Metode de Extractie

download Metode de Extractie

of 76

Transcript of Metode de Extractie

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    1/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    1

    CAPITOLUL I. INTRODUCERE. GENERLITI

    Plantele medicinale i aromatice au utilizri multiple, cu grade foarte

    diferite de prelucrare. Cu produsele obinute din ele se asigur n principal

    satisfacerea necesarului industriei chimico-farmaceutice autohtone, ca i

    solicitrilor populaiei pentru o gam variat de sortimente (plante medicinale n

    stare uscat i amestecuri de plante pentru ceaiuri, produse cosmetice cu etracte

    din plante, siropuri, .a.!.

    Produsele brute medicamentoase de origine vegetal, sau "drogurile#

    vegetale se ntrebuineaz n scopul punerii n valoare a substanelor pe care le

    conin cu deosebite caliti terapeutice. $tilizarea produselor vegetale poate fi

    legat de proprietile lor fizice, cum este cazul sporilor de cornior (Lycopodium

    sp.! sau a perilor seminelor de bumbac (Gossypidium sp.!. %a&oritatea

    produselor sunt folosite ns pentru aciunea lor terapeutic, atribuit unor

    principii active. 'in punct de vedere farmacodinamic, respectiv terapeutic, rolul

    principiilor activi poate fi &ucat de o singur substan sau de un comple desubstane. Principiul sau principii activi pot fi etrai, respectiv izolai din

    produsul vegetal i ntrebuinai ca i substane chimice pure. Prin sinteza

    organic s-a a&uns la obinerea pe cale industrial a unui numr nsemnat de

    principii activi. n unele cazuri., aceti produi de sintez au nlocuit ntr-o

    msur mai mic sau mai mare produsul vegetal, de eemplu ma&oritatea

    vitaminelor. n alte cazuri ntrebuinarea produsului natural continu s fie mairentabil din punct de vedere economic dec)t obinerea pe cale sintetic a

    principilor activi, de eemplu ma&oritatea alcaloizilor. $tilizarea produsului

    vegetal poate fi preferat fa de substana chimic pur i din punct de vedere

    terapeutic. n acest caz produsele vegetale se prefer pentru compleitatea

    aciunii, asigurat de sinergismul diferiilor compui. *stfel, de eemplu, morfina

    sau atropina obinute din plantele respective prezint o alt aciune dec)tetractul de opiu sau beladon.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    2/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    2

    'in momentul n care s-a a&uns la cunoaterea structurii chimice a

    principiilor activi s-au lrgit posibilitile de valorificare a acestora prin+

    -ntrebuinarea unor preparate farmaceutice, numite i galenice,

    obinute dintr-un drog vegetal, de preferin cu un coninut prevzut de principii

    activi

    -ntrebuinarea unui comple de principii activi obinut prin

    ndeprtarea substanelor inactive numite substane balast

    -ntrebuinarea unui singur component considerat ca cel mai important

    dintre principii activi ai produsului respectiv

    - ntrebuinarea unui principiu activ obinut prin sintez.Procentul la care a&ung principii activi n diferitele organe ale aceleai

    plante variaz n limite largi. $nii compui se gsesc practic n toate esuturile

    plantei respective, alii sunt localizai aproape n ntregime n anumite organe sau

    esuturi.

    alorificarea raional a plantelor medicinale necesit cunoaterea

    localizrii precise a principiilor activi. Prezena diferiilor compui sau aesuturilor (metode citochimice i histochimice!. tudiul structurii microscopice

    i a localizrii principiilor activi intr n domeniul cercetrilor de farmacognozie.

    /ocul n care un principiu activ apare n cadrul organismului vegetal

    depinde n primul r)nd de rolul pe care acesta l &oac n metabolismul plantei.

    Pentru a putea a&unge la mrirea coninutului de principii activi este

    necesar s se cunoasc toi factorii care influeneaz biogeneza principiilor activi.%etode de analize fotochimice, absolut necesare pentru studiul

    plantelor medicinale i aromatice sunt cuprinse n tratatul lui Paech i 0race1.

    2 mare parte a principiilor activi sunt considerai ca "substane

    secundare#, care se formeaz n cursul proceselor de desimilaie.

    Principal, fiecare celul vie poate s elaboreze diferite substane de

    acest gen. n multe cazuri, ns producerea masiv a acestora are loc n celulele

    difereniate n acest scop, care se cunosc sub numele de esuturi de secreie.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    3/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    3

    Clasificarea principiilor activi poate fi fcut dup natura lor chimic,

    dup proprietile lor fizico-chimice i dup nsuirile lor biologice. $nele grupe

    de principii activi sunt mai multe sau mai puin unitare din punct de vedere

    chimic, n privina unei grupe funcionale sau n privina nucleului care st la

    baza formulei structurale.

    *lte categorii de compui naturali heterogeni din punct de vedere

    chimic, dar mai mult sau mai puin unitare n privina proprietilor fizico-

    chimice. *lte grupe de principii activi se stabilesc pe baza proprietilor biologice

    pe care le prezint, ca de eemplu antibioticele sau vitaminele. n anumite cazuri

    criteriul unitii de structura i al aciunii biologice se suprapun.Clasificrile actuale ale principiilor activi se bazeaz pe trei criterii+

    natura chimic, proprietile fizico-chimice i aciunea biologic. Cele mai

    importante grupe de principii activi sunt+ glucidele, pectinele, mucilagiile i

    gumele, uleiurile grase, uleiurile eseniale, rezinele, acizii organici, glicozidele,

    saponinele, materiile tanante, principiile amare, vitaminele, alcaloizii, coloranii

    vegetali, antibioticele i fitoncidele, substane minerale.Cercetrile de laborator efectuate au stabilit c+ -n imensa ma&oritate a

    cazurilor, cantitatea de principii activi nu este aceeai n toate organele unei

    plante medicinale, ntr-un organ acumul)ndu-se n concentraia cea mai mare, n

    altul mai mic, i n altul chiar poate lipsi sau eista n cantitate negli&abil. 'e

    aici rezult c trebuie s se cunoasc cu suficient precizie organul sau organele

    cele mai bogate n principii activi, deoarece numai aa se va obine un produsvegetal cu eficien terapeutic nu numai cert, dar i constant.

    -cantitatea de principii activi din organul plantei cel mai bogat n ele nu

    este aceeai n tot timpul anului i variaz n funcie de etapele sezoniere de

    vegetaie ale plantei, gsindu-se n concentraie maim numai ntr-o anumit

    perioad a anului, care trebuie s fie i timpul de recoltare al acestui organ,

    alegerea momentului optim de recoltare fiind deosebit de important pentru

    obinerea produselor de calitate superioar

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    4/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    4

    -stabilitatea n timp cantitativ i calitativ a principiilor activi dintr-un

    organ de plant recoltat la timpul potrivit depinde pe de o parte de modul de

    uscare al lui, iar pe de alt parte, de condiiile n care este pstrat.

    3itoterapia i fitochimia reprezint azi o valoroas surs de inspiraie

    pentru cercetrile fundamentale din domeniul medicamentelor. 'up ce s-a izolat

    un principiu activ din plant i i s-a stabilit structura, se poate realiza nu numai

    molecula iniial prin sinteza chimic, ci se poate obine i derivai cu o structur

    asemntoare pentru a gsi alte medicamente valoroase.

    Plantele i respectiv drogurile aromatice, c)t i uleiurile volatile

    obinute din acestea sunt folosite pe scar industrial numai n scopurifarmaceutice, dar i n urmtoarele domenii+ parfumerie, cosmetic, industria

    spunurilor, pentru aromatizare, industria alimentar, la aromatizarea unor

    dulciuri, buturi alcoolice i n cantitate de condiment la obinerea diferitelor

    produse de carne, etc.

    n prezentul proiect de diplom se va face un studiu fitochimic asupra

    plantelor de glbenele, Calendula Officinalis, prezent)ndu-se principii activi,importana i utilizarea lor.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    5/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    5

    CAPITOLUL II. PREZENTAREA PROBLEMEI

    n flora rii noastre, care numr aproimativ 4566 de specii de plante

    superioare, se nt)lnesc reprezentani ai plantelor medicinale i aromatice.

    7umrul lor se ridic la aproimativ 866, ceea ce nseamn c din 9 specii care

    cresc pe teritoriul rii noastre, una i gsete utilizri n medicin.

    Primele mrturii scrise asupra teritoriului i oamenilor pm)ntului

    rom)nesc atest, c nc de pe timpul dacilor plantele medicinale erau cunoscute

    i folosite. mbogit ulterior cu noi cunotine, tradiia medicinii populare s-a

    perpetuat din generaie n generaie, iar n ultimul secol aceasta se mpletete cu

    studiul aprofundat al plantelor medicinale i aromatice.

    'in aceast mare varietate de specii de plante medicinale i aromatice,

    ca material de studiu s-a ales Calendula officinalis (glbenele!. 2riginar din

    udul :uropei, la noi se cultiv de mult timp ca plant ornamental. Prin cultur

    s-a produs o serie de varieti decorative. n scopuri medicinale se folosesc numai

    varietile caracterizate prin flori duble de culoare galben-portocalie.

    2.1. Descriere botaic!

    pecie anual (rarbienal!, cu rdcina

    pivotant tulpina nalt p)n la ;< cm,

    puternic, ramificat i proas, are frunzele

    oblonglanceolate alterne, sesile. 3lorile sunt

    grupate n capitule terminale mari, prezint

    flori ligulate, tridintate pe margini, de culoare

    galben-portocalie i flori centrale tubuloase

    de culoare galben. nflorete din mai p)n n septembrie.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    6/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    6

    e utilizeaz ca produs vegetal fie numai florile marginale (Flores

    Calendulae sine receptaculis!, fie ntregul capitul (Flores Calendulae

    cumreceptaculis!. *mbele produse au miros slab aromat, gust amrui srat.

    2.2. Te"o#o$ia %e ct&r!

    2.2.1. Soiul cultivat

    n prezent n ara noastr se cultiv soiul "Plamen# cu inflorescene

    mari, involte, portocalii.

    2.2.2. Amplasarea culturii

    =lbenelele nu sunt pretenioase fa de temperatur i umiditate.

    e dezvolt mulumitor pe toate tipurile de sol, prefer)nd soluri ad)nci,

    bogate, af)nate, cu umiditate suficient, care se nclzesc uor. n asolament pot

    urma dup orice cultur pritoare anual. 7u se recomand monocultura pentru

    a preveni atacul bolilor i duntorilor. 7u vor reveni pe acelai teren maidevreme de 8 sau < ani.

    2.2.3. Fertilizarea

    *dministrarea ngrmintelor fosfatice contribuie la sporirea

    numrului de inflorescene pe plant i la prelungirea duratei de nflorire, dac se

    aplic n doze de 56->6 ?g@ha fosfor .a. mpreun cu ngrmintele cu azot.ngrmintele cu azot se recomand a se aplica n doz de 86-8@ prin reacii de hidroilare,

    dehidroilare, metilare sau demetilare, unii reprezentani aparin)nd aceleiai

    grupe de flavonoide. *ceste transformri au o mare importan practic, deoarece

    unele flavonoide larg rsp)ndite n natur, pot fi transformate n altele mai

    valoroase din punct de vedere practic, dar mai puin rsp)ndite, cum este cazul

    rutinei i Duercetinei, cu rol bine stabilit n terapeutic, fiind produse

    farmaceutice de mare circulaie.

    3.2.1. Flavone #i -licozizi 0lavonici

    3lavonele sunt pigmeni galbeni, care se gsesc n flori, fructe i

    frunze, sub form de glicozizi, iar n lemn i scoar, at)t libere, c)t i ca

    glicozizi.

    /a cunoaterea constituiei compuilor flavonici au contribuit n primulr)nd cercetrile lui *.=. Perhin i t. Mostanec?i. *u fost sintetizate numeroase

    flavone, dar nu toate au corespondent natural. n natur s-au gsit peste o mie de

    compui flavonici. 7umrul gruprilor hidroilice i metoilice variaz de la A

    p)n la 5. gruprile metoilice se gsesc mai ales pe inelul H. $n numr mai mic

    de compui flavonici conin grupe metil, dioimetil sau catene mai lungi, de

    tipul+ CI4

    -CIA-CIA-C- CI4 , sau sunt condensai cu unele cicluri.

    2I

    =lucidele care particip la construcia glicozizilor flavonici sunt n

    primul r)nd+ '-glucoza, /-ramnoza, /Narabinoza, '-iloza i acidul '-

    glucuronic. *ceste glucide pot participa i sub form de biglucide sau triglucide

    cum sunt+ rutinoza, apioza, robinoza, soforoza i altele

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    20/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    20

    esturile glucidice se gsesc fiate la una sau dou din gruprile

    hidroilice ale compusului flavonic.

    Pro(riet!+i i*ice

    3lavonele sunt substane cristalizate, colorate n galben. =licozizii

    flavonici cristalizeaz bine, fiind solubili n ap, metanol i etanol. olubilitatea

    flavonelor este variat. =ruparea OC2 - C K C- are putere cromofor mic, dar

    datorit con&ugrii cu nucleele aromatice precum i datorit gruprilor

    hidroilice, culoarea se intensific. $n efect deosebit asupra nchiderii culorii

    galbene au gruprile hidroilice din 4 i 8 datorit posibilitii de formare a uneistructuri chinoide.

    3lavonoidele prezint n $.. dou sau trei benzi de absorbie.

    =ruprile hidroilice din anumite poziii au efect batocrom caracteristic, iar

    transformarea acestora n grupri metoilice are un efect hipocrom. 'eterminarea

    poziiei benzilor de absorbie n $.. permite caracterizarea compuilor flavonici.

    3lavonele prezint o serie de proprieti chimice ce se datoresc agliconului.

    Ac+i&ea a#ca#i#or ,i aci*i#or

    ub aciunea alcalilor inelul pironic se deschide, stabilindu-se un

    echilibru ntre flavon i dicetona rezultat.

    eacia de deschidere a ciclului pironic fiind reversibil, alcalii i acizii

    pot avea aciune izomerizant asupra flavonelor. *stfel de reacii de izomerizare

    sub aciunea acizilor au fost folosite n scopuri preparative. @9@

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    21/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    21

    3.2.2. Flavonoli ai 0lorilor de )alendula

    0#a)oo#i 3 etract s.&.Fraciunea lipofil

    -cvercetin O 4 O glucozid (soDuercitin! --chempferol O 4 - glocozidoramnozid 6,6;-9 duble legturi

    con&ugate. Cele care conin mai puin de >-9 duble legturi CKC con&ugate sunt

    incolore, cele cu E6 duble legturi au o culoare galben, cele cu EE duble legturi

    au culoare portocalie, iar cele cu peste EE duble legturi sunt roii.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    27/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    27

    Pigmenii carotenoidici se dizolv bine n solveni organici i n lipide.

    Carotenoidele oigenate se solv numai n solveni organici polari. Carotenoidele

    prezint un miros caracteristic slab aromat. 7u sunt toice, nici iritante. Punctele

    de topire sunt n general situate sub A

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    28/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    28

    Pentru a evita emulsionarea spunurilor, au fost adugai c)iva mililitri de alcool

    sau de soluie concentrat de sare (7aCl, %g2 8, (7I8!A28!. oluiile eterice

    reunite s-au splat cu ap ntr-o p)lnie de separare p)n la ndeprtarea complet

    a alcaliilor, s-au uscat peste sulfat de sodiu anhidru, s-au filtrat i evaporat

    secundar. 7. *rpin, L./. 3iasson au constatat c separarea carotenoidelor dintr-un

    amestec este str)ns legat de caracterul hidrofil datprat gruprilor funcionale din

    molecul i de polaritatea moleculei, caracteristici care fac posibil eistena a

    dou tipuri de metode de separare+ una de repartiie ntre dou faze lichide

    nemiscibile ntre ele i a doua, de separare prin proprietatea de absorbie pe

    absorbant.. Honnett i *.M. %allams au separat carotinele de antofile prin

    repartiia etractului n faza lichid-lichid ntre eter de petrol i metanol apos (98F, c)nd antofilele trec n hipofazametanolic, clorofilele n epifaz sau de etracia unei soluii metanolice a unui

    pigment cu eteri de petrol, p)n c)nd toate clorofilele sunt terminate. n ambele

    cazuri antofilele din hipofaz au fost trecute n eter etilic i apoi splate cu ap.

    H.I. 'avies a efectuat se pararea pigmenilor carotenoidici

    nesaponificabili din etract n eter de petrol prin agitarea ntr-o p)lnie de

    separare, conin)nd metanol 96F c)nd toate antofilele coninute n etract cu Asau mai multe grupe 2I sau grupe carbonil au trecut n faza metanolic. n

    epifaz au rmas carotenele, cetocarotenoidele, epoizii, eterii i esterii

    carotenoidici. 'in hipofaz, fraciunea metanolic, carotenoidele s-au trecut n

    eter etilic apoi au fost splate cu ap i uscate. -a constatat c cea mai

    important tehnic de izolare a carotenoidelor n stare pur este cromatografia pe

    coloan.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    29/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    29

    . /iaaen-Lensen i *. Lensen au utilizat ca procedeu pentru separarea

    carotenoidelor cromatografia inzone, c)nd amestecul de carotenoide aflat ntr-un

    solvent nepolar a fost aplicat n partea superioar a coloanei, pentru developare

    fiind utilizat un solvent potrivit p)n la separarea zonelor pe coloan. Coloana a

    fost demontat, absorbantul selecionat pe zone i fiecare zon eluat individual

    cu un solvent polar. =. Hritton a aplicat ca procedeu de separare pe coloan

    cromatografia eluiei n trepte, c)nd proba de amestec a pigmenilor este aplicat

    n partea superioar a coloanei n solvent nepolar (eterul de petrol!, iar coloana

    este splat prin developare cu solvent, n care solventul polar este mrit treptat.

    Pigmenii sunt eluai n mod succesiv, n ordinea creterii activitii lor deabsorbie, de la zona de &os spre cea de sus a coloanei i colectai sub form de

    eluat. 3iecare zon eluat a fost evaporat la sec, redizolvate ntr-un volum mic

    de solvent, n vederea eaminrii prin recromatografierea pe coloan,

    spectofotometrice.

    :. tahel a efectuat separarea pigmenilor carotenoizi prin metoda

    cromatografiei pe strat subire. Probele individuale care au fost separatepreliminar prin cromatografia pe coloan au fost n continuare cromatografiate pe

    strat subire utiliz)nd ca absorbant silicagel =, la care s-a adugat o soluie de 4F

    hidroid de potasiu. :luarea a fost efectuat cu eter etilic, sau eter etilic ce

    conine

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    30/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    30

    rezultate au fost obinute cu un etract galben B%P i cu un P=. n toate

    etractele au fost prezente flavonoidele, inclusiv n etractul *=. au fost prezeni

    acizii fenolici cu ecep

    Ba acidului o-hidroifenilacetic. :tractul *= conine puini

    carotenoizi. Coninutul de tanin i oleanozide a fost crescut n etractul *=. dup

    o perioad de stocare de 5-A8 ore, componentele etractului s-au schimbat,

    etractul av)nd proprieti organoleptice bune. @EE@.

    3.3.4. &ol 0iziolo-ic

    olul i funciile pigmenilor carotenoidici constituie cea maiimportant latur a lor, fapt pentru cate li se i &ustific prezena n organismele

    vii.

    Carotenoidele n organismul uman constituie sursa de retinol. Bau parter

    la colorarea pielii, ceea ce a dus la utilizarea lor ca ageni fotoprotectori n boli

    fotoreceptoare i chiar ca ageni anticancerigeni. Heta-carotina este cea mai

    important, predomin)nd n legume, fructe i zarzavaturi, care sunt consumate deom i din aceast cauz, fiind provitamina *, are cea mai mare activitate

    biologic.

    s-a fcut o corelaie ntre carotenodermie cu valori sczute i diferite

    boli infecioase, cum sunt malaria, pneumonia, gripa, etc., s-a sugerat ca

    nivelurile crescute ale carotenemiei pot preveni infeciile. :ist de asemenea o

    corelaie ntre carotenemie i bolile de ficat. Pacienii cu astfel de afeciuni au ocarotenemiei sczut, datorit capacitii reduse de absorbie a carotenelor

    cauzate de leziuni al eficatului.

    Pigmenii carotenoidici au proprietatea de a prote&a hematiile

    mpotriva fotohemolizei induse de un pigment porfirinic eogen sau endogen.

    Carotenoidele sunt utilizate n industria farmaceutic, cu precdere pentru

    colorarea unor preparate farmaceutice, c)t i pentru deinerea unor preparate

    tonice i dietetice regenerative.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    31/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    31

    '.4. Aci% ascorbic 5)ita-ia C6

    3.4.1. Surse" 0actori ce in0lueneaz coninutul de acid ascor$ic

    :ste foarte rsp)ndit n regnul vegetal, unde se gsete n toate plantele

    superioare i n unele plante inferioare. 3oarte bogate n vitamina C sunt fructele

    multor plante (yrciaria glomerata+ A,8-A,;F!, dar i unele frunze (Vicia

    amoenas!. n cantiti mari se mai gsete n fructele de ardei, coacze negre,

    mce, nuci necoapte, lm)i, mandarine etc.

    n urma studiilor efectuate de L.=. Good i '.I. Cruic?shan? n E988,de 0a?euchi n E9

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    32/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    32

    prezena luminii i de cantiti catalitice de metale, este oidat de oigenul

    atmosferic n acid dehidro-/-ascorbic, datorit pierderii celor doi atomi de

    hidrogen de la gruprile enolice. 2idarea are loc repede sub aciunea unor

    oidani slabi. *genii reductori, chiar slabi reoideaz acidul dehidroascorbic,

    n acid ascorbic. 2idanii mai puternici determin o scindare a moleculei

    acidului dehidroascorbic prin ruperea legturii ntre CAi C4, cu formarea de acid

    oalic i acid /-treonic.

    n plante oidarea acidului ascorbic este catalizat de ascorbinoidaza

    i reducerea acidului dehidroascorbic este catalizat de ctre ascorbin-reductaza.

    Prin intervenia ascorbinreductazei, dup %. Uamaguchi i %.*. Locel1n, E9

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    33/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    33

    Conform patentului francez numrul E644685 din A4@6A@E96F

    ap

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    34/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    34

    scorbut, caracterizat prin hemoragii la nivelul gingiilor (gingivite!, apariia de

    hematoame, tulburri digestive, anemie, stri de subfebrilitate, etc. 0ransformarea

    reversibil a acidului ascorbic n acid dehidroascorbic se face mai uor prin

    intermediul glutationului i respectiv a diglutationului. @E5@

    '.7. U#ei&ri#e $rase 5#i(i%e )e$eta#e6

    3.5.1. Structur #i proprieti 0izicocimice

    /ipidele sunt substane de rezerv formate din esteri ai glicerinei cu

    diferii acizi grai. *cizii grai sunt alifatici i pot fi saturai (acidul butiric,capronic, lauric, palmitic i stearic! sau nesaturai (acidul oleic, linoleic etc.!. Prin

    saponificarea acestora trigliceridele se pun n libertate compusul alcoolic,

    glicerina.

    $leiurile grase prezint o serie de proprieti fizico-chimice comune.

    unt lichide nevolatile (uleiuri fie!, grase la pipit, care nu se amestec cu apa,

    dar sunt solubile n benzen, cloroform, eter, sulfur de carbon, eter de petrol,benzin, etc. Cu ecepia unor uleiuri grase (ulei de ricin! sunt greu solubile sau

    insolubile n alcool etilic. Culoarea glbuie a unor uleiuri vegetale se datoreaz

    coninutului lor n carotenoizi. $nele uleiuri grase ntinse ntr-un strat subire

    rm)n lichide (uleiuri nesicative!. *lte uleiuri se transform cu timpul ntr-o

    mas elastic (uleiuri sicative!, proprietate pentru care sunt utilizate n diferite

    scopuri tehnice.

    3.5.2. Surse. Factori de in0luen. &ol 0iziolo-ic.

    $leiurile grase se gsesc n cantiti mari (46-

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    35/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    35

    etc. $leiurile grase n componena crora intr acizii grai nesaturai ntr-un

    procent mai mare, &oac rolul vitaminei 3. n ultimii ani se consider c lor le

    revine un rol important n metabolismul colesterolului, fiind apreciat n

    prevenirea i tratamentul *.0.. $nele uleiuri vegetale sunt utilizate ca i

    medicamente coleretice sau purgative.

    *lturi de trigliceride n plante se gsesc n cantitate mai mic steride,

    compui n care componentul alcoolic este fitosterolul sau alt alcool steroidic.

    teridele se deosebesc de uleiurile grase prin lipsa proprietilor de saponificare

    n mpre&urrile n care se saponific trigliceridele. :le formeaz fraciunea

    insaponificabil din diferite uleiuri grase.L. 0uroJs?a urmrete variaiile sterolilor liberi i obligai n

    Calendula officinalis n timpul creterii. tudiul distribuiei sterolilor n timpul

    creterii plantelor arat c perioada germinaiei a fost caracterizat prin hidroliza

    esterilor sterolici, a sterolilor liberi. Perioada nfloririi este caracterizat prin

    acumularea esterilor sterolici, sterol-glicozidelor i sterolilor liberi n toate

    organele plantei, particular n flori. Perioada senescenei este caracterizat prinhidroliza esterilor sterolici n lstari i prin esterificarea sterolilor n rdcini i

    semine. @E;@

    G. aniszoJs?a epune rezultatul cercetrii localizrii intracelulare a

    biosintezei tocoferolului n Calendula officinalis. (4I! fitol a fost administrat

    protoplatilor din frunze i din fraciile subcelulare, etichet)nd dinamica ;-

    monometiltocolului, >-monometiltocolului, ;,>-dimetiltocolului i ,-trimetiltocolului i relaia fitilchinonelor la fel de bune ca a vitaminei ME. Prin

    condensarea cu acid homogentisic au fost formulai doi izomeri

    metilfitilchinone(A-metil-@

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    36/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    36

    Conform studiului realizat de .C. Hadami, uleiul din seminele de

    glbenele conine monohidroiacid n proporie de aproimativ

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    37/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    37

    unt substane care pot fi utilizate la tbcirea pielii. :le prezint proprietatea

    comun de a precipita proteinele, alcaloizii i acetatul de plumb. =ustul lor este

    astringent.

    'in punct de vedere chimic materialele tanante aparin grupei

    polifenolilor i pot fi de dou tipuri+ compui formai din fenoli prin esterificare,

    n unele cazuri n combinaii cu glucidele i compui cu nucleu condensat.

    ubstanele din prima categorie pot fi hidrolizate prin fierbere cu acizi minerali.

    ubstanele din categoria a doua conin nuclee flavonoide, sunt nrudite cu

    catechinele i antocianinele i spre deosebire de substanele din grupa precedent,

    nu pot fi hidrolizate cu acizi. n urma nclzirii uscate primele dau pirogalol, leconin, materialele tanante produc reacii de culoare cu srurile de metale grele.

    n prezena clorurii ferice, materiile tanante hidrolizabile dau o coloraie sau un

    precipitat albastru p)n la negru, iar cele cu nucleu condensat, o coloraie n

    verde. %ateriile tanante acioneaz asupra mucoaselor, coaguleaz proteinele i

    n consecin prezint o aciune hemostatic. @E@

    3.6.2. /etode de etracie" separare" dozare #i identi0icare

    0aninurile din produsele vegetale au o constituie foarte variat i

    prezint tendina de a se condensa i de a se oida, structura lor at)t n produsul

    vegetal c)t i n soluiile etractive se modific n timp, iar activitatea astringent

    a preparatelor nu este legat de cantitatea de taninuri.

    0aninurile sunt solubile n ap, alcool, glicerol, aceton, puin solubilesau insolubile n eter, cloroform, benzen, n soluii alcaline sau acide, sub

    aciunea luminii i a oigenului se descompun repede. G. /ang n studiile sale a

    artat c un reactiv general pentru taninuri este acidul fosfoJolframic. Pentru a

    mri specificitatea acestei reacii, autorul procedeaz n prealabil la o precipitare

    a taninurilor cu acetat de zinc n mediu amoniacal, apoi separ precipitatul, pune

    taninurile n libertate cu acid sulfuric diluat i trateaz n mediu slab alcalin cu

    acid fosfoJolframic, c)nd s eobine o coloraie albastr, datorit aciunii

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    38/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    38

    reductoare a acestora. Prin acest procedeu sunt eliminate substanele strine care

    pot falsifica rezultatele+ glicozidele polifenolice nu sunt precipitate cu acetatul de

    zinc, flobafenele dei sunt precipitate nu se dizolv n acid sulfuric diluat.

    $n procedeu analog care folosete pentru identificare reactivul arsen

    Jolframic a fost propus de =. =rieger. 0aninurile au fost precipitate cu acetat de

    plumb i gelatin, separate prin centrifugare i aduse din nou n soluie cu

    a&utorul acidului fosforic. oluia limpede, sau clarificar prin filtrare a fost

    tratat cu reactiv arsen Jolframic p)n la apariia unei coloraii albastre.

    eactivul a fost preparat prin nclzirea n reflu timp de A ore a amestecului

    format din E66g Jolframat de sodiu, 46 g acid arsenic,

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    39/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    39

    3..1. &spndire

    Proteidele sunt componente nelipsite ale oricrei celule vegetale sau

    animale. :le se gsesc n cantitate mare n nucleul celular i formeaz mare mas

    a protoplasmei celulare. Proteidele se gsesc i n sucurile care circul n

    organismele vegetale, n general n toate organele plantei, n cantitate mai mare

    afl)ndu-se n semine. n organismele vii proteidele prezint caractere coloidale.

    3runzele plantelor tinere conin 46-86F proteide din substana uscat, dar

    coninutul lor scade la mbtr)nire.

    3..2. /etode de izolare" puri0icare #i dozare

    Proteidele solubile se etrag din esuturile fin divizate, cu ap sau

    soluii de sruri sau de alcali, corespunztor solubilitii diferitelor proteide.

    Proteidele greu solubile se etrag cu acid formic sau cu soluie de uree,

    guanidin, proidin, etc., c)teodat cu acizi minerali tari. :tragerea se face n

    toate cazurile la temperatur &oas i repede.'in soluii proteidele por fi precipitate prin coagularea soluiei

    concentrate sau prin precipitarea cu alcooli sau aceton. Pentru a separa

    proteidele ntre ele i totodat de substane strine, se folosete mai frecvent

    metoda precipitrii fracionate cu sulfat de amoniu sau sulfat de magneziu de

    diferite concentraii, sau precipitarea fracionat cu alcool sau aceton. 2binerea

    proteidelor n stare perfect pur este de cele mai multe ori o operaie dificil, carenecesit aplicarea succesiv a mai multor metode. 2 serie de proteide se pot

    separa n stare cristalin, dar cristalele au de multe ori o structur neunitar,

    datorit faptului c proteide diferite pot cristaliza mpreun. Bdentificarea

    proteidelor se face prin reacii caracteristice de culoare i de precipitare.

    'ozarea proteidelor din materiile vegetale se face de obicei pe baza

    determinrii coninutului n azot dup metoda M&eldahl. ezultatele care se obin

    n urma degradrii materiilor vegetale, dup M&eldahl, prezint proteide numite

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    40/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    40

    brute, pentru c azotul determinat nu provine eclusiv de la proteide, ci de la alte

    substane azotate. Pentru determinarea proteidelor pure, ele trebuie separate de

    celelalte substane prin precipitare cu reactivi specifici, ca de eemplu cu

    hidroid de cupru, acetat de plumb, alcool ;>F etc. Proteidele digestibile se

    determin n condiii de digestie eperimental, prin hidroliza cu pepsin n

    mediu acid.

    3..3. &ol 0iziolo-ic

    Proteidele sunt substane indispensabile pentru orice organism viu.

    $nele proteide constituie elemente structurale ale tuturor celulelor, altele suntsubstane de rezerv i substane cu activitate biologic ridicat. /a unele plante

    s-a constatat c substanele proteice din frunze pot fi folosite ca substrat

    respirator.

    CAPITOLUL I:. CONCLUZIILE /TUDIULUI DE

    LITERATUR

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    41/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    41

    n urma studiului efectuat se poate constata c utilizarea florilor de

    glbenele este relativ veche, ele reprezent)nd o surs inepuizabil de principii

    activi, cu deosebit importan n practica farmaceutic, cosmetic i chimic.

    3iind o plant eistent n flora spontan i cultivat a rii noastre,

    puin pretenioas la condiiile de mediu, cultivat i n c)mpia de vest, prezenta

    lucrare de diplom i-a propus s+

    -efectueze studii fitochimice referitoare la principii activi ai florilor de

    glbenele+ saponozide triterpenice, carotenoide (licopina, alfa i beta caroten,

    noelicotina *, rubiantina, luteina, antofila, violaantina, flovoantina!,

    flavonoizi i glicozizi flavonici, rutinozizi, mucilagii, esteri colesterinici aiacizilor lautic, miristic, palmitic i margaric vitamina C, acid malic, substane

    proteice, calendulina i altele.

    -stabileasc condiiile optime de etracie integral a principiilor activi.

    CAPITOLUL :. REZULTATE. DI/CUII. CONTRIBUII

    ORIGINALE

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    42/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    42

    7.1. Ob+ierea etracte#or

    n acest scop s-au folosit flori de categoria a BB-a (pierderi de umiditate

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    43/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    43

    E6 6,56< E;,E; 4,46A6 6,;65 E;,;5 4,>446 6,>96 E;,>6 4,9886 E,6E6 E;,;4 8,68

    ,6 E,685 E9, 4,9A96 E,6E; A6,E8 4,A4

    E66 6,856 8E,>6 4,EA

    !.".".#. acerarea etanolic

    -au abordat macerate cu un raport de etracii E+< p)n la E+E6 nconcentraii decalare de :t2I. $n randament optim s-a atins la E+< cu :t2I 6F vol. 'ac n cazul maceratului metanolic am vzut c pentru %e2I 96F

    fa de %e2I E6F coninutul de % este de A, n cazul celor etanolice relaia

    este invers. chimbarea raportului de etracie este E+E6 duce la mbuntiri

    nesemnificative ale randamentului care nu &ustific efortul depus (0abel A!.

    a$elul 2

    EtO; )o# E 0#a)ooi%e -$ Co+i&t etract&i

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    44/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    44

    aport de etracie E+ E,;

    E6 6,8A4 6,4;EE< 6,8A4 6,4;EA6 6,8A8 6,4;A

    7ici n :t2I apos nu s-a nregistrat o umflare puternic a materialului

    mrunit ca la macerat, ns totui prezent. 'in reziduul etraciei aproape c nu

    s-a putut recupera prin presare solvent nc)t este suficient o cltire a florilor

    mrunite.Culoarea etractelor a virat de la galben-deschis p)n la galben intens.

    /a :t2I E6F, etractul apos galben deschis a fost tulbure i nu s-a putut filtra.

    2ptimul randament n flavonoide s-a obinut cu :t2I E6 6,5; AA,46 A,66A6 6,96 44,86 4,;A46 E,E4 8E,6> ,A5 8,;E

    6 6,99 45,66 4,AA96 6,>E A5,46 A,AE

    E66 6,8< E;,56 E,

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    46/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    46

    Prepararea percolatelor s-a fcut dup o modificare a prescripiei

    clasice, deoarece aceasta nu este economic pentru o producie de mare tona&. -a

    urmrit reproducerea condiiilor industriale la scar mic.

    eferitor la culoare i intensitate, percolatele s-au comportat ca i

    maceratele i turboetractele. 'eosebit de mare este coninutul de escin n

    percolatul apos, care cu valoarea de 6,;>F reprezint aproimativ E6 6,9A

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    47/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    47

    Meto%a Esci!

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    48/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    48

    pur (lu)nd n considerare coninutul de ap al substanei! date insuficient

    reproductibile pentru o determinare eact.

    %ar&a de eroare apreciat la S

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    49/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    49

    a$elul %

    /&rsa E 0#a)ooi%e $..*.H. >,;5 6,A;H$B*V 8,A< 6,AE

    '2%*7:* >,85 6,A;%2V7BW* >,6; 6,A5H2CV* 5,AE 6,A4H:2B* 5,E; 6,A83BHBV A 6,AE3X=:0 /$=2L 5,6E 6,E9*C$ , se va lua n considerare urmtorul tabel

    adiacent+

    Meto%a %e i*o#are 0#a)ooi%e 56:tracie cu ohlet (E6 ore! 6,A4>-6,A83lavonoide(n rutozid!

    Caroteni (betacaroteni!

    :ter de

    petrol

    [email protected]. :tracie

    nohlet

    P)n la

    epuizare

    - 6,E68;

    cloroform [email protected]. :tracienohlet

    P)n laepuizare

    - 6,6E59

    *lcool E66@E66 refluare - 6,4< -

    n scopul realizrii unor randamente superioare s-a ales raportul

    drog@solvent de 0#a)oe 53

    r&to*i%6Carotei 53 betacarotei6

    *lcool E6@E66 6,A9E5 -alcool E6@E66 6,A8,A u putere ionic 6,E 6,E< E9 - EA,< - ,6

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    54/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    54

    5,> 6,A6 E9 - E8,; - 5E,4 - A8,6>,A 6,E< E> -;,9 E;,6 -;,4 8,6>,A 6,E< - - AE,> - 44,5 - 88,5>,9 6,E< E; - EE,< - 84,6 - 8 globulinele s-au

    separat n 4 componeni.

    Pentru a stabili dac eist A sau 4 componeni globulinici independeni

    mi-am propus s fracionez globulinele prin metoda desalifierii prin dializ.

    Proteina s-a etras n 7aCi 6,

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    55/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    55

    *moniu 9,A 6,6;< * *E*A

    -E4,6-E,6

    5;,44A,;

    *cetat 4,> 6,E66 * *E*A

    -E,>4E,A

    *moniu 9,A 6,6;< * *E*A -- ;6,646,6 Pe h)rtie

    amoniu 9,A 6,6;< H HEHA

    -E6,6-6,5

    ;;, 6,E66 H HE

    HA

    -

    -

    56,>

    49,A

    Pe h)rtie

    *cetat- 5,9 6,EoC.

    'ei rezultatele analizei electroforetice arat c globulina * i H sunt

    proteine independente, am considerat c cele 4 globuline reprezint componente

    independente eistente fraciunile electroforetice ale globulinelor * i H nu pot fi

    afectate deoarece ele nu au fost prelucrate cu solveni organici care pot producemodificri n structura lor. Pentru a arta c aceste 4 globuline sunt componente

    dine definite, deosebite una de cealalt am recurs la analiza lor cromatografic i

    polarografic. Cromatografia unidimensional, descendent a aminoacizilor

    provenii prin hidroliza acid a acestor 4 globuline a artat c ele posed

    urmtorii aminoacizi comuni+ acid aspartic, glicocol, histidin, serin, valin,

    plus metionina i leucina plus izoleucina.n afara acestora, fiecare globulin posed aminoacizii specifici+

    -globulina *+ acid glutamic, alanin, prolin.

    -globulina H+ alanin, cistin T cistein, fenilalanin.

    -globulina C+ acid glutamic, arginin, fenialanin.

    'eterminrile polarografice s-au efectuat ntr-o soluie test Hrdic?e cu

    cobalt trivalent. emnalul treapt proteic are o nlime i un aspect diferitpentru cele trei globuline la aceiai concentraie de 4,5 E6-4gF (tabelul E8!

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    56/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    56

    a$elul 14. .

    7econcordana dintre numrul de fraciuni obinute prin analiz

    electroforetic a proteinelor totale i cel obinut prin analiza electroforetic

    separat a albuminelor i a globulinelor se poate eplica prin capacitatea redus

    de separare a aparatului de electroforez de care dispunem. Prin tehnica pe h)rtie,

    proteinele totale dei se separ n trei fraciuni curbele electroforetice au o

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    57/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    57

    asimetrie evident care ne-a sugerat c proteina total a fost dovedit prin

    ndeprtarea unei cantiti de globulin din etract prin dializ. Pe msur ce

    cantitatea de globulin ndeprtat crete, analiza electroforetic pune n eviden

    un numr mai mare de fraciuni. 'up E6 ore de dializ s-au evideniat < fraciuni

    proteice dintre care A cu mobilitate mai mare sunt componente albuminice, iar

    celelalte 4 cu mobilitate apropiat sunt probabil globulinele *, H, C. rezultatele

    acestor determinri au ntrit convingerea c n florile de Calendula eist 4

    componeni globulinici i cel puin A componeni albuminici.

    7.'. cerc!ri c& %e(o*itare

    Cu probele culese am fcut ncercri de depozitare timp de peste E6

    luni. Probele au fost mprite n 4 categorii+ o parte n stare normal, o parte

    mrunit i uscat la temperatura camerei, iar a treia parte uscat la 86oC (dup

    mrunire! i apoi mcinate n moara cu ciocnele.

    n urma eperienelor efectuate s-a constatat c coninutul de escin iflavonoide scade n cazul probelor macerate datorit unor reacii fermentative. /a

    a doua categorie scderea ambelor valori cu toate c este mai mult sau mai puin

    semnificativ, este n ansamblu minor. /a ultima categorie, ns, nu s-a pus n

    eviden o scdere a coninutului. n concluzie, florile mrunite, uscate bine la

    aer liber pot fi ntrebuinate fr pierderi timp de un an.

    CAPITOLUL :I. PARTE EPERIMENTAL

    8.1. Meto%e %e etrac+ie

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    58/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    58

    6.1.1. 7tracia selectiv #i succesiv

    Produsul vegetal prelucrat prin etracie este utilizat pentru obinerea

    unor termoplaste i face obiectul a numeroase studii. -a urmrit realizarea unor

    soluii etractive bogate n principii activi, n condiii de etracie avanta&oas.

    n eperienele efectuate de :liza =afieanu, Boana %atei i 'orina

    /azr, acestea au ales solvenii de etracie selectivi pentru fracia hidrofila

    (flavone, glicozidele acidului oleanolic, calendulozidele, *-I, alcoolii terpenici+

    arnidiol i furnadiol! i cea lipofil (caroten, ulei volatil, esteri ai colesterolului

    cu acizii grai!. olvenii utilizai au fost+ alcoolii, propilen glicolul, cloroformul,eterul de petrol, uleiul de floarea soarelui i parafina lichid.

    Procesul prim aplicat se bazeaz pe principiul etraciei selective i

    succesive cu diferii solveni, ncep)nd cu cel mai lipofil. *cest procedeu se

    realizeaz la cald i permite o separare a principiilor activi din produsul supus

    etraciei, n funcie de caracterul lipofil sau hidrofil al acestora. Pentru etracie

    s-a folosit eter de petrol, cloroform i alcool. :puizarea produsului vegetal cu eterde petrol i apoi cu cloroform s-a realizat cu a&utorul aparatului ohlet.

    Pentru etracia cu alcool s-a recurs la refluare, din cauza punctului de

    fierbere ridicat al soluiei etractive alcoolice fa de soluia cloroformic i eter-

    petrolic. Capacitatea de etracie al solvenilor a fost apreciat prin determinarea

    cantitativ a carotenilor etrai n eter de petrol i cloroform, i a flavonelor

    etrase n alcool. Procedeul de etracie este prezentat n figura E.

    6.1.2. /acerarea

    %acerarea este unul din procedeele aplicate pe scar larg pentru

    obinerea etractului cu utilizare n dermopreparate, operaia de etracie

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    59/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    59

    realiz)ndu-se la temperatura camerei, ceea ce mena&eaz principiile active.

    Procedeul de macerare este redat n figura A.

    0i$&ra 1.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    60/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    60

    Calendulae flos

    :tracie selectiv i succesiv cu diferii solveni, ncep)nd cu cel

    mai lipofil

    :tracie cu eter de petrol la ohlet

    3 i l t r a r e

    oluie etractiv eziduu vegetal eter petrolic

    :tracie cu cloroform la ohlet

    oluie etractiv eziduu vegetal cloroformic

    :tracie cu alcool prin refluare

    'ecantare i filtrare

    oluie etractiv alcoolic

    Scema de etracie selectiv #i succesiv a produsului =)alendulae

    0los> cu di0erii solveni" ncepnd caz cel mai lipo0il.

    0i$&ra 2.

    Calendulae flos

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    61/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    61

    :tracie prin dubla macerare cu+

    *lcool etilic Cloroform

    'ecantare i filtrare

    oluii etractive oluii etractive alcoolice cloroformice

    *E *A CE CA

    eziduu vegetal eziduu vegetal

    :tracie prin macerare cu+

    $lei de floarea soarelui Propilenglicol

    'ecantare i filtrare

    oluie etractiv oluie etractiv uleioas propilenglicolic

    Scema de etracie a produsului =)alendulae 0los> prin macerare

    6.1.3. ?i-estia

    * stat la baza altor serii de etracii i s-a desfurat conform schemei

    din figura 4.

    0i$&ra '.

    Calendulae flos

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    62/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    62

    'igestie la 56oC O 5 ore cu+

    propilenglicol propilenglicol ulei de ulei de parafin Talc. benzilic EF floarea floarea lichidT soarelui soarelui alcool Talc.benzilicEF benzilicEF

    @P@ @P*@ @$@ @$*@ @P/*@

    'ecantarea i presarea reziduului, filtrare

    @P@ @P*@ @$@ @$*@ @P/*@

    8.2. I%etiicarea ,i %eter-iarea co-(oete#or

    6.2.1. /etode de recunoa#tere #i determinarea saponinelor

    /a agitarea unei soluii de : se formeaz spuma intens (efect general

    saponinic!. Pentru identificare este nevoie de compararea valorilor 3 obinute

    prin C.I. sau C... cu etaloane.

    Pentru recunoaterea aciunii hemolitice se pun cromatogramele

    developate ntre plci de gelatin sanguin, sau se stropesc cu un amestec de o

    parte s)nge defibrinat sau citrat sanguin i > pri soluie fiziologic de 7aCl.

    ensibilitatea este n domeniul 86 ug@pat./a stropirea C... cu IA28

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    63/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    63

    2 metod gravimetric dup omisch se fundamenteaz pe trecerea

    etractelor escinice n alcaliescinoli hidrosolubili. Prin adaos de ICl diluat se

    obine pp. escinolul hidrosolubil care se determin gravimetric sau alcalimetric.

    Coninutul etractelor cercetate se raporteaz la :.

    n determinarea fotometric dup 2verlach, : reacioneaz cu o soluie

    p-dimetilaminobenzaldehid+ acid acetic+ acid sulfuric. e formeaz o soluie

    violet, a crei etincie se msoar la

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    64/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    64

    unei flavonoide la nt)mplare, ca referin, dac proprietile ei de absorbie a

    luminii dup efectuarea reaciei de culoare, nu au coincis cu cele a etractelor

    escinice sau dac lipsesc date eacte referitoare la flavonoidele de determinat.

    'eoarece etractele de semine cercetate de autor au dat n condiiile reaciei

    descrise un maim de absorbie la aceeai lungime de und, pare acum dup

    cunoaterea ma&oritii flavonoidelor din semine, ntemeiata raportare la

    cvercetin.

    /a determinarea colorimetric dup omisch cu *lCl4 n tampon

    CI4C22I i gl.@P1. se calculeaz coninutul de flavonoide ca echivalent de

    rutin. %etoda se preteaz la determinarea substanei pure i a etractelor,deoarece se msoar numai intensificarea culorii prin formarea compleului de

    *l i soluia de compensare este aceeai soluie tampon flavolonic ca cea de

    msurat, ns fr adaos de sare de Cl. 'ificultatea apare la determinarea

    etractelor de semine neco&ite deoarece pigmentul co&ii chiar i n diluia

    aferent determinrii intensific culoarea, duc)nd la dificultatea recunoaterii

    etinciei. 'e fapt, nici nu este ntocmit raportarea la echivalent de rutindeoarece nu este prezent rutin n semine.

    'eterminarea colorimetric dup Iorhammer a fost propus pentru

    determinarea coninutului etractelor escinice pentru noua carte de homeopatie a

    medicamentelor n =ermania.

    'up hidroliza flavonelor, care conin drept aglicol comun cvercetina,

    urmeaz colorarea cu o soluie

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    65/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    65

    og-ului la care &umtate din c)mpurile eaminate reacioneaz n Petechien. e

    aplic animalului soluia de determinat. 'up A8 h, zonele din imediata

    vecintate din c)mpurile investigate trebuie s reziste la o solicitare og cu c.p.

    46F. 2 alt cale modificat care efectueaz testul pe partea dorsal epilat a

    obolanilor de ambele pri ale coloanei vertebrale. Vobolanii se in n prealabil

    A-4 sptm)ni la un regim scorbutigen.

    6.2.3. /etode de recunoa#tere #i determinare a alantoinei

    Bdentificarea alantoinei s-a efectuat n infuzii

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    66/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    66

    cantitile nregistrate n tabel. *bsorbana corespunztoare acestora s-a

    determinat la

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    67/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    67

    n metanol de

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    68/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    68

    '.$.".*. Percolarea

    Percolarea s-a fcut n vase cilindrice. aportul drog + solvent a fost de

    E+8. 'up umectarea n raport E+8 a materialului, masa, mai mult sau mai puin

    umflat, s-a acoperit i s-a apsat cu un strat de perle de sticl. ecipientul s-a

    umplut ncet cu etractant evit)ndu-se pe c)t posibil formarea de bule mari de

    aer. -a lsat s se stea A8 h, apoi s-a percolat cu o vitez de curgere de

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    69/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    69

    n funcie de cantitatea aplicat s-au pus n eviden 9-A6 de

    flavonoide. Pentru determinarea coninutului de flavonoide n etractele de

    semine s-a aplicat metoda Iorh?mmer.

    '.$.#.$. +dentificarea aminopurinelor

    -a fcut determinarea din eluatul coloanei supus de separare dup

    Ginterfeld. 3racia purinic captat s-a C.I. pe h)rtie chleicher and chiel

    A6684 cu sistem Hu2I@IA2@:t2I (

    adenozina, guanina i acidul uric. Pentru identificarea acidului uric /.I. a foststropit la >6oC cu o soluie (n pri egale! de reactiv 3olin-'enis i 7aAC24An

    amestecate proaspt nainte de aplicare. -a uscat cromatograma 6oC. *cidul uric s-a recunoscut printr-o pat albastr.

    '.$.#.*. +dentificarea acidului ascor&ic

    oluia apoas a acizilor carbonilici s-a tratat cu eces de ap.-au tratat srurile de bariu precipitate, s-au dizolvat n puin ap i

    s-au tratat p)n la slab acid cu IA28. Bdentificarea s-a fcut C.I. ascendent pe

    h)rtie chleicher chull A684 b cu nHu2I@CI4C22I gl.@IA2 (;+E+A!. Ca

    detecie s-a folosit n pri egale *g724. 6,E n i 7I46,E n. -a putut pune n

    eviden acid ascorbic n comparaie cu etalonul.

    '.$.#.!. +dentificarea metioninei

    Punerea n eviden a aminoacizilor n soluia mam s-a fcut cu

    soluie ninhidrin 4F. -a obinut o coloraie slab purpurie. ecunoaterea

    metioninei dup separarea flavonoidelor s-a fcut cu soluie pentacianonitrosil

    ferat (BBB! de 7a EF printr-o colorare n rou.

    '.$.#.'. +dentificarea aneurin/Cl

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    70/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    70

    Bdentificarea s-a fcut dup separarea colinei cu MA@3e (C7!4 soluie

    proaspt, prin formarea unei fluorescene albastr violet, care a reaprut la

    adugarea de A picturi M2I E n.

    '.$.#.0. +dentificarea colinei

    -a fcut din etractul pur i identificat ca picrat (pentru A4;-A49oC!.

    CAPITOLUL :II. CONCLUZII 0INALE

    n urma studiului pe care l-am efectuat i a analizei de ansamblu a

    rezultatelor nregistrate n cursul cercetrilor ntreprinse pentru realizarea unor

    soluii etractive din florile de Calendula officinalis bogate n principii activi, se

    desprind urmtoarele concluzii+

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    71/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    71

    -s-a efectuat un studiu al condiiilor de etracie n care s-a inut seama

    de compoziia chimic comple a produsului vegetal, natura solventului i

    metodele de etracie

    -s-au utilizat solveni de etracie care s fie c)t mai selectivi i s nu

    determine combinaii chimice cu componenii principiilor activi, s asigure

    stabilitatea soluiei etractive n timp

    -eficiena solvenilor i a procedeelor de etracie aplicate au fost

    apreciate cantitativ i calitativ prin determinarea coninutului n flavone,

    eprimate n rutozid, i a coninutului de caroten, eprimai n Z-caroten

    -a fost verificat eficiena unor procedee de etracie (macerareametanolic, macerarea etanolic, turboetracia, percolarea! i eficiena

    solvenilor, procedeul de etracie prin macerare dovedindu-se a fi cel mai

    eficient.

    BIBLIOGRA0IE

    E. :'2CIB* C2BCB$ =*HB:/ *C O "Plantele medicinale i

    aromatice#, :ditura *cademiei .P.., E95A.

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    72/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    72

    A. C270*70B7:C$, =. :/:7* I*WB:=*7$ H$$B*7X O "

    ne cunoatem plantele medicinale, proprietile lor terapeutice i modul

    lor de folosire#, :ditura %edical, E9>;.

    4. "0ehnologii cadru ale plantelor medicinale i aromatice#, :ditura Ceres,

    E994.

    8. CXCB$7, 3 H$L2, 2. */:[*7, %. O "3armacia naturii#, :ditura

    Ceres, E9;5.

    . Chemical abstract, olumul E64, nr.E

  • 8/11/2019 Metode de Extractie

    73/76

    U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA

    73

    A4. 3armacologia, nr.8, :ditura %edical, E9>;.

    A8. LB*7$, B. O "Curs de chimie i biochimie vegetal#, anul universitar

    E996-E99E, B.*.0.

    ot $i$lio-ra0ia sa citat n ordinea utilizrii n prezenta lucrare de

    diplom.

    CUPRIN/

    Ca(.I. Itro%&cere. Geera#it!+i. E

    Ca(.II. Pre*etarea (rob#e-ei...