Testul FISH

Hibridizarea fluorescenta in situ(FISH) este o tehnic/ de citoge-netic/ molecular/ utilizat/ \n scopulidentific/rii anomaliilor cromozomi-ale, numerice ]i structurale (care nupot fi detectate prin cariotipare).

Principiul acestei metode const n ataarea lasecvena-int a unei sonde de ADN monocatenar(de circa 40 kb), marcat fluorescent, pe baza com-plementaritii, de o secven-int a unui cromo-zom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vi-zualizat la microscopul cu fluorescen echipat cufiltre de excitaie i emisie, ceea ce permite citireasemnalelor specifice zonei-int. Se numr i seanalizeaz semnalele prezente n o sut de celule(de ex., trei semnale fluorescente specifice pentrucromozomul 21 indic sindromul Down).Tehnica FISH permite detectarea mozaicismelor,identificarea rearanjrilor cromozomiale complexe.Mai multe sindroame dismorfice (sindromulWilliams, Prader Willi, Angelman, Di George) pro-duse de microdeleii sau microduplicaii, suspectateclinic, imposibil de observat prin tehnicile citogene-tice convenionale, pot fi evideniate prin FISH meta-fazic. ntruct aceast metod presupune ca primetap de lucru obinerea unor culturi celulare (limfo-cite din snge periferic sau amniocite recoltate prinamniocentez n sptmnile 15-17 de sarcin), re-zultatul investigaiei este obinut n dou sptmni. FISH-ul interfazic permite punerea n eviden aanomaliilor numerice, detecia sexului genetic ntr-un timp scurt (48-72 h). Se realizeaz pe nuclei inter-fazici fr s fie nevoie de efectuarea de culturicelulare. Se folosesc sonde de ADN corespunz-toare regiunilor centromerice ale cromozomilor18, X, Y (CEP18, CEPX, CEPY), respectiv sondelocus specifice pentru cromozomii 13 i 21(LSI13, LSI21). Metoda este mai puin informativn cazul contaminrii cu celule materne (compar-ativ cu alte tehnici).Analiza FISH este o metod specific, perfor-mant, dar laborioas, care necesit celuleintacte; nu se substituie celorlalte metode deanaliz cromozomial i are indicaii foarte pre-cise. FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit catest de screening rapid atunci cnd exist semnede alert ecografic sau biochimic (dublu test,triplu test), iar ulterior se recomand o evaluarecitogenetic complet.

Bibliografie:

Molecular diagnosis of viral materno-fetal infections,Grangeot-Keros L.,Ann.Pharm Fr.2003 ,61(4),259-64.