Stom_Proteine Si Enzime

7/27/2019 Stom_Proteine Si Enzime

1/8

RED.: 01

DATA: 24.01.11CATEDRA DE BIOCHIMIE I BIOCHIMIE CLINICFACULTATEA STOMATOLOGIE, ANUL I

Pag. 1 / 8

Ana l i z a t i a p r o b a t l ae d i n a ca t e d r e i d i n 2 4 . 0 1 . 2 0 1 3 , p r o c e s v e r b a l n r . 1 1

e f u l Ca t e d r e i B io c h i m i e i B i o c h im i e Cl i n i c ,

c o n f . u n i v e r s i t a r , d r . h a b . n m ed i c i n O l g a Ta g a d i u c

____________________

Indicaia metodic nr. 1

Tema: Convorbire introductiv. Importana biochimiein sistemul de instruire a medicului stomatolog.

Structurai proprietatile aminoacizilor.

nt rebri pentru autopregtire:

1. Obiectul biochimiei. Rolul biochimiei n practic medical, inclusiv nstomatologie.

2. Proteinele. Caracteristica generala. Rolul biologic al proteinelor.

3. Aminoacizii clasificarea, structura i proprietile.

4. Teoria polipeptidic a structurii proteinelor (esena ei).


Tema: Structura proteinelor. Clasificarea proteinelor.Proteinele simple i conjugate.

Colagenul particularitile compoziiei i structurii.

Experiena 1. Identificarea aminoacizilor prin metoda cromatografiei pe hrtie.

Principiul metodei: Metoda se bazeaz pe diferena coeficientului de repartiie aaminoacizilor n api solvent organic (butanol), care nu se amestec cu apa. Vitezamigrrii aminoacizilor pe hrtie este direct proporional cu gradul de dizolvare n butanol.

Mod de lucru: Pe linia de start a benzii de hrtie cromatografic (aproximativ la 1cm) cu ajutorul capilarului se aplic o pictur (nu mai mare de 5 mm) de amestec deaminoacizi. Dup uscare la aer (fixare) banda se ntroduce ntr-un vas nchis cu amestecbutanol-ap, astfel nct lichidul s ajung numai pn la linia de start (5 mm). Cu ajutoruldopului banda se fixeaz

vertical f

s

ating

pereii vasului. Dup

1,5 ore de expunere

la temperatura camerei, banda se scoate din vas, se noteaz cu creionul simplu hotarulsolventului i se usuc n termostat (10 minute la temperatura 70-100C). Apoi banda setrece prin soluia alcoolic de ninhidrin 0,2% i din nou se usuc n termostat la


2/8

RED.: 01


Pag. 2 / 8

temperatura de 100C. Pe cromatogram apar unele pete galbene sau violete localizate ladiferite distane de linia de start.

Cu ajutorul riglei se msoar urmtoarele distane:1. de la linia de start pn la centrul fiecrei pete (a);2. de la linia de start pn la hotarul solventului (b).

Raportul dintre distanele parcurse de aminoacid (a) i de solvent (b) poartdenumirea de coeficient de repartiie (R) specific pentru fiecare aminoacid n condiiistandard i se calculeaz astfel: Rf=a/b. Dup tabelul cu Rf standard identificmaminoacidul.

Rezultatul obinut: ___________________________________________________________________________________________________________________________

Concluzie:_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

Valori le Rf standardAminoacidul Rf Aminoacidul Rfacidul aspartic 0.24 izoleucina 0.72acidul glutamic 0.30 leucina 0.73alanina 0.38 lizina 0.14

arginina 0.20 metionina 0.55asparagina 0.50 prolina 0.43cysteina 0.40 serina 0.27fenilalanina 0.68 treonina 0.35glutamina 0.13 triptofan 0.66glicina 0.26 tirozina 0.45histidina 0.11 valina 0.61

Importana clinico-diagnostic. Metoda permite determinarea att calitativ, ct icantitativ a aminoacizilor n obiectele biologice care are importan n studierea

metabolismului proteic. n diferite afeciuni ale ficatului, rinichilor i altor organe seconstat modificarea coninutului aminoacizilor n serul sanguin.


1. Structura proteinelor. Structura primar legtura peptidici proprietile ei. Structura secundar -spirala i -structurile. Legtura de hidrogen. Structura teriar caracteristica general. Legturile de stabilizare.

Structura cuaternar caracteristica general. Legturile de stabilizare. Stuctura domenic a proteinelor. Noiuni generale de domen.


3/8

RED.: 01


Pag. 3 / 8

2. Clasificarea proteinelor.2.1 Proteinele simple (histonele, albuminele, globulinele): particularitilestructurale

i ale propriet

ilor fizico-chimice, rolul biologic.

2.2 Proteinele conjugate:a. Caracteristica general a nucleo-, lipo-, fosfo-, cromo- i metaloproteinelor.b. Glicoproteinele - rolul biologic, particularitile structurale i proprietilefizico-chimice ale glicoproteineloresutului conjunctiv.c. Mucina rolul biologic, particularitile structurii i ale proprietilor fizico-chimice.

3. Colagenul: rolul biologic, particularitile componenei aminoacidice,structurii i ale proprietilor fizico-chimice.

4. Proteinele fixatoare de Ca2+ colagenul, calmodulina - particularitilestructurale ce asigur fixarea Ca2+, rolul metabolic, intervenia n procesele demineralizare.


Tema: Proprietile fizico-chimice ale proteinele.Metodele de separare i purif icare ale proteinelor.

Experiena 1. Sedimentarea proteinelor.

Principiul metodei: Metoda se bazeaz pe sedimentarea ireversibil a proteinelor prinreacii de precipitare a proteinelor cu srurile metalelor grele i acizi minerali. Precipitareaproteinelor cu srurile metalelor grele are loc la concentraii foarte mici spre deosebire desalifiere. n reaciile cu srurile metalelor grele (Cu, Ag, Hg etc.) proteinele absorb acestemetale formnd compui compleci care nu se mai solubilizeaz n prezena excesuluiacestor sruri (cu excepia AgKO3i HgCl2), dar se dizolv n ap.Acizii minerali concentrai cu excepia acidului ortofosforic provoac denaturareaproteinelor cu formarea de sruri complexe.

Efectuarea lucrrii:a. Precipitarea proteinelor cu srurile metalelor grele.

n dou eprubete lum cte 5 picturi de soluie de ovalbumin. n prima adugm 1-2picturi soluie de CuSO4 2%; n a doua - 2 picturi soluie de acetat de plumb:Pb(CH3COO)23H2O. n ambele eprubete apare un precipitat care nu se dizolv n ap.Dac n prima eprubet mai adugm 5-10 picturi de soluie de sulfat de cupru,precipitatul se dizolv.


Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________


4/8

RED.: 01


Pag. 4 / 8

b. Precipitare proteinelor cu acizi minerali.n dou eprubete lum cte 10 picturi de acizi concentrai azotic (HNO3) i sulfuric

(H2SO4). nclinnd eprubetele la 45 se toarn pe pereii lor un volum egal de soluieproteic evitnd amestecarea lichidelor. La hotarul de separare a lichidelor apare unprecipitat alb amorf n form de inel. La adugarea unui exces de acid n eprubetelerespective observm c precipitatul se dizolv n acid sulfuric i nu se dizolv n acidazotic.


Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________


1. Proprietile fizico-chimice ale proteinelor masa molecularitermolabilitatea.

2. Solubilitatea proteinelor. Factorii ce influeneaz gradul de solubilitate aleproteinelor. Proprietile soluiilor coloidale proteice. Factorii destabilizare a soluiilor proteice.

3. Sarcina electric a proteinelor. Punctul i starea izoelectric.

4. Metode de separare i purificare ale proteinelor: dializa, salifierea,electroforeza, cromatografia i gel-filtrarea (principiul metodelor,importana).

5. Saliva - soluie proteic. Proprietile salivei determinate de prezenaproteinelor. Originea, reprezentanii i rolul biologic al proteinelorsalivare.


5/8

RED.: 01


Pag. 5 / 8


Tema: Natura chimic

i structura enzimelor.Vitaminele ca coenzime. Mecanismul de aciune al enzimelor.

Experiena 1. Identificarea vitaminelor B1, B2, B6, PP (B5).

oIdentificarea vitaminei B1 (tiaminei).Principiul metodei: Tiamina n mediul alcalin formez cu diazoreactivul un compus

complex de culoare oranj.Mod de lucru: La 5 picturi de diazoreactiv (care const din volume egale de soluie

de acid sulfanilic 1% i soluie de nitrit de sodiu 5%), se adaug 1-2 picturi soluie detiamin 5%. nclinnd eprubeta se picur atent pe pereii ei 5-7 picturi de carbonat de

sodiu (Na2CO3) 10%. La hotarul dintre lichide apare un inel colorat n oranj.


Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

oIdentificarea vitaminei B2 (riboflavinei)Principiul metodei: Vitamina B2 posed proprietatea de a se reduce. n form

oxidat vitamina are culoare galben, la nceputul reaciei de reducere are culoare roz,care n cele din urm se decoloreaz, deoarece forma redus a vitaminei este incolor.

Mod de lucru:ntr-o eprubet se iau 10 picturi de soluie de vitamin B2, se adaug5 picturi de acid clorhidric concentrat i o granul de zinc metalic. Se observ degajareabulelor de hidrogen, lichidul galben se coloreaz treptat n roz, dup care se decoloreaz.


Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

oIdentificarea vitaminei PP (B5)Principiul metodei: La interaciunea vitaminei PP cu acetatul de cupru se formeaz

un precipitat albastru al srii de cupru a acidului nicotinic.Mod de lucru:ntr-o eprubet se iau 20 picturi de soluie de vitamin PP se agiti

se nclzete pn la fierbere. Se agit soluia de acetat de cupru 5% i se adaug 20picturi la soluia fierbinte de vitamin PP. Eprubeta se nclzete din nou pn la fierberei dup aceea se rcete ntr-un jet de ap rece. La fundul eprubetei se depune unprecipitat de culoare albastr de sare de cupru a acidului nicotinic.

Rezultatul obinut: _____________________________________________________________

______________________________________________________________

Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________


6/8

RED.: 01


Pag. 6 / 8

oIdentificarea vitaminei B6 (piridoxinei)Principiul metodei: Vitamina B6 reacionnd cu clorura de fier formeaz o sare

complex de tipul fenolatului de fier de culoare roie.

Mod de lucru: La 5 picturi soluie de vitamin B6 1% se adaug un volum egalsoluie de clorur de fier 1%. Amestecul se agit. Apare o coloraie roie.


Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________


1. Noiune de enzime. Rolul biologic. Asemrile i deosebirile de

catalizatorii nebiologici.

2. Structura enzimelor. Centrul activ i centrul alosteric: structura i rolul lor.

3. Natura chimic a enzimelor. Enzimele simple i conjugate. Noiune de

cofactori ai enzimelor (ionii metalelor, vitaminele, substanele organice

nevitaminice): natura chimici funciile lor.4. Structura vitaminelor B1, B2, B6, PP (B5) i a coenzimelor, derivatelor

acestor vitamine. Rolul lor metabolic.

5. Mecanismul de aciune al enzimelor.

6. Clasificarea, nomenclatura i numrul de cod al enzimelor. Caracteristica

general a celor 6 clase de enzime.


7/8

RED.: 01


Pag. 7 / 8

Indicaia metodic nr. 5Tema: Proprietile enzimelor. Reglarea activitii lor.

Enzimele salivei.

Experiena 1. Determinarea activitii -amilazei urinare cu substrat stabilde amidon (metoda Caraway).

Principiul metodei: -amilaza scindeaz amidonul cu obinerea produilor finali carenu se coloreaz cu soluia de iod. Activitatea amilazei se apreciaz dup micoarareacantitii de amidon scindat.

Mod de lucru: n 2 eprubete de 10 ml calibrate (control i experien) se iau cte1 ml de substrat care conine 0,0004 g de amidon. Eprubeta de experien este ntroduspentru 5 minute n baia de ap la temperatura de 370C, dup care se adaug 0,02 ml deurin; coninutul se agiti eprubeta se introduce din nou n baia de ap la 370C exact 7,5minute (calculul timpului se face din momentul adugrii urinei). Ulterior n ambeleeprubete se adaug cte 1 ml soluie de iod; iar n eprubeta de control suplimentar seadaug 0,02 ml de urin. Volumul reactivilor n ambele eprubete se completeaz pn la10 ml cu ap distiliat. Imediat se determin extincia soluiilor din eprubeta de control (Ec)

i de experien (Eexp) faa de apa distilat la fotocolorimetru (filtrul rosu,

=630-690 nm) ncuve de 10 mm.

Calculul: n unitii SI activitatea amilazei se exprim n grame de amidon hidrolizatde cantitatea de enzim care se conine ntr-un litru de urin timp de o or de incubare latemperatura de 370C.

i se face conform formulei:

Activitatea amilazei = [(Ec Eexp) / Ec] x 160 g/or L,

unde: Ec extincia probei de control, Eexp extinia probei de experien.

Valorile normale ale activitii amilazei din urin 20-160 g/or L


Concluzie: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________


8/8

RED.: 01


Pag. 8 / 8


1. Proprietile generale ale enzimelor: termolabilitatea, influiena pH asupra

activitii enzimelor, specificitatea.

2. Activarea enzimelor (proteoliza pariala, alosteric, autostructurarecuaternara, interconversiune).

3. Inhibarea enzimelor (alosterica, competitiva, necompetitiva).

4. Reglarea activitii enzimelor (generaliti).

5. Enzimele salivei: reprezentanii principali, funciile lor, originea, modificrileactivitii lor n patologiile dinilor, esuturilor moi ale cavitii bucale, .a.


Totalizare pe capitolele I i II(Chimia proteinelor; Enzimele)

Stom_Proteine Si Enzime

Documents

Transcript of Stom_Proteine Si Enzime