Fish
2
T estul FISH Hibridizarea fuorescenta in situ(FISH) este o tehnic/ de citoge-netic/ molecular/ utilizat/ \n scopulidentic/rii anomaliilor cromozomi-ale numerice ! i structurale (care nupot detectate prin cariotipare)" #rincipiul acestei metode const$ %n ata&area lasec'ena-int$ a unei sonde de *+ monocatenar(de circa , .b) marcat$ fuorescent pe baza com- plementarit$ii de o sec'en$-int$ a unui cromo-zom" Hibridizarea sondei cu *+-ul celular este 'i-zualizat$ la microscopul cu fuorescen$ echipat cultre de e citaie &i emisie ceea ce permite citireasemnalelor specice zonei-int$" Se num$r$ &i seanalizeaz$ semnalele prezent e %n o sut$ de celule(de e" trei semnale fuorescente specice pentrucromozomul 01 indic$ sindromul *o2n)"Tehnica FISH permite detectar ea mozaicismeloridenticar ea rearan3$rilor cromozomiale comple e"4ai multe sindroame dismorce (sindromul5illiams #rader 5illi ngelman *i 6eorge) pro-duse de microdeleii sau microduplic aii suspectateclinic imposibil de obser'at prin tehnicile citogene-tice con'enionale pot e'ideniate prin FISH meta-7azic" 8ntruc9t aceast$ metod$ presupune ca prim$etap$ de lucru obinere a unor culturi celulare (lim7o-cite din s9nge p eri7eric sau amniocite recoltate prinamniocentez$ %n s$pt$m9nile 1:-1; de sarcin$) re-zult atul in'estigaiei este obinut %n dou$ s$pt$m9ni" FISH-ul i nter7azic permi te punere a %n e'iden$ aanomaliilor numerice detecia seului genetic %ntr -un timp scurt (,<-;0 h)" Se realizeaz$ pe nuclei inter -7azici 7$r$ s$ e ne'oie de e7ectuarea de culturicelulare" Se 7olosesc sonde de *+ corespunz$-
-
Upload
cheloo-andrei -
Category
Documents
-
view
212 -
download
0
description
fish
Transcript of Fish
Testul FISH
Hibridizarea fluorescenta in situ(FISH) este o tehnic/ de citoge-netic/ molecular/ utilizat/ \n scopulidentific/rii anomaliilor cromozomi-ale, numerice ]i structurale (care nupot fi detectate prin cariotipare).
Principiul acestei metode const n ataarea lasecvena-int a unei sonde de ADN monocatenar(de circa 40 kb), marcat fluorescent, pe baza com-plementaritii, de o secven-int a unui cromo-zom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vi-zualizat la microscopul cu fluorescen echipat cufiltre de excitaie i emisie, ceea ce permite citireasemnalelor specifice zonei-int. Se numr i seanalizeaz semnalele prezente n o sut de celule(de ex., trei semnale fluorescente specifice pentrucromozomul 21 indic sindromul Down).Tehnica FISH permite detectarea mozaicismelor,identificarea rearanjrilor cromozomiale complexe.Mai multe sindroame dismorfice (sindromulWilliams, Prader Willi, Angelman, Di George) pro-duse de microdeleii sau microduplicaii, suspectateclinic, imposibil de observat prin tehnicile citogene-tice convenionale, pot fi evideniate prin FISH meta-fazic. ntruct aceast metod presupune ca primetap de lucru obinerea unor culturi celulare (limfo-cite din snge periferic sau amniocite recoltate prinamniocentez n sptmnile 15-17 de sarcin), re-zultatul investigaiei este obinut n dou sptmni. FISH-ul interfazic permite punerea n eviden aanomaliilor numerice, detecia sexului genetic ntr-un timp scurt (48-72 h). Se realizeaz pe nuclei inter-fazici fr s fie nevoie de efectuarea de culturicelulare. Se folosesc sonde de ADN corespunz-toare regiunilor centromerice ale cromozomilor18, X, Y (CEP18, CEPX, CEPY), respectiv sondelocus specifice pentru cromozomii 13 i 21(LSI13, LSI21). Metoda este mai puin informativn cazul contaminrii cu celule materne (compar-ativ cu alte tehnici).Analiza FISH este o metod specific, perfor-mant, dar laborioas, care necesit celuleintacte; nu se substituie celorlalte metode deanaliz cromozomial i are indicaii foarte pre-cise. FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit catest de screening rapid atunci cnd exist semnede alert ecografic sau biochimic (dublu test,triplu test), iar ulterior se recomand o evaluarecitogenetic complet.
Bibliografie:
Molecular diagnosis of viral materno-fetal infections,Grangeot-Keros L.,Ann.Pharm Fr.2003 ,61(4),259-64.
