale – "entru i!olarea unor – "entru i!olarea unoranumite bacterii (anumite bacterii (inn, 1o"escu,inn, 1o"escu,@o@oeePenstein$QensenPenstein$Qensen – – pentru agenţii pentru agenţiituberculo&ei tuberculo&ei ,, abouraudabouraud – – fungi fungi ))



V. Medii de transport V. Medii de transport – destinate trans"ortării sau – destinate trans"ortării saustocării unui material ("releat), care a fistocării unui material ("releat), care a fi

e3aminat ulterior.e3aminat ulterior.Ken#ine 0n ia#ă bacteriile, f Ken#ine 0n ia#ă bacteriile, f ăăr r ăă a faori!aa faori!a

multi"licarea lor.multi"licarea lor.$ Kediul cu glicerinăKediul cu glicerină 99$ olu#ie tam"on$fosfatolu#ie tam"on$fosfat$ olu#ie aCl olu#ie aCl $ Kediul CarD$Blair Kediul CarD$Blair

$ Kediul tuartKediul tuart (aCl, 9,; agar, tioglicolat de(aCl, 9,; agar, tioglicolat dea, albastru de metilen) – "entru anaerobi,a, albastru de metilen) – "entru anaerobi,neisserii, etcneisserii, etc



1entru1entru culti%areaculti%area bacteriilor o cantitate micăbacteriilor o cantitate mică

de material ce con#ine bacterii (de material ce con#ine bacterii ( inoculuinoculu) se) se 0ntroduce 0ntr$un mediu de cultură 0ntroduce 0ntr$un mediu de cultură(( 2nsă3n&are1 inoculare 2nsă3n&are1 inoculare), care ulterior a fi), care ulterior a fiincubatincubat 0n termostat ("entru asigurarea 0n termostat ("entru asigurarea

tem"eraturii o"time).tem"eraturii o"time). &n tim"ul incubării (+$2<$< ore &n tim"ul incubării (+$2<$< oreN..N..) bacteriile) bacteriile

cresc şi se diid, form*nd ocresc şi se diid, form*nd o culturăculturăbacterianăbacteriană (totalitatea bacteriilor acumulate(totalitatea bacteriilor acumulate

prin multiplicare intr*un mediu) prin multiplicare intr*un mediu)..!.tuberculosis!.tuberculosis – $; să"tăm*ni – $; să"tăm*ni

V.choleraeV.cholerae – =$+2 ore – =$+2 ore



Cultură purăCultură pură – formată din bacterii de – formată din bacterii deaceeaşi s"ecie (indis"ensabilă identificării)aceeaşi s"ecie (indis"ensabilă identificării)Cultură i+tăCultură i+tă – com"usă din bacterii de – com"usă din bacterii de

s"ecii diferites"ecii diferiteTulpinăTulpină – "o"ula#ie microbiană constituită – "o"ula#ie microbiană constituită

din descenden#ii unei singure i!olări 0ndin descenden#ii unei singure i!olări 0ncultură "ură, care a fi studiată ulterior.cultură "ură, care a fi studiată ulterior.

ClonăClonă – "o"ula#ie care re!ultă din – "o"ula#ie care re!ultă dinmulti"licarea unei singure celulemulti"licarea unei singure celule



!anifestarea creşterii şi ultiplicării!anifestarea creşterii şi ultiplicăriibacteriilor bacteriilor

4n 4n ediu lichidediu lichid$$ urbiditate uniform#urbiditate uniform#

$$ /ormarea unei pelicule/ormarea unei pelicule la su"rafa#ala su"rafa#amediului (ibrioni, Dersinia)mediului (ibrioni, Dersinia)

$ /ormarea unui sediment /ormarea unui sediment la fundul tubului sau "e "ere#ila fundul tubului sau "e "ere#i

(stre"tococi,(stre"tococi, $acillus anthracis$acillus anthracis))



4n ediu solid 4n ediu solid – formarea – formarea coloniilor coloniilor ColonieColonie – o aglomerare de bacterii care – o aglomerare de bacterii carese de!oltă dintr$o singură celulă sause de!oltă dintr$o singură celulă sauun gru" de celule (ECun gru" de celule (EC $$ UUnitatenitate

--ormatoare deormatoare de CColoniiolonii) "e su"rafa#a) "e su"rafa#aunui mediu solidunui mediu solidiecare s"ecie bacteriană formea!ăiecare s"ecie bacteriană formea!ă

colonii s"ecifice (caracter util 0ncolonii s"ecifice (caracter util 0nidentificare)identificare)



Caracteristica coloniilor Caracteristica coloniilor

%imensiuni%imensiuni – colonii mici (9,+$+mm), medii (+$ – colonii mici (9,+$+mm), medii (+$2mm), mari (2$mm)2mm), mari (2$mm)Contur Contur (margini) –(margini) – regulat5regulat5neted, ondulat, !im#at,neted, ondulat, !im#at,

lobat,lobat, dantelat,dantelat, etcetc

u"rafa#ău"rafa#ă – "lată, bombată, cone3ă, ombilicată, – "lată, bombată, cone3ă, ombilicată,etcetcormăormă – circulară, filamentoasă, neregulată – circulară, filamentoasă, neregulatăCuloareCuloare ("igmenta#ie) – albă, galbenă, aurie, etc("igmenta#ie) – albă, galbenă, aurie, etc

%ensitate%ensitate – o"acă, trans"arentă, etc – o"acă, trans"arentă, etcConsisten#ăConsisten#ă – cremoasă, untoasă, uscată, – cremoasă, untoasă, uscată,mucoidămucoidă



Ti il d l iiTi il d l ii



Tipurile de coloniiTipurile de coloniiColonii Colonii (smouth) – rotunde, netede, umede,(smouth) – rotunde, netede, umede,

lucioaselucioaseColonii /Colonii / (rough) – margini neregulate, su"rafa#a(rough) – margini neregulate, su"rafa#a

uscată, rugoasăuscată, rugoasă

ColoniiColonii KK (mucoase) – mari, bombate, lucioase,(mucoase) – mari, bombate, lucioase,caracteristice bacteriilor ca"sulatecaracteristice bacteriilor ca"sulate



Caracterele de culturăCaracterele de cultură ale bacteriilorale bacteriilorre"re!intă e3igen#ele nutritie (medii,re"re!intă e3igen#ele nutritie (medii,tem"eratură, "6, aerare, etc),tem"eratură, "6, aerare, etc), tim"ultim"ul

a"aria"ari#iei culturii şi manifestarea creşterii#iei culturii şi manifestarea creşterii"e medii lichide şi solide"e medii lichide şi solide



.inaica ultiplicării bacteriilor 2n culturi.inaica ultiplicării bacteriilor 2n culturi

&n func#ie de modul de de!oltare a culturilor &n func#ie de modul de de!oltare a culturilorbacteriene se disting4bacteriene se disting4

$ Culturi discontinue5"eriodiceCulturi discontinue5"eriodice

$ Culturi continueCulturi continue$ Culturi sincroneCulturi sincrone

+ulturile discontinue+ulturile discontinue se ob#in la cultiarease ob#in la cultiareabacteriilor 0n olum limitat de mediu. 'stfel debacteriilor 0n olum limitat de mediu. 'stfel deculturi sunt ob#inute şi utili!ate 0n laboratorulculturi sunt ob#inute şi utili!ate 0n laboratorulmicrobiologicmicrobiologic



-a/ele de/%oltării unei culturi discontinue-a/ele de/%oltării unei culturi discontinue

I.I. a!a de laga!a de lag – fa!a de ada"tare la condi#iile – fa!a de ada"tare la condi#iilemediului, bacteriile sunt actie metabolic, cresc 0nmediului, bacteriile sunt actie metabolic, cresc 0ndimensiuni, dar nu se diid.dimensiuni, dar nu se diid.

%urata este ariabilă (2$< ore) de"inde de starea%urata este ariabilă (2$< ore) de"inde de starea

bacteriei, condi#iile mediului, etcbacteriei, condi#iile mediului, etcII.II. a!a logaritmicăa!a logaritmică – bacteriile cresc şi se diid cu – bacteriile cresc şi se diid cuite!ă ma3imală constantă, curba eoluea!ăite!ă ma3imală constantă, curba eoluea!ăe3"onen#ial. Bacteriile sunt foarte sensibile lae3"onen#ial. Bacteriile sunt foarte sensibile la

agen#i antimicrobieni (agen#i antimicrobieni (culturiculturi utile "entru testareautile "entru testareasensibilită#ii la antibiotice).sensibilită#ii la antibiotice).

%urata – $+9 ore%urata – $+9 ore



III. a!a sta#ionarăIII. a!a sta#ionară – rata celulelor care se multi"lică – rata celulelor care se multi"lică

scade tre"tat, numărul celulelor ii răm*ne constantscade tre"tat, numărul celulelor ii răm*ne constantmai multe ore.mai multe ore.

Cau!a – consumarea nutrien#ilor, acumulareaCau!a – consumarea nutrien#ilor, acumulareametaboli#ilor to3ici.metaboli#ilor to3ici.

Korfologia bacteriilor este ti"ică s"eciei, a"arKorfologia bacteriilor este ti"ică s"eciei, a"arinclu!iuni, s"ori (culturi utile "entru identificare).inclu!iuni, s"ori (culturi utile "entru identificare).ensibilitatea la agen#iensibilitatea la agen#iii antimicrobieni scade.antimicrobieni scade.

%urata – +9$+2 ore%urata – +9$+2 ore

IV. a!a de declinIV. a!a de declin (letalitate) – bacteriile mor(letalitate) – bacteriile mor"rogresi"rogresi



+ultur +ultur aa continu#continu# – se reali!ea!ă c*nd mediul – se reali!ea!ă c*nd mediul

de cultură este continuu re0nnoit şi 0mbogă#itde cultură este continuu re0nnoit şi 0mbogă#itcu o3igen cu eacuarea unei cantită#i decu o3igen cu eacuarea unei cantită#i decultură. e reali!ea!ă 0ncultură. e reali!ea!ă 0n chemostatechemostate sausau

turbidostateturbidostate, cultura afl*ndu$se "ermanent 0n, cultura afl*ndu$se "ermanent 0nfa!a e3"onen#ială. e utili!ea!ă 0nfa!a e3"onen#ială. e utili!ea!ă 0nmicrobiologia industrială.microbiologia industrială.

&n intestin – culturi continue. &n intestin – culturi continue.

+ulturi sincrone+ulturi sincrone – culturi 0n care bacteriile se – culturi 0n care bacteriile sediid 0n acelaşi tim"diid 0n acelaşi tim"



E5A!ENU" BACTERI$"$6ICE5A!ENU" BACTERI$"$6IC

EE+aen+aenulul bacteriologibacteriologicc constconstăă 0n 0n inocular inocular eaea (0nsăm*n#area)(0nsăm*n#area) "rele"releaattelor elor "e"e memediidii dedecultur cultur ăă "entru"entru i!olareai!olarea cultur cultur ilor ilor "ure"ure dede

bacterii (tul"ini)bacterii (tul"ini)

care or fi ulterior care or fi ulterior

identifiidentifi

catecate

,,

testtestateate la sensibilitatela sensibilitate is$a$is de antibiotiis$a$is de antibioticece,,eentueentuaal conserl conseratate.e.

773amen3amenulul bacteriologibacteriologicc constă din c*teaconstă din c*tea

eta"e succesieeta"e succesie,, de lade la "rele"relearea (recoltarea)area (recoltarea) "robelor "robelor biologibiologice "*nă lace "*nă la remiremitereaterea rere!!ultatultatelor elor ..



-a/a pre7analitică-a/a pre7analitică (res"onsabilitatea mediculuiRRR)(res"onsabilitatea mediculuiRRR) *rescrierea in%estiga&iei*rescrierea in%estiga&iei (0n func#ie de datele(0n func#ie de datelee3amenului clinic şi "araclinic). &n ordonan#ă see3amenului clinic şi "araclinic). &n ordonan#ă sefi3ea!ă identitatea medicului, a "acientului,fi3ea!ă identitatea medicului, a "acientului,

sco"ul anali!ei, manifestările "atologice, datasco"ul anali!ei, manifestările "atologice, dataa"ari#iei, alte date4 imunosu"resie,a"ari#iei, alte date4 imunosu"resie, tratament cutratament cuantibioticeantibiotice, graiditate, etc., graiditate, etc.

*rele%area probelor *rele%area probelor

$ 'legerea "releatului 'legerea "releatului (de la "oarta de intrare,(de la "oarta de intrare,locul multi"licării sau5şi din căile de eliminare alelocul multi"licării sau5şi din căile de eliminare aleagentului "atogen) şiagentului "atogen) şi momentul "releăriimomentul "releării



!ateriale de e+ainat 'prele%ate( de la pacien&i!ateriale de e+ainat 'prele%ate( de la pacien&i 44$ ecre#ii rino$faringiene, bronşiceecre#ii rino$faringiene, bronşice

$ "ută"ută$ 1uroi1uroi$ 73sudate, transsudate73sudate, transsudate

$ *nge*nge$ @C/@C/$ Erină, secre#ii genitaleErină, secre#ii genitale$ Kase fecale, bilă, suc duodenalKase fecale, bilă, suc duodenal$ Bio"tate, "unctateBio"tate, "unctate$ Katerial cadaKaterial cadaeer r icic, etc, etc



!ateriale de e+ainat din ediul e+tern!ateriale de e+ainat din ediul e+tern44$ '"ă '"ă$ 'limente 'limente

$ olol$ 'er 'er $ @aa?e@aa?e

$ Vectori, etcVectori, etc



$ Kodul de "releare (recoltare)$ Kodul de "releare (recoltare)$ &n reci"iente sterile &n reci"iente sterile

$ /es"ect*nd regulile de auto"rotec#ie/es"ect*nd regulile de auto"rotec#ie$ @a debutul bolii@a debutul bolii$ 1*nă la administrarea antibioticelor 1*nă la administrarea antibioticelor $ Cantitate suficientăCantitate suficientăTransportareaTransportarea$ Imediată sau utili!*nd medii de trans"ort, cuImediată sau utili!*nd medii de trans"ort, cu

res"ectres"ectarea condi#iilor s"eciale du"ă necesitatearea condi#iilor s"eciale du"ă necesitate$ &n ambala? s"ecial (cutii metalice, "ungi din "lastic...) &n ambala? s"ecial (cutii metalice, "ungi din "lastic...)$ &n fişa de 0nso#ire să fie indicată identitatea &n fişa de 0nso#ire să fie indicată identitatea

"acientului, *rsta, se3ul, natura "releatului, data,"acientului, *rsta, se3ul, natura "releatului, data,ora "releării, sco"ul inestiga#iei, ş.a.ora "releării, sco"ul inestiga#iei, ş.a.



E5A!ENU" BACTERI$"$6ICE5A!ENU" BACTERI$"$6IC *ENTRU*ENTRUCU"TURI"E AER$BECU"TURI"E AER$BE

$ 11relereleaattulul estestee susu"u"uss e0amene0amenului ului macroscopi macroscopi c c ( ( modificamodificarearea as"ectas"ectuluiului,, aamirosuluimirosului,, etc) $ orientare 0netc) $ orientare 0n diagnosticdiagnostic

$ %u"ă necesitate, "robele sunt su"use%u"ă necesitate, "robele sunt su"use"regătirii "entru inestiga#ie (diluare,"regătirii "entru inestiga#ie (diluare,omogeni!are, centrifugare, etc)omogeni!are, centrifugare, etc)

$ E0aminarea microscopic#E0aminarea microscopic# ("re"arate("re"aratenatie, -ram, Siehl$eelsen, @oeffler...) –natie, -ram, Siehl$eelsen, @oeffler...) –"re!en#a mi5o, forma, cantitatea, -H5$."re!en#a mi5o, forma, cantitatea, -H5$.



I etapă 8 I9$"AREA CU"TURI"$R *UREI etapă 8 I9$"AREA CU"TURI"$R *URE ,copul i/olării,copul i/olării $ de$ de a oba ob##iinene oo cultur cultur ăă "ur "ur ăă dintr$dintr$

unun melanmelan ? ? de celule bacterienede celule bacteriene sasauu dintr$dintr$unun"rodu"roduss "atologi"atologicc.. OO coloniecolonie se"aratăse"arată constituieconstituie oo cultur cultur ăă "ur "ur ăă..

TTehniehnici utili/ate:ci utili/ate:

+.+. 1rin e1rin e"ui"ui!area inoculului!area inoculului "e su"rafa#a gelo!ei"e su"rafa#a gelo!eidin cutia 1etridin cutia 1etri (( 0nsăm*n#are 0nsăm*n#are 0 0 n strin striuri "araleleuri "aralele,, 0 0 nsnsăămm**nn#are#are 0 0 nn ccadranadranee, etal, etalareaarea consecuticonsecutiăă "e"e tr tr eiei cutiicutii).).

2.2. Ketoda dilu#iilor logaritmice a inoculului 0nKetoda dilu#iilor logaritmice a inoculului 0ngelo!ă to"ită şi răcită la ;9gelo!ă to"ită şi răcită la ;988 C (+9C (+9$+$+, +9, +9$2$2,...),,...),a"oi turnate 0n cutii 1etri sau e"rubete.a"oi turnate 0n cutii 1etri sau e"rubete.

Incubare 0n termostat la :Incubare 0n termostat la :88 C, +$2< h (0n func#ieC, +$2< h (0n func#iede de --).).



!etode speciale de i/olare 2n culturi pure:!etode speciale de i/olare 2n culturi pure:$ ' bacteriilor s"orulate ' bacteriilor s"orulate4 0ncăl!irea "realabilă a4 0ncăl!irea "realabilă a

"releatului 9"releatului 988 C – 29 minC – 29 min$ ' bacteriilor acido$re!istente ' bacteriilor acido$re!istente4 tratarea "realabilă4 tratarea "realabilă

cu acid a "releatului şi neutrali!area ulterioarăcu acid a "releatului şi neutrali!area ulterioarăcu o ba!ăcu o ba!ă

$ ' mi5o "atogene din "releate "lurimicrobiene ' mi5o "atogene din "releate "lurimicrobiene44 0mbogă#irea "realabilă a florei "atogene utili!*nd 0mbogă#irea "realabilă a florei "atogene utili!*ndmedii de 0mbogă#iremedii de 0mbogă#ire

$ ' bacteriilor cu irulen#ă 0naltă şi "reten#ioase la ' bacteriilor cu irulen#ă 0naltă şi "reten#ioase lacultiarecultiare4 inocularea4 inocularea lala animalelanimalelee de laboratorde laboratorsensibilesensibile



II etapă 8 ACU!U"AREA CU"TURII *UREII etapă 8 ACU!U"AREA CU"TURII *URE$ 73aminarea macrosco"ică a coloniilor crescute73aminarea macrosco"ică a coloniilor crescute

(formă, culoare, dimensiuni, etc)(formă, culoare, dimensiuni, etc)

$ 73aminarea microsco"ică (frotiu -ram) a73aminarea microsco"ică (frotiu -ram) acoloniilor sus"ecte, confirmarea "urită#ii culturiicoloniilor sus"ecte, confirmarea "urită#ii culturii$ /e"icarea coloniilor sus"ecte "e gelo!ă 0n/e"icarea coloniilor sus"ecte "e gelo!ă 0n

"antă (0nclinată) "entru acumularea culturii"antă (0nclinată) "entru acumularea culturii

"ure"ure$ ermostat, :ermostat, :88 C, +$2< oreC, +$2< ore



III etapă 8 I.ENTI-ICAREA CU"TURII *UREIII etapă 8 I.ENTI-ICAREA CU"TURII *URE

$ Verificarea "urită#ii culturii (frotiu -ram)Verificarea "urită#ii culturii (frotiu -ram)$ IdentificareaIdentificarea culturii "ureculturii "ure constă 0n eiden#ierea unorconstă 0n eiden#ierea unorcaractere s"ecifice alecaractere s"ecifice ale acestei culturiacestei culturi "entru a o include 0ntr$o"entru a o include 0ntr$ofamilie, gen, s"ecie, ariantăfamilie, gen, s"ecie, ariantă

e studia!ă caracterele4e studia!ă caracterele4

$ KorfologiceKorfologice$ inctorialeinctoriale$ %e cultură%e cultură$ BiochimiceBiochimice$ 'ntigenice (seroidentificarea) 'ntigenice (seroidentificarea)$ %e "atogenitate%e "atogenitate$ ensibilitatea la bacteriofagi (fago$identificarea)ensibilitatea la bacteriofagi (fago$identificarea)$ ensibilitatea la antibioticeensibilitatea la antibiotice



,TU.IEREA ACTI#ITĂŢII,TU.IEREA ACTI#ITĂŢII

BI$C)I!ICE A BACTERII"$RBI$C)I!ICE A BACTERII"$R+.+. 'ctiitatea !aharolitică 'ctiitatea !aharolitică (şirul 6iss, coagularea(şirul 6iss, coagulareala"teluila"telui, etc, etc))

2.2. 'ctiitatea "roteolitică 'ctiitatea "roteolitică

$ %egradarea "roteinelor natie (lichefierea%egradarea "roteinelor natie (lichefiereagelatinei sau a serului coagulat, "e"toni!areagelatinei sau a serului coagulat, "e"toni!areala"teluila"telui, etc, etc))

$ 7iden#ierea en!imelor ce interin 0n7iden#ierea en!imelor ce interin 0n

degradarea '' (decarbo3ila!e, de!amina!e,degradarea '' (decarbo3ila!e, de!amina!e,desulfhidra!e, etc) cu detectarea "roduseledesulfhidra!e, etc) cu detectarea "roduselefinale ale descom"unerii ''4 6finale ale descom"unerii ''4 622, 6, 6, indol,, indol,etcetcNN



%e"istarea "roducerii%e"istarea "roducerii 662244 formarea sulfurii deformarea sulfurii de ee

de culoare neagră 0n mediile multitest – Lligler,de culoare neagră 0n mediile multitest – Lligler,OlJeni#Ji, etc utili!area ben!ilor de h*rtie de filtruOlJeni#Ji, etc utili!area ben!ilor de h*rtie de filtru 0mbibate cu 0mbibate cu acetat de 1bacetat de 1b care se "rind 0ntre do"ulcare se "rind 0ntre do"ule"rubetei cu B1 0n care creşte cultura studiatăe"rubetei cu B1 0n care creşte cultura studiată

(formarea sulfurii de 1b 0nnegreşte h*rtia)(formarea sulfurii de 1b 0nnegreşte h*rtia)%e"istarea%e"istarea indoluluiindolului ("rodus al hidroli!ei("rodus al hidroli!eitri"tofanului) – ben!i de h*rtie 0mbibate cutri"tofanului) – ben!i de h*rtie 0mbibate cu acidacido3alico3alic. &n "re!en#a indolului indicatorul irea!ă 0n. &n "re!en#a indolului indicatorul irea!ă 0n

ro!.ro!.%e"istarea%e"istarea amoniaculuiamoniacului (urea!a) – h*rtia de(urea!a) – h*rtia de turnesolturnesolse colorea!ă 0n albastru.se colorea!ă 0n albastru.



%e"istarea%e"istarea catala!eicatala!ei (6(622OO22 .... 6.... 622O H OO H O22))

(cultura se amestecă cu o "icătură de a"ă o3igenată –(cultura se amestecă cu o "icătură de a"ă o3igenată –

a"ari#ia bulelor de ga!)a"ari#ia bulelor de ga!)

%e"istarea%e"istarea o3ida!eio3ida!ei (detectarea "re!en#ei citocromo3ida!ei(detectarea "re!en#ei citocromo3ida!eidin lan#ul res"irator)din lan#ul res"irator)

/eacti –/eacti – di (tetra)metil*parafenilen*diamin#di (tetra)metil*parafenilen*diamin# (ben!i sau(ben!i saurondele de h*rtie 0mbibate cu reacti, creioane, etc)rondele de h*rtie 0mbibate cu reacti, creioane, etc)O3idarea reactiului – culoare ioletă$neagrăO3idarea reactiului – culoare ioletă$neagrăO3ida!oH 4 eisseria, Vibrio, 1seudomonasO3ida!oH 4 eisseria, Vibrio, 1seudomonas

O3ida!o$ 4 7nterobacteriaceaeO3ida!o$ 4 7nterobacteriaceae

%e"istarea%e"istarea lecitina!eilecitina!ei mediu cu gălbenuş de ou +9mediu cu gălbenuş de ou +9 $



%e"istarea%e"istarea lecitina!eilecitina!ei – mediu cu gălbenuş de ou +9 $ – mediu cu gălbenuş de ou +9 $formarea unui halou o"ac 0n ?urul coloniilor formarea unui halou o"ac 0n ?urul coloniilor

%e"istarea%e"istarea li"a!eili"a!ei – mediu cu Pin 9 +– halou o"ac 0n – mediu cu Pin 9 +– halou o"ac 0n ?urul coloniilor ("reci"itarea aci!ilor graşi) ?urul coloniilor ("reci"itarea aci!ilor graşi)

%e"istarea%e"istarea hemoli!ineihemoli!inei – gelo!ă$s*nge ;$+9 $ !onă clară 0n – gelo!ă$s*nge ;$+9 $ !onă clară 0n ?urul coloniei ?urul coloniei%e"istarea%e"istarea '%a!ei, fosfata!ei '%a!ei, fosfata!ei, etc, etc1robele sunt incubate la :1robele sunt incubate la :88 C, +$2< hC, +$2< h



Identificarea rapidăIdentificarea rapidăEtili!area galeriilor miniaturi!ate standardeEtili!area galeriilor miniaturi!ate standarde

(economie de tim", s"a#iu, material)(economie de tim", s"a#iu, material)

istemulistemul '1I '1I – o galerie din "lastic formată – o galerie din "lastic formatădin numeroase aleoledin numeroase aleole care con#in fiecarecare con#in fiecare

un mediu deshidratat diferit (glucide, '',un mediu deshidratat diferit (glucide, '',etc)etc).. 'leolele sunt inoculate cu o 'leolele sunt inoculate cu osus"ensie bacteriană testată şi incubatesus"ensie bacteriană testată şi incubate..

Elterior la necesitate se adaugă reactieElterior la necesitate se adaugă reactie"entru detectarea metaboli#ilor "articulari"entru detectarea metaboli#ilor "articulari..

@ectura –@ectura – "este <$+h"este <$+h conform unui cod deconform unui cod decifre sau com"uteri!atcifre sau com"uteri!at



I# etapă 8 E#A"UAREAI# etapă 8 E#A"UAREA

RE9U"TATE"$R1RE9U"TATE"$R1 -$R!U"AREA ,I-$R!U"AREA ,IE"IE"IBEBERAREA RĂ,*UN,U"UIRAREA RĂ,*UN,U"UI

$ Com"ararea re!ultatelor ob#inute cuCom"ararea re!ultatelor ob#inute cu

caracterele s"eciilor bacterienecaracterele s"eciilor bacterienecunoscute "entru a găsi asemănări.cunoscute "entru a găsi asemănări.$ 73em"lu de răs"uns473em"lu de răs"uns4 %in "roba%in "roba

e3aminată a fost i!olată tul"ina dee3aminată a fost i!olată tul"ina de+orynebacterium diphtheriae+orynebacterium diphtheriae, bioar, bioargravisgravis, to3H, sensibilă la ...., re!istentă, to3H, sensibilă la ...., re!istentăla .....la .....



E5A!ENU" BACTERI$"$6IC *ENTRUE5A!ENU" BACTERI$"$6IC *ENTRUCU"TURI ANAER$BECU"TURI ANAER$BE

(clostridiene, neclostridiene)(clostridiene, neclostridiene)Condi#ia "rinci"ală – cultiare 0n absen#aCondi#ia "rinci"ală – cultiare 0n absen#ao3igenuluio3igenului

+.+. Etili!area mediilor anaerobeEtili!area mediilor anaerobe (Litt$ar (Litt$ar r r o!!io!!iregeneratregenerat $ +99$ +9988 C, 29 min, răcit, aco"erit cuC, 29 min, răcit, aco"erit cu

a!elinăa!elină 0nsăm*n#area 0n gelo!ă 0n coloană) 0nsăm*n#area 0n gelo!ă 0n coloană)2.2. Crearea condi#iilor de anaerobio!ăCrearea condi#iilor de anaerobio!ă$ !etoda fi&ic#!etoda fi&ic# – utili!area anaerostatului – utili!area anaerostatului$ !etoda chimic#!etoda chimic# – 0n e3icator se 0ntroduc – 0n e3icator se 0ntroduc

substan#e ce fi3ea!ă o3igenul ("irogalolHba!ă)substan#e ce fi3ea!ă o3igenul ("irogalolHba!ă)utili!area gautili!area gass$"achetelor $"achetelor $ !etoda biologic#!etoda biologic# ortner – cultiareaortner – cultiarea

concomitentă a aerobilor şi anaerobilor concomitentă a aerobilor şi anaerobilor



/ecoltarea/ecoltarea – cu "recau#ie, eit*nd contactul – cu "recau#ie, eit*nd contactulcu aerul (0n seringi, utili!*nd mediicu aerul (0n seringi, utili!*nd mediis"eciale)s"eciale)

I etapă 8 4!B$6ĂŢIREA ANAER$BI"$RI etapă 8 4!B$6ĂŢIREA ANAER$BI"$R$ &nsăm*n#area "releatului 0n 2 e"rubete cu &nsăm*n#area "releatului 0n 2 e"rubete cu

mediul Litt$amediul Litt$ar r ro!!i regeneratro!!i regenerat$ &ncăl!irea unui tub la 9 &ncăl!irea unui tub la 988 CC,, 29 min –29 min –

distrugerea florei nes"orogenedistrugerea florei nes"orogene

$ Incubarea la :Incubarea la :88 C, 2<$< h (a aea locC, 2<$< h (a aea locmulti"licarea anaerobilor)multi"licarea anaerobilor)



II etapă 7 I9$"AREA CU"TURII *UREII etapă 7 I9$"AREA CU"TURII *URE

.E ANAER$BI.E ANAER$BI$ tudierea caracterelor de cultură – tulburareatudierea caracterelor de cultură – tulburarea

mediului, descom"unerea bucă#ilor de ficat,mediului, descom"unerea bucă#ilor de ficat,

etcetc$ I!olarea culturii "ure de anaerobi "rin metodaI!olarea culturii "ure de anaerobi "rin metoda9eissler 9eissler (0nsăm*n#area a 9,+ ml din mediul(0nsăm*n#area a 9,+ ml din mediulL$ "e cutii cu gelo!ă$s*nge gluco!atăL$ "e cutii cu gelo!ă$s*nge gluco!atăconsecuti). Incubarea 0nconsecuti). Incubarea 0nanaerostat5e3icator5gaanaerostat5e3icator5gass$"acJ, 2<$< h$"acJ, 2<$< h



$ KetodaKetoda ;einberg;einberg – dilu#ii succesie ale – dilu#ii succesie aleculturii 0n gelo!ă gluco!ată lichefiată şiculturii 0n gelo!ă gluco!ată lichefiată şias"irarea 0n tuburi lungi şi 0nguste, 0nchiseas"irarea 0n tuburi lungi şi 0nguste, 0nchiseermetic. Incubarea 0n termostat, 2< hermetic. Incubarea 0n termostat, 2< h

III etapă 7 ACU!U"AREA CU"TURII *UREIII etapă 7 ACU!U"AREA CU"TURII *URE

$ tudierea macrosco"ică a coloniilor tudierea macrosco"ică a coloniilor $ 73aminarea microsco"ică (frotiu -ram) a73aminarea microsco"ică (frotiu -ram) a

coloniilor sus"ectecoloniilor sus"ecte$

/e"icarea 0n mediul L$ regenerat "entru/e"icarea 0n mediul L$ regenerat "entruacumularea culturii "ureacumularea culturii "ure$ Incubarea 0n termostat, 2< hIncubarea 0n termostat, 2< h

I# ă I.ENTI-ICAREA CU"TURIII# t ă I.ENTI-ICAREA CU"TURII



I# etapă 7 I.ENTI-ICAREA CU"TURIII# etapă 7 I.ENTI-ICAREA CU"TURII*URE .E ANAER$BI*URE .E ANAER$BI

$ Verificarea "urită#iiVerificarea "urită#ii culturii "ureculturii "ure (frotiu(frotiu-ram)-ram)

$ tudierea caracterelor culturii "ure i!olatetudierea caracterelor culturii "ure i!olate

(cu res"ectarea condi#iilor de(cu res"ectarea condi#iilor deanaerobio!ă)anaerobio!ă)

# etapă 7 E#A"UAREA RE9U"TATE"$R1# etapă 7 E#A"UAREA RE9U"TATE"$R1-$R!U"AREA <I E"IBERAREA-$R!U"AREA <I E"IBERAREA

RĂ,*UN,U"UIRĂ,*UN,U"UI

,isteul #ITE=> ? Com"act are ca obiect de actiitate identificarea bacteriilor şi a fungilor şi testarea sensibilită&ii bacteriilor cu efecte



bacteriilor şi a fungilor şi testarea sensibilită&ii bacteriilor cu efectesemnificatie din "unct de edere clinic.

istemul include a"aratul VI7LT 2 Com"act, un com"uter (o sta#ie de

lucru) şi o im"rimantă.

7ste dis"onibil un sistem Ad%anced E+pert ,@ste (Etili!are Clinică)"entru asigurarea online a alidării sistematice a re!ultatelor şi ainter"retării fenotipurilor re/istente identificate 0n cursul testelor desensibilitate.

'"aratul VI7LT 2 Com"act este un sistem



'"aratul VI7LT 2 Com"act este un sistemintegrat care combină o"era#iile de inoculare acardului de testare, incubare a cardului de

testare şi citire a re/ultatelor .7'17@74 +. I!olarea culturii "ure

2. 1regatirea "robelor (a sus"ensiei bacteriene) . Introducerea cardurilor de testare şi ae"rubetelor cu "robe 0n casetelor cores"un!ătoare. <. &ncărcarea casetei 0n ta#ia de um"lere

(um"lerea celulelor cardurilor de testare).



; ransferarea casetei 0n sta#ia de 0ncărcare a casetei



;. ransferarea casetei 0n sta#ia de 0ncărcare a casetei =. 1rocesarea cardurilor de testare (citirea codului de bare,

sigilarea tubului de transfer, incubarea si citirea cardurilor de

testare)VI7LT 2 Com"act reali!ea!ă anali!ele de identificare şi de

sensibilitate "rin monitori!area continuă a creşterii şi a actiită#iimicroorganismelor din interiorul celulelor din cardurile de testare.

istemele o"tice de transmisie utili!ea!ă lumina i!ibilă "entru

măsurarea directă a creşterii microorganismelor. 'ceste sistemeo"tice se ba!ea!ă "e o citire ini#ială a luminii de la nielul uneicelule 0nainte de 0nce"erea unei creşteri semnificatie.%eterminările transmisiei luminii la nielul aceleiaşi celule lafiecare +; minute măsoară creşterea microorganismelor 0nfunc#ie de c*t de mult este 0m"iedicată lumina să traerse!ecelula.

:. 7?ectarea cardului%urata anali!ei – 2 – +9 ore

prelegere>Fiziologia bacteriilor

Documents

Transcript of prelegere>Fiziologia bacteriilor