8/11/2019 Metode de Extractie
1/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
1
CAPITOLUL I. INTRODUCERE. GENERLITI
Plantele medicinale i aromatice au utilizri multiple, cu grade foarte
diferite de prelucrare. Cu produsele obinute din ele se asigur n principal
satisfacerea necesarului industriei chimico-farmaceutice autohtone, ca i
solicitrilor populaiei pentru o gam variat de sortimente (plante medicinale n
stare uscat i amestecuri de plante pentru ceaiuri, produse cosmetice cu etracte
din plante, siropuri, .a.!.
Produsele brute medicamentoase de origine vegetal, sau "drogurile#
vegetale se ntrebuineaz n scopul punerii n valoare a substanelor pe care le
conin cu deosebite caliti terapeutice. $tilizarea produselor vegetale poate fi
legat de proprietile lor fizice, cum este cazul sporilor de cornior (Lycopodium
sp.! sau a perilor seminelor de bumbac (Gossypidium sp.!. %a&oritatea
produselor sunt folosite ns pentru aciunea lor terapeutic, atribuit unor
principii active. 'in punct de vedere farmacodinamic, respectiv terapeutic, rolul
principiilor activi poate fi &ucat de o singur substan sau de un comple desubstane. Principiul sau principii activi pot fi etrai, respectiv izolai din
produsul vegetal i ntrebuinai ca i substane chimice pure. Prin sinteza
organic s-a a&uns la obinerea pe cale industrial a unui numr nsemnat de
principii activi. n unele cazuri., aceti produi de sintez au nlocuit ntr-o
msur mai mic sau mai mare produsul vegetal, de eemplu ma&oritatea
vitaminelor. n alte cazuri ntrebuinarea produsului natural continu s fie mairentabil din punct de vedere economic dec)t obinerea pe cale sintetic a
principilor activi, de eemplu ma&oritatea alcaloizilor. $tilizarea produsului
vegetal poate fi preferat fa de substana chimic pur i din punct de vedere
terapeutic. n acest caz produsele vegetale se prefer pentru compleitatea
aciunii, asigurat de sinergismul diferiilor compui. *stfel, de eemplu, morfina
sau atropina obinute din plantele respective prezint o alt aciune dec)tetractul de opiu sau beladon.
8/11/2019 Metode de Extractie
2/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
2
'in momentul n care s-a a&uns la cunoaterea structurii chimice a
principiilor activi s-au lrgit posibilitile de valorificare a acestora prin+
-ntrebuinarea unor preparate farmaceutice, numite i galenice,
obinute dintr-un drog vegetal, de preferin cu un coninut prevzut de principii
activi
-ntrebuinarea unui comple de principii activi obinut prin
ndeprtarea substanelor inactive numite substane balast
-ntrebuinarea unui singur component considerat ca cel mai important
dintre principii activi ai produsului respectiv
- ntrebuinarea unui principiu activ obinut prin sintez.Procentul la care a&ung principii activi n diferitele organe ale aceleai
plante variaz n limite largi. $nii compui se gsesc practic n toate esuturile
plantei respective, alii sunt localizai aproape n ntregime n anumite organe sau
esuturi.
alorificarea raional a plantelor medicinale necesit cunoaterea
localizrii precise a principiilor activi. Prezena diferiilor compui sau aesuturilor (metode citochimice i histochimice!. tudiul structurii microscopice
i a localizrii principiilor activi intr n domeniul cercetrilor de farmacognozie.
/ocul n care un principiu activ apare n cadrul organismului vegetal
depinde n primul r)nd de rolul pe care acesta l &oac n metabolismul plantei.
Pentru a putea a&unge la mrirea coninutului de principii activi este
necesar s se cunoasc toi factorii care influeneaz biogeneza principiilor activi.%etode de analize fotochimice, absolut necesare pentru studiul
plantelor medicinale i aromatice sunt cuprinse n tratatul lui Paech i 0race1.
2 mare parte a principiilor activi sunt considerai ca "substane
secundare#, care se formeaz n cursul proceselor de desimilaie.
Principal, fiecare celul vie poate s elaboreze diferite substane de
acest gen. n multe cazuri, ns producerea masiv a acestora are loc n celulele
difereniate n acest scop, care se cunosc sub numele de esuturi de secreie.
8/11/2019 Metode de Extractie
3/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
3
Clasificarea principiilor activi poate fi fcut dup natura lor chimic,
dup proprietile lor fizico-chimice i dup nsuirile lor biologice. $nele grupe
de principii activi sunt mai multe sau mai puin unitare din punct de vedere
chimic, n privina unei grupe funcionale sau n privina nucleului care st la
baza formulei structurale.
*lte categorii de compui naturali heterogeni din punct de vedere
chimic, dar mai mult sau mai puin unitare n privina proprietilor fizico-
chimice. *lte grupe de principii activi se stabilesc pe baza proprietilor biologice
pe care le prezint, ca de eemplu antibioticele sau vitaminele. n anumite cazuri
criteriul unitii de structura i al aciunii biologice se suprapun.Clasificrile actuale ale principiilor activi se bazeaz pe trei criterii+
natura chimic, proprietile fizico-chimice i aciunea biologic. Cele mai
importante grupe de principii activi sunt+ glucidele, pectinele, mucilagiile i
gumele, uleiurile grase, uleiurile eseniale, rezinele, acizii organici, glicozidele,
saponinele, materiile tanante, principiile amare, vitaminele, alcaloizii, coloranii
vegetali, antibioticele i fitoncidele, substane minerale.Cercetrile de laborator efectuate au stabilit c+ -n imensa ma&oritate a
cazurilor, cantitatea de principii activi nu este aceeai n toate organele unei
plante medicinale, ntr-un organ acumul)ndu-se n concentraia cea mai mare, n
altul mai mic, i n altul chiar poate lipsi sau eista n cantitate negli&abil. 'e
aici rezult c trebuie s se cunoasc cu suficient precizie organul sau organele
cele mai bogate n principii activi, deoarece numai aa se va obine un produsvegetal cu eficien terapeutic nu numai cert, dar i constant.
-cantitatea de principii activi din organul plantei cel mai bogat n ele nu
este aceeai n tot timpul anului i variaz n funcie de etapele sezoniere de
vegetaie ale plantei, gsindu-se n concentraie maim numai ntr-o anumit
perioad a anului, care trebuie s fie i timpul de recoltare al acestui organ,
alegerea momentului optim de recoltare fiind deosebit de important pentru
obinerea produselor de calitate superioar
8/11/2019 Metode de Extractie
4/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
4
-stabilitatea n timp cantitativ i calitativ a principiilor activi dintr-un
organ de plant recoltat la timpul potrivit depinde pe de o parte de modul de
uscare al lui, iar pe de alt parte, de condiiile n care este pstrat.
3itoterapia i fitochimia reprezint azi o valoroas surs de inspiraie
pentru cercetrile fundamentale din domeniul medicamentelor. 'up ce s-a izolat
un principiu activ din plant i i s-a stabilit structura, se poate realiza nu numai
molecula iniial prin sinteza chimic, ci se poate obine i derivai cu o structur
asemntoare pentru a gsi alte medicamente valoroase.
Plantele i respectiv drogurile aromatice, c)t i uleiurile volatile
obinute din acestea sunt folosite pe scar industrial numai n scopurifarmaceutice, dar i n urmtoarele domenii+ parfumerie, cosmetic, industria
spunurilor, pentru aromatizare, industria alimentar, la aromatizarea unor
dulciuri, buturi alcoolice i n cantitate de condiment la obinerea diferitelor
produse de carne, etc.
n prezentul proiect de diplom se va face un studiu fitochimic asupra
plantelor de glbenele, Calendula Officinalis, prezent)ndu-se principii activi,importana i utilizarea lor.
8/11/2019 Metode de Extractie
5/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
5
CAPITOLUL II. PREZENTAREA PROBLEMEI
n flora rii noastre, care numr aproimativ 4566 de specii de plante
superioare, se nt)lnesc reprezentani ai plantelor medicinale i aromatice.
7umrul lor se ridic la aproimativ 866, ceea ce nseamn c din 9 specii care
cresc pe teritoriul rii noastre, una i gsete utilizri n medicin.
Primele mrturii scrise asupra teritoriului i oamenilor pm)ntului
rom)nesc atest, c nc de pe timpul dacilor plantele medicinale erau cunoscute
i folosite. mbogit ulterior cu noi cunotine, tradiia medicinii populare s-a
perpetuat din generaie n generaie, iar n ultimul secol aceasta se mpletete cu
studiul aprofundat al plantelor medicinale i aromatice.
'in aceast mare varietate de specii de plante medicinale i aromatice,
ca material de studiu s-a ales Calendula officinalis (glbenele!. 2riginar din
udul :uropei, la noi se cultiv de mult timp ca plant ornamental. Prin cultur
s-a produs o serie de varieti decorative. n scopuri medicinale se folosesc numai
varietile caracterizate prin flori duble de culoare galben-portocalie.
2.1. Descriere botaic!
pecie anual (rarbienal!, cu rdcina
pivotant tulpina nalt p)n la ;< cm,
puternic, ramificat i proas, are frunzele
oblonglanceolate alterne, sesile. 3lorile sunt
grupate n capitule terminale mari, prezint
flori ligulate, tridintate pe margini, de culoare
galben-portocalie i flori centrale tubuloase
de culoare galben. nflorete din mai p)n n septembrie.
8/11/2019 Metode de Extractie
6/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
6
e utilizeaz ca produs vegetal fie numai florile marginale (Flores
Calendulae sine receptaculis!, fie ntregul capitul (Flores Calendulae
cumreceptaculis!. *mbele produse au miros slab aromat, gust amrui srat.
2.2. Te"o#o$ia %e ct&r!
2.2.1. Soiul cultivat
n prezent n ara noastr se cultiv soiul "Plamen# cu inflorescene
mari, involte, portocalii.
2.2.2. Amplasarea culturii
=lbenelele nu sunt pretenioase fa de temperatur i umiditate.
e dezvolt mulumitor pe toate tipurile de sol, prefer)nd soluri ad)nci,
bogate, af)nate, cu umiditate suficient, care se nclzesc uor. n asolament pot
urma dup orice cultur pritoare anual. 7u se recomand monocultura pentru
a preveni atacul bolilor i duntorilor. 7u vor reveni pe acelai teren maidevreme de 8 sau < ani.
2.2.3. Fertilizarea
*dministrarea ngrmintelor fosfatice contribuie la sporirea
numrului de inflorescene pe plant i la prelungirea duratei de nflorire, dac se
aplic n doze de 56->6 ?g@ha fosfor .a. mpreun cu ngrmintele cu azot.ngrmintele cu azot se recomand a se aplica n doz de 86-8@ prin reacii de hidroilare,
dehidroilare, metilare sau demetilare, unii reprezentani aparin)nd aceleiai
grupe de flavonoide. *ceste transformri au o mare importan practic, deoarece
unele flavonoide larg rsp)ndite n natur, pot fi transformate n altele mai
valoroase din punct de vedere practic, dar mai puin rsp)ndite, cum este cazul
rutinei i Duercetinei, cu rol bine stabilit n terapeutic, fiind produse
farmaceutice de mare circulaie.
3.2.1. Flavone #i -licozizi 0lavonici
3lavonele sunt pigmeni galbeni, care se gsesc n flori, fructe i
frunze, sub form de glicozizi, iar n lemn i scoar, at)t libere, c)t i ca
glicozizi.
/a cunoaterea constituiei compuilor flavonici au contribuit n primulr)nd cercetrile lui *.=. Perhin i t. Mostanec?i. *u fost sintetizate numeroase
flavone, dar nu toate au corespondent natural. n natur s-au gsit peste o mie de
compui flavonici. 7umrul gruprilor hidroilice i metoilice variaz de la A
p)n la 5. gruprile metoilice se gsesc mai ales pe inelul H. $n numr mai mic
de compui flavonici conin grupe metil, dioimetil sau catene mai lungi, de
tipul+ CI4
-CIA-CIA-C- CI4 , sau sunt condensai cu unele cicluri.
2I
=lucidele care particip la construcia glicozizilor flavonici sunt n
primul r)nd+ '-glucoza, /-ramnoza, /Narabinoza, '-iloza i acidul '-
glucuronic. *ceste glucide pot participa i sub form de biglucide sau triglucide
cum sunt+ rutinoza, apioza, robinoza, soforoza i altele
8/11/2019 Metode de Extractie
20/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
20
esturile glucidice se gsesc fiate la una sau dou din gruprile
hidroilice ale compusului flavonic.
Pro(riet!+i i*ice
3lavonele sunt substane cristalizate, colorate n galben. =licozizii
flavonici cristalizeaz bine, fiind solubili n ap, metanol i etanol. olubilitatea
flavonelor este variat. =ruparea OC2 - C K C- are putere cromofor mic, dar
datorit con&ugrii cu nucleele aromatice precum i datorit gruprilor
hidroilice, culoarea se intensific. $n efect deosebit asupra nchiderii culorii
galbene au gruprile hidroilice din 4 i 8 datorit posibilitii de formare a uneistructuri chinoide.
3lavonoidele prezint n $.. dou sau trei benzi de absorbie.
=ruprile hidroilice din anumite poziii au efect batocrom caracteristic, iar
transformarea acestora n grupri metoilice are un efect hipocrom. 'eterminarea
poziiei benzilor de absorbie n $.. permite caracterizarea compuilor flavonici.
3lavonele prezint o serie de proprieti chimice ce se datoresc agliconului.
Ac+i&ea a#ca#i#or ,i aci*i#or
ub aciunea alcalilor inelul pironic se deschide, stabilindu-se un
echilibru ntre flavon i dicetona rezultat.
eacia de deschidere a ciclului pironic fiind reversibil, alcalii i acizii
pot avea aciune izomerizant asupra flavonelor. *stfel de reacii de izomerizare
sub aciunea acizilor au fost folosite n scopuri preparative. @9@
8/11/2019 Metode de Extractie
21/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
21
3.2.2. Flavonoli ai 0lorilor de )alendula
0#a)oo#i 3 etract s.&.Fraciunea lipofil
-cvercetin O 4 O glucozid (soDuercitin! --chempferol O 4 - glocozidoramnozid 6,6;-9 duble legturi
con&ugate. Cele care conin mai puin de >-9 duble legturi CKC con&ugate sunt
incolore, cele cu E6 duble legturi au o culoare galben, cele cu EE duble legturi
au culoare portocalie, iar cele cu peste EE duble legturi sunt roii.
8/11/2019 Metode de Extractie
27/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
27
Pigmenii carotenoidici se dizolv bine n solveni organici i n lipide.
Carotenoidele oigenate se solv numai n solveni organici polari. Carotenoidele
prezint un miros caracteristic slab aromat. 7u sunt toice, nici iritante. Punctele
de topire sunt n general situate sub A
8/11/2019 Metode de Extractie
28/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
28
Pentru a evita emulsionarea spunurilor, au fost adugai c)iva mililitri de alcool
sau de soluie concentrat de sare (7aCl, %g2 8, (7I8!A28!. oluiile eterice
reunite s-au splat cu ap ntr-o p)lnie de separare p)n la ndeprtarea complet
a alcaliilor, s-au uscat peste sulfat de sodiu anhidru, s-au filtrat i evaporat
secundar. 7. *rpin, L./. 3iasson au constatat c separarea carotenoidelor dintr-un
amestec este str)ns legat de caracterul hidrofil datprat gruprilor funcionale din
molecul i de polaritatea moleculei, caracteristici care fac posibil eistena a
dou tipuri de metode de separare+ una de repartiie ntre dou faze lichide
nemiscibile ntre ele i a doua, de separare prin proprietatea de absorbie pe
absorbant.. Honnett i *.M. %allams au separat carotinele de antofile prin
repartiia etractului n faza lichid-lichid ntre eter de petrol i metanol apos (98F, c)nd antofilele trec n hipofazametanolic, clorofilele n epifaz sau de etracia unei soluii metanolice a unui
pigment cu eteri de petrol, p)n c)nd toate clorofilele sunt terminate. n ambele
cazuri antofilele din hipofaz au fost trecute n eter etilic i apoi splate cu ap.
H.I. 'avies a efectuat se pararea pigmenilor carotenoidici
nesaponificabili din etract n eter de petrol prin agitarea ntr-o p)lnie de
separare, conin)nd metanol 96F c)nd toate antofilele coninute n etract cu Asau mai multe grupe 2I sau grupe carbonil au trecut n faza metanolic. n
epifaz au rmas carotenele, cetocarotenoidele, epoizii, eterii i esterii
carotenoidici. 'in hipofaz, fraciunea metanolic, carotenoidele s-au trecut n
eter etilic apoi au fost splate cu ap i uscate. -a constatat c cea mai
important tehnic de izolare a carotenoidelor n stare pur este cromatografia pe
coloan.
8/11/2019 Metode de Extractie
29/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
29
. /iaaen-Lensen i *. Lensen au utilizat ca procedeu pentru separarea
carotenoidelor cromatografia inzone, c)nd amestecul de carotenoide aflat ntr-un
solvent nepolar a fost aplicat n partea superioar a coloanei, pentru developare
fiind utilizat un solvent potrivit p)n la separarea zonelor pe coloan. Coloana a
fost demontat, absorbantul selecionat pe zone i fiecare zon eluat individual
cu un solvent polar. =. Hritton a aplicat ca procedeu de separare pe coloan
cromatografia eluiei n trepte, c)nd proba de amestec a pigmenilor este aplicat
n partea superioar a coloanei n solvent nepolar (eterul de petrol!, iar coloana
este splat prin developare cu solvent, n care solventul polar este mrit treptat.
Pigmenii sunt eluai n mod succesiv, n ordinea creterii activitii lor deabsorbie, de la zona de &os spre cea de sus a coloanei i colectai sub form de
eluat. 3iecare zon eluat a fost evaporat la sec, redizolvate ntr-un volum mic
de solvent, n vederea eaminrii prin recromatografierea pe coloan,
spectofotometrice.
:. tahel a efectuat separarea pigmenilor carotenoizi prin metoda
cromatografiei pe strat subire. Probele individuale care au fost separatepreliminar prin cromatografia pe coloan au fost n continuare cromatografiate pe
strat subire utiliz)nd ca absorbant silicagel =, la care s-a adugat o soluie de 4F
hidroid de potasiu. :luarea a fost efectuat cu eter etilic, sau eter etilic ce
conine
8/11/2019 Metode de Extractie
30/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
30
rezultate au fost obinute cu un etract galben B%P i cu un P=. n toate
etractele au fost prezente flavonoidele, inclusiv n etractul *=. au fost prezeni
acizii fenolici cu ecep
Ba acidului o-hidroifenilacetic. :tractul *= conine puini
carotenoizi. Coninutul de tanin i oleanozide a fost crescut n etractul *=. dup
o perioad de stocare de 5-A8 ore, componentele etractului s-au schimbat,
etractul av)nd proprieti organoleptice bune. @EE@.
3.3.4. &ol 0iziolo-ic
olul i funciile pigmenilor carotenoidici constituie cea maiimportant latur a lor, fapt pentru cate li se i &ustific prezena n organismele
vii.
Carotenoidele n organismul uman constituie sursa de retinol. Bau parter
la colorarea pielii, ceea ce a dus la utilizarea lor ca ageni fotoprotectori n boli
fotoreceptoare i chiar ca ageni anticancerigeni. Heta-carotina este cea mai
important, predomin)nd n legume, fructe i zarzavaturi, care sunt consumate deom i din aceast cauz, fiind provitamina *, are cea mai mare activitate
biologic.
s-a fcut o corelaie ntre carotenodermie cu valori sczute i diferite
boli infecioase, cum sunt malaria, pneumonia, gripa, etc., s-a sugerat ca
nivelurile crescute ale carotenemiei pot preveni infeciile. :ist de asemenea o
corelaie ntre carotenemie i bolile de ficat. Pacienii cu astfel de afeciuni au ocarotenemiei sczut, datorit capacitii reduse de absorbie a carotenelor
cauzate de leziuni al eficatului.
Pigmenii carotenoidici au proprietatea de a prote&a hematiile
mpotriva fotohemolizei induse de un pigment porfirinic eogen sau endogen.
Carotenoidele sunt utilizate n industria farmaceutic, cu precdere pentru
colorarea unor preparate farmaceutice, c)t i pentru deinerea unor preparate
tonice i dietetice regenerative.
8/11/2019 Metode de Extractie
31/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
31
'.4. Aci% ascorbic 5)ita-ia C6
3.4.1. Surse" 0actori ce in0lueneaz coninutul de acid ascor$ic
:ste foarte rsp)ndit n regnul vegetal, unde se gsete n toate plantele
superioare i n unele plante inferioare. 3oarte bogate n vitamina C sunt fructele
multor plante (yrciaria glomerata+ A,8-A,;F!, dar i unele frunze (Vicia
amoenas!. n cantiti mari se mai gsete n fructele de ardei, coacze negre,
mce, nuci necoapte, lm)i, mandarine etc.
n urma studiilor efectuate de L.=. Good i '.I. Cruic?shan? n E988,de 0a?euchi n E9
8/11/2019 Metode de Extractie
32/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
32
prezena luminii i de cantiti catalitice de metale, este oidat de oigenul
atmosferic n acid dehidro-/-ascorbic, datorit pierderii celor doi atomi de
hidrogen de la gruprile enolice. 2idarea are loc repede sub aciunea unor
oidani slabi. *genii reductori, chiar slabi reoideaz acidul dehidroascorbic,
n acid ascorbic. 2idanii mai puternici determin o scindare a moleculei
acidului dehidroascorbic prin ruperea legturii ntre CAi C4, cu formarea de acid
oalic i acid /-treonic.
n plante oidarea acidului ascorbic este catalizat de ascorbinoidaza
i reducerea acidului dehidroascorbic este catalizat de ctre ascorbin-reductaza.
Prin intervenia ascorbinreductazei, dup %. Uamaguchi i %.*. Locel1n, E9
8/11/2019 Metode de Extractie
33/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
33
Conform patentului francez numrul E644685 din A4@6A@E96F
ap
8/11/2019 Metode de Extractie
34/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
34
scorbut, caracterizat prin hemoragii la nivelul gingiilor (gingivite!, apariia de
hematoame, tulburri digestive, anemie, stri de subfebrilitate, etc. 0ransformarea
reversibil a acidului ascorbic n acid dehidroascorbic se face mai uor prin
intermediul glutationului i respectiv a diglutationului. @E5@
'.7. U#ei&ri#e $rase 5#i(i%e )e$eta#e6
3.5.1. Structur #i proprieti 0izicocimice
/ipidele sunt substane de rezerv formate din esteri ai glicerinei cu
diferii acizi grai. *cizii grai sunt alifatici i pot fi saturai (acidul butiric,capronic, lauric, palmitic i stearic! sau nesaturai (acidul oleic, linoleic etc.!. Prin
saponificarea acestora trigliceridele se pun n libertate compusul alcoolic,
glicerina.
$leiurile grase prezint o serie de proprieti fizico-chimice comune.
unt lichide nevolatile (uleiuri fie!, grase la pipit, care nu se amestec cu apa,
dar sunt solubile n benzen, cloroform, eter, sulfur de carbon, eter de petrol,benzin, etc. Cu ecepia unor uleiuri grase (ulei de ricin! sunt greu solubile sau
insolubile n alcool etilic. Culoarea glbuie a unor uleiuri vegetale se datoreaz
coninutului lor n carotenoizi. $nele uleiuri grase ntinse ntr-un strat subire
rm)n lichide (uleiuri nesicative!. *lte uleiuri se transform cu timpul ntr-o
mas elastic (uleiuri sicative!, proprietate pentru care sunt utilizate n diferite
scopuri tehnice.
3.5.2. Surse. Factori de in0luen. &ol 0iziolo-ic.
$leiurile grase se gsesc n cantiti mari (46-
8/11/2019 Metode de Extractie
35/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
35
etc. $leiurile grase n componena crora intr acizii grai nesaturai ntr-un
procent mai mare, &oac rolul vitaminei 3. n ultimii ani se consider c lor le
revine un rol important n metabolismul colesterolului, fiind apreciat n
prevenirea i tratamentul *.0.. $nele uleiuri vegetale sunt utilizate ca i
medicamente coleretice sau purgative.
*lturi de trigliceride n plante se gsesc n cantitate mai mic steride,
compui n care componentul alcoolic este fitosterolul sau alt alcool steroidic.
teridele se deosebesc de uleiurile grase prin lipsa proprietilor de saponificare
n mpre&urrile n care se saponific trigliceridele. :le formeaz fraciunea
insaponificabil din diferite uleiuri grase.L. 0uroJs?a urmrete variaiile sterolilor liberi i obligai n
Calendula officinalis n timpul creterii. tudiul distribuiei sterolilor n timpul
creterii plantelor arat c perioada germinaiei a fost caracterizat prin hidroliza
esterilor sterolici, a sterolilor liberi. Perioada nfloririi este caracterizat prin
acumularea esterilor sterolici, sterol-glicozidelor i sterolilor liberi n toate
organele plantei, particular n flori. Perioada senescenei este caracterizat prinhidroliza esterilor sterolici n lstari i prin esterificarea sterolilor n rdcini i
semine. @E;@
G. aniszoJs?a epune rezultatul cercetrii localizrii intracelulare a
biosintezei tocoferolului n Calendula officinalis. (4I! fitol a fost administrat
protoplatilor din frunze i din fraciile subcelulare, etichet)nd dinamica ;-
monometiltocolului, >-monometiltocolului, ;,>-dimetiltocolului i ,-trimetiltocolului i relaia fitilchinonelor la fel de bune ca a vitaminei ME. Prin
condensarea cu acid homogentisic au fost formulai doi izomeri
metilfitilchinone(A-metil-@
8/11/2019 Metode de Extractie
36/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
36
Conform studiului realizat de .C. Hadami, uleiul din seminele de
glbenele conine monohidroiacid n proporie de aproimativ
8/11/2019 Metode de Extractie
37/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
37
unt substane care pot fi utilizate la tbcirea pielii. :le prezint proprietatea
comun de a precipita proteinele, alcaloizii i acetatul de plumb. =ustul lor este
astringent.
'in punct de vedere chimic materialele tanante aparin grupei
polifenolilor i pot fi de dou tipuri+ compui formai din fenoli prin esterificare,
n unele cazuri n combinaii cu glucidele i compui cu nucleu condensat.
ubstanele din prima categorie pot fi hidrolizate prin fierbere cu acizi minerali.
ubstanele din categoria a doua conin nuclee flavonoide, sunt nrudite cu
catechinele i antocianinele i spre deosebire de substanele din grupa precedent,
nu pot fi hidrolizate cu acizi. n urma nclzirii uscate primele dau pirogalol, leconin, materialele tanante produc reacii de culoare cu srurile de metale grele.
n prezena clorurii ferice, materiile tanante hidrolizabile dau o coloraie sau un
precipitat albastru p)n la negru, iar cele cu nucleu condensat, o coloraie n
verde. %ateriile tanante acioneaz asupra mucoaselor, coaguleaz proteinele i
n consecin prezint o aciune hemostatic. @E@
3.6.2. /etode de etracie" separare" dozare #i identi0icare
0aninurile din produsele vegetale au o constituie foarte variat i
prezint tendina de a se condensa i de a se oida, structura lor at)t n produsul
vegetal c)t i n soluiile etractive se modific n timp, iar activitatea astringent
a preparatelor nu este legat de cantitatea de taninuri.
0aninurile sunt solubile n ap, alcool, glicerol, aceton, puin solubilesau insolubile n eter, cloroform, benzen, n soluii alcaline sau acide, sub
aciunea luminii i a oigenului se descompun repede. G. /ang n studiile sale a
artat c un reactiv general pentru taninuri este acidul fosfoJolframic. Pentru a
mri specificitatea acestei reacii, autorul procedeaz n prealabil la o precipitare
a taninurilor cu acetat de zinc n mediu amoniacal, apoi separ precipitatul, pune
taninurile n libertate cu acid sulfuric diluat i trateaz n mediu slab alcalin cu
acid fosfoJolframic, c)nd s eobine o coloraie albastr, datorit aciunii
8/11/2019 Metode de Extractie
38/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
38
reductoare a acestora. Prin acest procedeu sunt eliminate substanele strine care
pot falsifica rezultatele+ glicozidele polifenolice nu sunt precipitate cu acetatul de
zinc, flobafenele dei sunt precipitate nu se dizolv n acid sulfuric diluat.
$n procedeu analog care folosete pentru identificare reactivul arsen
Jolframic a fost propus de =. =rieger. 0aninurile au fost precipitate cu acetat de
plumb i gelatin, separate prin centrifugare i aduse din nou n soluie cu
a&utorul acidului fosforic. oluia limpede, sau clarificar prin filtrare a fost
tratat cu reactiv arsen Jolframic p)n la apariia unei coloraii albastre.
eactivul a fost preparat prin nclzirea n reflu timp de A ore a amestecului
format din E66g Jolframat de sodiu, 46 g acid arsenic,
8/11/2019 Metode de Extractie
39/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
39
3..1. &spndire
Proteidele sunt componente nelipsite ale oricrei celule vegetale sau
animale. :le se gsesc n cantitate mare n nucleul celular i formeaz mare mas
a protoplasmei celulare. Proteidele se gsesc i n sucurile care circul n
organismele vegetale, n general n toate organele plantei, n cantitate mai mare
afl)ndu-se n semine. n organismele vii proteidele prezint caractere coloidale.
3runzele plantelor tinere conin 46-86F proteide din substana uscat, dar
coninutul lor scade la mbtr)nire.
3..2. /etode de izolare" puri0icare #i dozare
Proteidele solubile se etrag din esuturile fin divizate, cu ap sau
soluii de sruri sau de alcali, corespunztor solubilitii diferitelor proteide.
Proteidele greu solubile se etrag cu acid formic sau cu soluie de uree,
guanidin, proidin, etc., c)teodat cu acizi minerali tari. :tragerea se face n
toate cazurile la temperatur &oas i repede.'in soluii proteidele por fi precipitate prin coagularea soluiei
concentrate sau prin precipitarea cu alcooli sau aceton. Pentru a separa
proteidele ntre ele i totodat de substane strine, se folosete mai frecvent
metoda precipitrii fracionate cu sulfat de amoniu sau sulfat de magneziu de
diferite concentraii, sau precipitarea fracionat cu alcool sau aceton. 2binerea
proteidelor n stare perfect pur este de cele mai multe ori o operaie dificil, carenecesit aplicarea succesiv a mai multor metode. 2 serie de proteide se pot
separa n stare cristalin, dar cristalele au de multe ori o structur neunitar,
datorit faptului c proteide diferite pot cristaliza mpreun. Bdentificarea
proteidelor se face prin reacii caracteristice de culoare i de precipitare.
'ozarea proteidelor din materiile vegetale se face de obicei pe baza
determinrii coninutului n azot dup metoda M&eldahl. ezultatele care se obin
n urma degradrii materiilor vegetale, dup M&eldahl, prezint proteide numite
8/11/2019 Metode de Extractie
40/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
40
brute, pentru c azotul determinat nu provine eclusiv de la proteide, ci de la alte
substane azotate. Pentru determinarea proteidelor pure, ele trebuie separate de
celelalte substane prin precipitare cu reactivi specifici, ca de eemplu cu
hidroid de cupru, acetat de plumb, alcool ;>F etc. Proteidele digestibile se
determin n condiii de digestie eperimental, prin hidroliza cu pepsin n
mediu acid.
3..3. &ol 0iziolo-ic
Proteidele sunt substane indispensabile pentru orice organism viu.
$nele proteide constituie elemente structurale ale tuturor celulelor, altele suntsubstane de rezerv i substane cu activitate biologic ridicat. /a unele plante
s-a constatat c substanele proteice din frunze pot fi folosite ca substrat
respirator.
CAPITOLUL I:. CONCLUZIILE /TUDIULUI DE
LITERATUR
8/11/2019 Metode de Extractie
41/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
41
n urma studiului efectuat se poate constata c utilizarea florilor de
glbenele este relativ veche, ele reprezent)nd o surs inepuizabil de principii
activi, cu deosebit importan n practica farmaceutic, cosmetic i chimic.
3iind o plant eistent n flora spontan i cultivat a rii noastre,
puin pretenioas la condiiile de mediu, cultivat i n c)mpia de vest, prezenta
lucrare de diplom i-a propus s+
-efectueze studii fitochimice referitoare la principii activi ai florilor de
glbenele+ saponozide triterpenice, carotenoide (licopina, alfa i beta caroten,
noelicotina *, rubiantina, luteina, antofila, violaantina, flovoantina!,
flavonoizi i glicozizi flavonici, rutinozizi, mucilagii, esteri colesterinici aiacizilor lautic, miristic, palmitic i margaric vitamina C, acid malic, substane
proteice, calendulina i altele.
-stabileasc condiiile optime de etracie integral a principiilor activi.
CAPITOLUL :. REZULTATE. DI/CUII. CONTRIBUII
ORIGINALE
8/11/2019 Metode de Extractie
42/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
42
7.1. Ob+ierea etracte#or
n acest scop s-au folosit flori de categoria a BB-a (pierderi de umiditate
8/11/2019 Metode de Extractie
43/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
43
E6 6,56< E;,E; 4,46A6 6,;65 E;,;5 4,>446 6,>96 E;,>6 4,9886 E,6E6 E;,;4 8,68
,6 E,685 E9, 4,9A96 E,6E; A6,E8 4,A4
E66 6,856 8E,>6 4,EA
!.".".#. acerarea etanolic
-au abordat macerate cu un raport de etracii E+< p)n la E+E6 nconcentraii decalare de :t2I. $n randament optim s-a atins la E+< cu :t2I 6F vol. 'ac n cazul maceratului metanolic am vzut c pentru %e2I 96F
fa de %e2I E6F coninutul de % este de A, n cazul celor etanolice relaia
este invers. chimbarea raportului de etracie este E+E6 duce la mbuntiri
nesemnificative ale randamentului care nu &ustific efortul depus (0abel A!.
a$elul 2
EtO; )o# E 0#a)ooi%e -$ Co+i&t etract&i
8/11/2019 Metode de Extractie
44/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
44
aport de etracie E+ E,;
E6 6,8A4 6,4;EE< 6,8A4 6,4;EA6 6,8A8 6,4;A
7ici n :t2I apos nu s-a nregistrat o umflare puternic a materialului
mrunit ca la macerat, ns totui prezent. 'in reziduul etraciei aproape c nu
s-a putut recupera prin presare solvent nc)t este suficient o cltire a florilor
mrunite.Culoarea etractelor a virat de la galben-deschis p)n la galben intens.
/a :t2I E6F, etractul apos galben deschis a fost tulbure i nu s-a putut filtra.
2ptimul randament n flavonoide s-a obinut cu :t2I E6 6,5; AA,46 A,66A6 6,96 44,86 4,;A46 E,E4 8E,6> ,A5 8,;E
6 6,99 45,66 4,AA96 6,>E A5,46 A,AE
E66 6,8< E;,56 E,
8/11/2019 Metode de Extractie
46/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
46
Prepararea percolatelor s-a fcut dup o modificare a prescripiei
clasice, deoarece aceasta nu este economic pentru o producie de mare tona&. -a
urmrit reproducerea condiiilor industriale la scar mic.
eferitor la culoare i intensitate, percolatele s-au comportat ca i
maceratele i turboetractele. 'eosebit de mare este coninutul de escin n
percolatul apos, care cu valoarea de 6,;>F reprezint aproimativ E6 6,9A
8/11/2019 Metode de Extractie
47/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
47
Meto%a Esci!
8/11/2019 Metode de Extractie
48/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
48
pur (lu)nd n considerare coninutul de ap al substanei! date insuficient
reproductibile pentru o determinare eact.
%ar&a de eroare apreciat la S
8/11/2019 Metode de Extractie
49/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
49
a$elul %
/&rsa E 0#a)ooi%e $..*.H. >,;5 6,A;H$B*V 8,A< 6,AE
'2%*7:* >,85 6,A;%2V7BW* >,6; 6,A5H2CV* 5,AE 6,A4H:2B* 5,E; 6,A83BHBV A 6,AE3X=:0 /$=2L 5,6E 6,E9*C$ , se va lua n considerare urmtorul tabel
adiacent+
Meto%a %e i*o#are 0#a)ooi%e 56:tracie cu ohlet (E6 ore! 6,A4>-6,A83lavonoide(n rutozid!
Caroteni (betacaroteni!
:ter de
petrol
[email protected]. :tracie
nohlet
P)n la
epuizare
- 6,E68;
cloroform [email protected]. :tracienohlet
P)n laepuizare
- 6,6E59
*lcool E66@E66 refluare - 6,4< -
n scopul realizrii unor randamente superioare s-a ales raportul
drog@solvent de 0#a)oe 53
r&to*i%6Carotei 53 betacarotei6
*lcool E6@E66 6,A9E5 -alcool E6@E66 6,A8,A u putere ionic 6,E 6,E< E9 - EA,< - ,6
8/11/2019 Metode de Extractie
54/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
54
5,> 6,A6 E9 - E8,; - 5E,4 - A8,6>,A 6,E< E> -;,9 E;,6 -;,4 8,6>,A 6,E< - - AE,> - 44,5 - 88,5>,9 6,E< E; - EE,< - 84,6 - 8 globulinele s-au
separat n 4 componeni.
Pentru a stabili dac eist A sau 4 componeni globulinici independeni
mi-am propus s fracionez globulinele prin metoda desalifierii prin dializ.
Proteina s-a etras n 7aCi 6,
8/11/2019 Metode de Extractie
55/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
55
*moniu 9,A 6,6;< * *E*A
-E4,6-E,6
5;,44A,;
*cetat 4,> 6,E66 * *E*A
-E,>4E,A
*moniu 9,A 6,6;< * *E*A -- ;6,646,6 Pe h)rtie
amoniu 9,A 6,6;< H HEHA
-E6,6-6,5
;;, 6,E66 H HE
HA
-
-
56,>
49,A
Pe h)rtie
*cetat- 5,9 6,EoC.
'ei rezultatele analizei electroforetice arat c globulina * i H sunt
proteine independente, am considerat c cele 4 globuline reprezint componente
independente eistente fraciunile electroforetice ale globulinelor * i H nu pot fi
afectate deoarece ele nu au fost prelucrate cu solveni organici care pot producemodificri n structura lor. Pentru a arta c aceste 4 globuline sunt componente
dine definite, deosebite una de cealalt am recurs la analiza lor cromatografic i
polarografic. Cromatografia unidimensional, descendent a aminoacizilor
provenii prin hidroliza acid a acestor 4 globuline a artat c ele posed
urmtorii aminoacizi comuni+ acid aspartic, glicocol, histidin, serin, valin,
plus metionina i leucina plus izoleucina.n afara acestora, fiecare globulin posed aminoacizii specifici+
-globulina *+ acid glutamic, alanin, prolin.
-globulina H+ alanin, cistin T cistein, fenilalanin.
-globulina C+ acid glutamic, arginin, fenialanin.
'eterminrile polarografice s-au efectuat ntr-o soluie test Hrdic?e cu
cobalt trivalent. emnalul treapt proteic are o nlime i un aspect diferitpentru cele trei globuline la aceiai concentraie de 4,5 E6-4gF (tabelul E8!
8/11/2019 Metode de Extractie
56/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
56
a$elul 14. .
7econcordana dintre numrul de fraciuni obinute prin analiz
electroforetic a proteinelor totale i cel obinut prin analiza electroforetic
separat a albuminelor i a globulinelor se poate eplica prin capacitatea redus
de separare a aparatului de electroforez de care dispunem. Prin tehnica pe h)rtie,
proteinele totale dei se separ n trei fraciuni curbele electroforetice au o
8/11/2019 Metode de Extractie
57/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
57
asimetrie evident care ne-a sugerat c proteina total a fost dovedit prin
ndeprtarea unei cantiti de globulin din etract prin dializ. Pe msur ce
cantitatea de globulin ndeprtat crete, analiza electroforetic pune n eviden
un numr mai mare de fraciuni. 'up E6 ore de dializ s-au evideniat < fraciuni
proteice dintre care A cu mobilitate mai mare sunt componente albuminice, iar
celelalte 4 cu mobilitate apropiat sunt probabil globulinele *, H, C. rezultatele
acestor determinri au ntrit convingerea c n florile de Calendula eist 4
componeni globulinici i cel puin A componeni albuminici.
7.'. cerc!ri c& %e(o*itare
Cu probele culese am fcut ncercri de depozitare timp de peste E6
luni. Probele au fost mprite n 4 categorii+ o parte n stare normal, o parte
mrunit i uscat la temperatura camerei, iar a treia parte uscat la 86oC (dup
mrunire! i apoi mcinate n moara cu ciocnele.
n urma eperienelor efectuate s-a constatat c coninutul de escin iflavonoide scade n cazul probelor macerate datorit unor reacii fermentative. /a
a doua categorie scderea ambelor valori cu toate c este mai mult sau mai puin
semnificativ, este n ansamblu minor. /a ultima categorie, ns, nu s-a pus n
eviden o scdere a coninutului. n concluzie, florile mrunite, uscate bine la
aer liber pot fi ntrebuinate fr pierderi timp de un an.
CAPITOLUL :I. PARTE EPERIMENTAL
8.1. Meto%e %e etrac+ie
8/11/2019 Metode de Extractie
58/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
58
6.1.1. 7tracia selectiv #i succesiv
Produsul vegetal prelucrat prin etracie este utilizat pentru obinerea
unor termoplaste i face obiectul a numeroase studii. -a urmrit realizarea unor
soluii etractive bogate n principii activi, n condiii de etracie avanta&oas.
n eperienele efectuate de :liza =afieanu, Boana %atei i 'orina
/azr, acestea au ales solvenii de etracie selectivi pentru fracia hidrofila
(flavone, glicozidele acidului oleanolic, calendulozidele, *-I, alcoolii terpenici+
arnidiol i furnadiol! i cea lipofil (caroten, ulei volatil, esteri ai colesterolului
cu acizii grai!. olvenii utilizai au fost+ alcoolii, propilen glicolul, cloroformul,eterul de petrol, uleiul de floarea soarelui i parafina lichid.
Procesul prim aplicat se bazeaz pe principiul etraciei selective i
succesive cu diferii solveni, ncep)nd cu cel mai lipofil. *cest procedeu se
realizeaz la cald i permite o separare a principiilor activi din produsul supus
etraciei, n funcie de caracterul lipofil sau hidrofil al acestora. Pentru etracie
s-a folosit eter de petrol, cloroform i alcool. :puizarea produsului vegetal cu eterde petrol i apoi cu cloroform s-a realizat cu a&utorul aparatului ohlet.
Pentru etracia cu alcool s-a recurs la refluare, din cauza punctului de
fierbere ridicat al soluiei etractive alcoolice fa de soluia cloroformic i eter-
petrolic. Capacitatea de etracie al solvenilor a fost apreciat prin determinarea
cantitativ a carotenilor etrai n eter de petrol i cloroform, i a flavonelor
etrase n alcool. Procedeul de etracie este prezentat n figura E.
6.1.2. /acerarea
%acerarea este unul din procedeele aplicate pe scar larg pentru
obinerea etractului cu utilizare n dermopreparate, operaia de etracie
8/11/2019 Metode de Extractie
59/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
59
realiz)ndu-se la temperatura camerei, ceea ce mena&eaz principiile active.
Procedeul de macerare este redat n figura A.
0i$&ra 1.
8/11/2019 Metode de Extractie
60/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
60
Calendulae flos
:tracie selectiv i succesiv cu diferii solveni, ncep)nd cu cel
mai lipofil
:tracie cu eter de petrol la ohlet
3 i l t r a r e
oluie etractiv eziduu vegetal eter petrolic
:tracie cu cloroform la ohlet
oluie etractiv eziduu vegetal cloroformic
:tracie cu alcool prin refluare
'ecantare i filtrare
oluie etractiv alcoolic
Scema de etracie selectiv #i succesiv a produsului =)alendulae
0los> cu di0erii solveni" ncepnd caz cel mai lipo0il.
0i$&ra 2.
Calendulae flos
8/11/2019 Metode de Extractie
61/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
61
:tracie prin dubla macerare cu+
*lcool etilic Cloroform
'ecantare i filtrare
oluii etractive oluii etractive alcoolice cloroformice
*E *A CE CA
eziduu vegetal eziduu vegetal
:tracie prin macerare cu+
$lei de floarea soarelui Propilenglicol
'ecantare i filtrare
oluie etractiv oluie etractiv uleioas propilenglicolic
Scema de etracie a produsului =)alendulae 0los> prin macerare
6.1.3. ?i-estia
* stat la baza altor serii de etracii i s-a desfurat conform schemei
din figura 4.
0i$&ra '.
Calendulae flos
8/11/2019 Metode de Extractie
62/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
62
'igestie la 56oC O 5 ore cu+
propilenglicol propilenglicol ulei de ulei de parafin Talc. benzilic EF floarea floarea lichidT soarelui soarelui alcool Talc.benzilicEF benzilicEF
@P@ @P*@ @$@ @$*@ @P/*@
'ecantarea i presarea reziduului, filtrare
@P@ @P*@ @$@ @$*@ @P/*@
8.2. I%etiicarea ,i %eter-iarea co-(oete#or
6.2.1. /etode de recunoa#tere #i determinarea saponinelor
/a agitarea unei soluii de : se formeaz spuma intens (efect general
saponinic!. Pentru identificare este nevoie de compararea valorilor 3 obinute
prin C.I. sau C... cu etaloane.
Pentru recunoaterea aciunii hemolitice se pun cromatogramele
developate ntre plci de gelatin sanguin, sau se stropesc cu un amestec de o
parte s)nge defibrinat sau citrat sanguin i > pri soluie fiziologic de 7aCl.
ensibilitatea este n domeniul 86 ug@pat./a stropirea C... cu IA28
8/11/2019 Metode de Extractie
63/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
63
2 metod gravimetric dup omisch se fundamenteaz pe trecerea
etractelor escinice n alcaliescinoli hidrosolubili. Prin adaos de ICl diluat se
obine pp. escinolul hidrosolubil care se determin gravimetric sau alcalimetric.
Coninutul etractelor cercetate se raporteaz la :.
n determinarea fotometric dup 2verlach, : reacioneaz cu o soluie
p-dimetilaminobenzaldehid+ acid acetic+ acid sulfuric. e formeaz o soluie
violet, a crei etincie se msoar la
8/11/2019 Metode de Extractie
64/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
64
unei flavonoide la nt)mplare, ca referin, dac proprietile ei de absorbie a
luminii dup efectuarea reaciei de culoare, nu au coincis cu cele a etractelor
escinice sau dac lipsesc date eacte referitoare la flavonoidele de determinat.
'eoarece etractele de semine cercetate de autor au dat n condiiile reaciei
descrise un maim de absorbie la aceeai lungime de und, pare acum dup
cunoaterea ma&oritii flavonoidelor din semine, ntemeiata raportare la
cvercetin.
/a determinarea colorimetric dup omisch cu *lCl4 n tampon
CI4C22I i gl.@P1. se calculeaz coninutul de flavonoide ca echivalent de
rutin. %etoda se preteaz la determinarea substanei pure i a etractelor,deoarece se msoar numai intensificarea culorii prin formarea compleului de
*l i soluia de compensare este aceeai soluie tampon flavolonic ca cea de
msurat, ns fr adaos de sare de Cl. 'ificultatea apare la determinarea
etractelor de semine neco&ite deoarece pigmentul co&ii chiar i n diluia
aferent determinrii intensific culoarea, duc)nd la dificultatea recunoaterii
etinciei. 'e fapt, nici nu este ntocmit raportarea la echivalent de rutindeoarece nu este prezent rutin n semine.
'eterminarea colorimetric dup Iorhammer a fost propus pentru
determinarea coninutului etractelor escinice pentru noua carte de homeopatie a
medicamentelor n =ermania.
'up hidroliza flavonelor, care conin drept aglicol comun cvercetina,
urmeaz colorarea cu o soluie
8/11/2019 Metode de Extractie
65/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
65
og-ului la care &umtate din c)mpurile eaminate reacioneaz n Petechien. e
aplic animalului soluia de determinat. 'up A8 h, zonele din imediata
vecintate din c)mpurile investigate trebuie s reziste la o solicitare og cu c.p.
46F. 2 alt cale modificat care efectueaz testul pe partea dorsal epilat a
obolanilor de ambele pri ale coloanei vertebrale. Vobolanii se in n prealabil
A-4 sptm)ni la un regim scorbutigen.
6.2.3. /etode de recunoa#tere #i determinare a alantoinei
Bdentificarea alantoinei s-a efectuat n infuzii
8/11/2019 Metode de Extractie
66/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
66
cantitile nregistrate n tabel. *bsorbana corespunztoare acestora s-a
determinat la
8/11/2019 Metode de Extractie
67/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
67
n metanol de
8/11/2019 Metode de Extractie
68/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
68
'.$.".*. Percolarea
Percolarea s-a fcut n vase cilindrice. aportul drog + solvent a fost de
E+8. 'up umectarea n raport E+8 a materialului, masa, mai mult sau mai puin
umflat, s-a acoperit i s-a apsat cu un strat de perle de sticl. ecipientul s-a
umplut ncet cu etractant evit)ndu-se pe c)t posibil formarea de bule mari de
aer. -a lsat s se stea A8 h, apoi s-a percolat cu o vitez de curgere de
8/11/2019 Metode de Extractie
69/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
69
n funcie de cantitatea aplicat s-au pus n eviden 9-A6 de
flavonoide. Pentru determinarea coninutului de flavonoide n etractele de
semine s-a aplicat metoda Iorh?mmer.
'.$.#.$. +dentificarea aminopurinelor
-a fcut determinarea din eluatul coloanei supus de separare dup
Ginterfeld. 3racia purinic captat s-a C.I. pe h)rtie chleicher and chiel
A6684 cu sistem Hu2I@IA2@:t2I (
adenozina, guanina i acidul uric. Pentru identificarea acidului uric /.I. a foststropit la >6oC cu o soluie (n pri egale! de reactiv 3olin-'enis i 7aAC24An
amestecate proaspt nainte de aplicare. -a uscat cromatograma 6oC. *cidul uric s-a recunoscut printr-o pat albastr.
'.$.#.*. +dentificarea acidului ascor&ic
oluia apoas a acizilor carbonilici s-a tratat cu eces de ap.-au tratat srurile de bariu precipitate, s-au dizolvat n puin ap i
s-au tratat p)n la slab acid cu IA28. Bdentificarea s-a fcut C.I. ascendent pe
h)rtie chleicher chull A684 b cu nHu2I@CI4C22I gl.@IA2 (;+E+A!. Ca
detecie s-a folosit n pri egale *g724. 6,E n i 7I46,E n. -a putut pune n
eviden acid ascorbic n comparaie cu etalonul.
'.$.#.!. +dentificarea metioninei
Punerea n eviden a aminoacizilor n soluia mam s-a fcut cu
soluie ninhidrin 4F. -a obinut o coloraie slab purpurie. ecunoaterea
metioninei dup separarea flavonoidelor s-a fcut cu soluie pentacianonitrosil
ferat (BBB! de 7a EF printr-o colorare n rou.
'.$.#.'. +dentificarea aneurin/Cl
8/11/2019 Metode de Extractie
70/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
70
Bdentificarea s-a fcut dup separarea colinei cu MA@3e (C7!4 soluie
proaspt, prin formarea unei fluorescene albastr violet, care a reaprut la
adugarea de A picturi M2I E n.
'.$.#.0. +dentificarea colinei
-a fcut din etractul pur i identificat ca picrat (pentru A4;-A49oC!.
CAPITOLUL :II. CONCLUZII 0INALE
n urma studiului pe care l-am efectuat i a analizei de ansamblu a
rezultatelor nregistrate n cursul cercetrilor ntreprinse pentru realizarea unor
soluii etractive din florile de Calendula officinalis bogate n principii activi, se
desprind urmtoarele concluzii+
8/11/2019 Metode de Extractie
71/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
71
-s-a efectuat un studiu al condiiilor de etracie n care s-a inut seama
de compoziia chimic comple a produsului vegetal, natura solventului i
metodele de etracie
-s-au utilizat solveni de etracie care s fie c)t mai selectivi i s nu
determine combinaii chimice cu componenii principiilor activi, s asigure
stabilitatea soluiei etractive n timp
-eficiena solvenilor i a procedeelor de etracie aplicate au fost
apreciate cantitativ i calitativ prin determinarea coninutului n flavone,
eprimate n rutozid, i a coninutului de caroten, eprimai n Z-caroten
-a fost verificat eficiena unor procedee de etracie (macerareametanolic, macerarea etanolic, turboetracia, percolarea! i eficiena
solvenilor, procedeul de etracie prin macerare dovedindu-se a fi cel mai
eficient.
BIBLIOGRA0IE
E. :'2CIB* C2BCB$ =*HB:/ *C O "Plantele medicinale i
aromatice#, :ditura *cademiei .P.., E95A.
8/11/2019 Metode de Extractie
72/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
72
A. C270*70B7:C$, =. :/:7* I*WB:=*7$ H$$B*7X O "
ne cunoatem plantele medicinale, proprietile lor terapeutice i modul
lor de folosire#, :ditura %edical, E9>;.
4. "0ehnologii cadru ale plantelor medicinale i aromatice#, :ditura Ceres,
E994.
8. CXCB$7, 3 H$L2, 2. */:[*7, %. O "3armacia naturii#, :ditura
Ceres, E9;5.
. Chemical abstract, olumul E64, nr.E
8/11/2019 Metode de Extractie
73/76
U.S.A.M.V.B.T. PROIECT DE DIPLOMA
73
A4. 3armacologia, nr.8, :ditura %edical, E9>;.
A8. LB*7$, B. O "Curs de chimie i biochimie vegetal#, anul universitar
E996-E99E, B.*.0.
ot $i$lio-ra0ia sa citat n ordinea utilizrii n prezenta lucrare de
diplom.
CUPRIN/
Ca(.I. Itro%&cere. Geera#it!+i. E
Ca(.II. Pre*etarea (rob#e-ei...
Top Related