Sterilizarea - metode de sterilizareMetode generale de evitare a contaminrii culturilorLaborator nr. 2

Steril = lipsa total a microorganismelorinstrumentarul i vasele de laboratorincinta i suprafaa de lucrumaterialul biologicFiziciChimicicldurauscatumedflambarefierbereraze UVultrasunetefiltrare

Agenii fizici1. Cldura uscatflambarea - imersare n alcool urmat de trecere prin flacr cteva secunde (instrumentar)nclzire la rou - supranclzire (obiecte metalice, instrumentar)aer cald - etuvare la 160-180C, 1-3 ore (vase de cultur, instrumentar) ; presterilizareEtuvaincint interioarperei metalici+azbesttermometrubuton de reglare a temperaturiitemporizatorhttp://www.hospitalmanagement.net/contractor_images/shanghai_lishen/co2-incubator.jpg

Agenii fizici2. Cldura umed - ageni de sterilizare = aburii-putere de penetrare mai mare dect cldura uscatFierbere - instrumentar, obiecte mici - dopuri, capace, etc.

a. Autoclavare - vapori de ap sub presiune - obligatorie pentru sterilizarea vaselor, a mediilor de cultur, a apei de cltire pentru explante

20-25 min - medii de cultur1 or - vaseDin momentul obinerii temperaturiidoriteautoclavmod de funcionarehttp://www.rlc.dcccd.edu/mathsci/reynolds/micro/lab_manual/media_prep.htmlhttp://img.alibaba.com/photo/50995538/Autoclave.jpg

2. Cldura umed Fierbere

b. Pasteurizare = ridicarea la temperatur mare urmat de rcire brusc oc termic 3 tipuri de pasteurizare n funcie de temperatura utilizat: joas: 60-65 C 30 min. rcire brusc la 3 C medie: 70-75 C 10-20 min. rcire brusc la 3 C nalt: 85-90 C cteva secunde rcire brusc la 3 C

c. Tindalizare sterilizare fracionat- nclzire discontinu la 30-60 C repetat timp de 3 zile consecutiv la interval de 24 ore; distrugerea agenilor patogeni n form vegetativ3. Razele ultraviolete- distruge formele vegetative ale agenilor patogeni, mai puin eficient pentru spori se aplic incintelor i suprafeelor de lucru se folosesc lmpi UVhttp://www.scientificvisions.com/catalog/product_info.php?cPath=26&products_id=34http://www.hospitalitaliano.org.ar/comunidad/index.php?col_izquierda=col_izquierda.php&contenido=ver_curso.php&id_curso=1295http://www.agroworld.com/jelly_pic.htm

4. Ultrasunetele folosirea vibraiilor acustice cu frecvene mai mari de 20.000 Hz, care asigur dezintegrarea rapid a celulei bacteriene se aplic instrumentarului5. Filtrareatrecerea lichidelor prin substraturi poroase care au rolul de a reine elementele nedorite (adsorbia particulelor la pereii capilarelor ce formeaz porii filtrului)- filtre de sticl - filtre de ceramic- filtre de hrtie- membrane filtrantehttp://www.tradekey.com/product_view/id/144109.htm

Agenii chimici ageni dezinfectani = substane chimice soluie de sublimat coroziv 0,1% HgCl2 - pentru mese, mobilier detergeni bicromat de potasiu 5% - pentru pipete alcool etilic 70% formol 40% fenol 5% ap oxigenat 3% permanganat de potasiu 0,1% tincturi EtOH 70% pentru suprafee sau 80% pentru instrumentele flambate Hipoclorit de sodiu (NaOCl)Metod de sporire a eficacitii agenilor sterilizani const n adugarea de surfactani pentru reducerea tensiunii superficiale create la interfaa dintre lichidul de dezinfectat i suprafaa materialului biologic (ex.: Tween 20, 40, 60, 80)http://www.specialchem4coatings.com/tc/dispersion/index.aspx?id=surfactantshttp://www.ext.colostate.edu/pubs/crops/00564.htmlhttp://www.speedyclean.net/detergents_cleaners.php

Metode generale de evitare a contaminrii culturilor- evitai circulaia excesiv n camera de inoculat- nu lsai n hot vasele contaminate- pornii hota cu 20 min nainte de a ncepe inocularea- splai suprafaa hotei cu etanol 70%- ndeprtai obiectele nefolositoare sau n surplus din interiorul hotei laminare- tergei cu etanol 70% partea inferioar a vaselor ce le vei introduce n hot- lucrai n partea interioar a hotei, ct mai aproape de filtrele de sterilizare a aerului- evitai strnutul, tuitul sau vorbitul n zona steril a hotei- pstrai o poziie vertical a corpului n timpul lucrului- dup fiecare utilizare resterilizai pentru aprozimativ 5 secunde toate instrumenteleProtecie n laborator- nu se pipeteaz cu gura- dup flambare nu introducei instrumentul n vasul cu alcool, pericol de aprinderehttp://homepage2.nifty.com/chigyoraku/vitpseud.jpeg

Bibliografie:Micropropagarea ndrumtor practic, Corina Ctan, Ed. Risoprint, Cluj-Napoca, 2005Biotehnologii celulare, Corina Ctan , Ed. AcademicPres, Cluj-Napoca, 2005

http://www.hospitalmanagement.net/contractor_images/shanghai_lishen/co2-incubator.jpghttp://img.alibaba.com/photo/50995538/Autoclave.jpghttp://www.rlc.dcccd.edu/mathsci/reynolds/micro/lab_manual/media_prep.htmlhttp://www.hospitalitaliano.org.ar/comunidad/index.php?col_izquierda=col_izquierda.php&contenido=ver_curso.php&id_curso=1295http://www.agroworld.com/jelly_pic.htmhttp://www.scientificvisions.com/catalog/product_info.php?cPath=26&products_id=34http://www.tradekey.com/product_view/id/144109.htmhttp://www.speedyclean.net/detergents_cleaners.phphttp://www.ext.colostate.edu/pubs/crops/00564.htmlhttp://www.specialchem4coatings.com/tc/dispersion/index.aspx?id=surfactantshttp://homepage2.nifty.com/chigyoraku/vitpseud.jpeg