l3
-
Upload
alexandra-croitoru -
Category
Documents
-
view
213 -
download
0
description
Transcript of l3
• PREPARATE MICROSCOPICE
• CATEDRA DE MICROBIOLOGIE
• LP 3
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN
INDICATII:
- colorarea la cald a micobacteriilor din prelevate patologice sau culturi
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN
• Reactivi:
1. Solutie de fucsina fenicata Ziehl
2. Solutie decoloranta: amestec acid – alcool (H2SO4 + alcool etilic 95°)
3. Solutie recoloranta: albastru de metilen
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN
Procedura:
1. Se aseaza lama cu frotiul fixat pe un suport metalic
2. Se acopera frotiul din abundenta cu sol. de fucsina fenicata
3. Se lasa 15’, timp in care se fac 3 treceri cu flacara becului de gaz Bünsen pe sub lama de sticla, astfel incat sa incalzim colorantul pana la emitere de vapori.
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN
• Atentie! Colorantul nu trebuie sa ajunga la fierbere!
• Daca colorantul se evapora sau se usuca pe lama, trebuie sa adaugam colorant proaspat!
4. Se spala frotiul din abundenta cu apa de robinet
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN
5. Se decoloreaza frotiul cu amestec acid – alcool – 2’
6. Se spala cu apa de robinet
7. Recolorare cu sol. albastru de metilen – 1’
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN
• Citire si interpretare:
- bacilii acido – alcoolo - rezistenti (BAAR) –
apar rosii stralucitori
- celulele inflamatorii, celulele de
descuamare sau celulele tisulare, bacteriile
neacido – alcoolo – rezistente – se vor
colora in nuante de albastru
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA KINYOUN
• INDICATII:
Coloratie la rece a micobacteriilor din prelevate patologice sau culturi
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA KINYOUN
• Reactivi:
A. Solutie de fucsina fenicata Kinyoun
B. Solutie decoloranta de acid – alcool
(HCl + alcool etilic 95°)
C. Solutie recoloranta: albastru de metilen
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA KINYOUN
Procedura:
1. Colorare la rece cu sol. de fucsina fenicata Kinyoun – 5’
2. Spalare cu apa de robinet
3. Decolorare cu amestec acid – alcool – 30”
4. Spalare cu apa de robinet
5. Recolorare cu albastru de metilen – 1’
6. Spalare cu apa de robinet.
• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA KINYOUN
• Citire si interpretare:
- bacilii acido – alcoolo - rezistenti (BAAR) –
apar rosii stralucitori
- celulele inflamatorii, celulele de
descuamare sau celulele tisulare, bacteriile
neacido – alcoolo – rezistente – se vor
colora in nuante de albastru
• COLORATII SIMPLE
• Coloratia cu albastru de metilen: 2’
• Coloratia cu albastru de metilen, varianta Wayson: 10”
• COLORATII NEGATIVE
1. Coloratia negativa cu tus de India
Principiu:
particulele colorate nu pot penetra capsula bacteriilor sau levurilor, care apare necolorata pe fondul colorat al preparatului
Indicatii:
depistarea Cryptococcus neoformans, depistarea capsulei bacteriene in primoculturi, urmarirea reactiei de umflare a capsulei etc.
• COLORATII NEGATIVE
• Citire si interpretare:
Bacteriile si levurile capsulate apar inconjurate cu un halou clar pe fondul uniform intunecat al preparatului.
• COLORATII NEGATIVE
2. Coloratia negativa cu nigrozina
• COLORATII FLUORESCENTE
Coloratia cu auramina – rhodamina
Principiu:
• Structuri speciale, lipoidice, asociate peretelui unor bacterii confera rezistenta la decolorarea protoplastului prin solutii de acizi sau/si alcool. Bacteriile care nu poseda asemenea structuri sunt decolorate si trebuie recolorate pentru a putea fi observate.
• Endosporii bacterieni, ascosporii, chistele unor protozoare (ex. Cryptosporidium) sunt de asemenea acidorezistenti gratie invelisurilor lor.
• COLORATII FLUORESCENTE
• Invelisurile unor microorganisme (micobacterii,endospori, chiste de Cryptosporidium etc.) sunt impermeabile si pentru colorant, care trebuie sa actioneze in solutii concentrate fie la cald, fie in prezenta unor detergenti.
• COLORATII FLUORESCENTE
Indicatii:
Triajul frotiurilor din prelevate patologice
pentru depistarea rapida a bacililor
tuberculozei.
• COLORATII FLUORESCENTE
Reactivi:
1. Solutie coloranta cu Auramina O – Rhodamina B
2. Solutie decoloranta (HCl conc. + alcool etilic 95°)
3. “Contracolorant”: KMnO4
• COLORATII FLUORESCENTE
Procedura:
1. Colorare cu sol. Auramina O – Rhodamina B– 15’
2. Spalare cu apa de robinet
3. Decolorare cu acid – alcool – 2’
4. Spalare cu apa de robinet
5. “Contracolorare” cu KMnO4 – 2’
6. Spalare cu apa de robinet
• COLORATII FLUORESCENTE
• Examinare la microscopul cu fluorescenta cu obiectivele de 20x si 40x, asociate cu oculare de 10x.
• COLORATII FLUORESCENTE
Citire si interpretare:
Bacilii acido – alcoolo – rezistenti se coloreaza fluorescent stralucitor in galben – portocaliu cu Auramina O – Rhodamina B.
“Contracolorarea“ cu KMnO4 face fondul frotiului negru eventual numai cu resturi celulare cu fluorescenta galbena slaba.
• ALTE TIPURI DE COLORATII
1. Coloratia May – Grünwald – Giemsa (aprecierea celularitatii)
2. Coloratia pentru Fe. (hemosiderina, sangerari tisulare)
3. Coloratia PAS (depistarea fungilor – se coloreaza in rosu)
4. Coloratia cu albastru de toluidina (pentru Pneumocystis carinii, P.jirovecii)
• ALTE TIPURI DE COLORATII
5. Coloratia cu SUDAN III – pentru lipide
6. Coloratii imunocitochimice, reactii peroxidaza – antiperoxidaza
etc.