Diagnostic de Laborator

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.MureLP8

-1-

Diagnosticul de laborator al infeciilor cauzate de enterobacterii

Escherichia coliProdus patologic- materii fecale, bil- alimente, vrsturi- urin- puroi, LCR, snge

1. Examen direct- din materii fecale nu se efectueaz examen microscopic

2. Izolare- pe medii selective i difereniale pentru enterobacterii: MacConkey, Leifson, Levine- geloz lactozat- pe geloz snge- bulion

3. Identificare- caractere morfotinctoriale

o bacili gram negativi, cu capete rotunjite, cu cili peritrichio necapsulai, nesporulai

- caractere de culturo n bulion: l tulbur uniform, formeaz depozit i un inel aderent la suprafao pe medii solide: colonii de tip S, mici

geloz snge colonii S, mici, alb-cenuii, hemoliz (urin) geloz lactozat colonii S, mici, lactozo-pozitive (galbene) Leifson, MacConkey - colonii S, mici, lactozo-pozitive (roii) Levine colonii caracteristice, lactozo-pozitive (mov nchis), cu luciu metalic

- caractere biochimiceo pe mediul SIM

H2S negativ mobilitate pozitiv indol pozitiv


-2-

o pe mediul TSI glucoz pozitiv, cu producere de gaz H2S negativ lactoz, zaharoz pozitiv

o pe mediul Simmons Simmons negativ

o pe mediul cu uree uree negativ

- identificare antigenic- prin reacii de aglutinare pe lam, cu seruri polivalente, apoi monovalente

pentru: E. coli enteropatogen EPEC E. coli enteroinvaziv EIEC E. coli enterohemoragic EHEC, serotipul O157

- se efectueaz antibiograma

GENUL KLEBSIELLAK. pneumoniaeK. oxytocaK. rhinoscleromatisK. ozaenaeProdus patologic- sput, secreii nazale n infecii respiratorii- materii fecale, bil, vrsturi, alimente n infecii digestive- urin n infecii urinare- puroi- LCR n meningite- snge n septicemii

- Examen direct- se efectueaz doar din produse patologice normal sterile

o coloraia Gram: cocobacili, Gram negativi, dispui n diplo, ncapsulai, imobili,nesporulai


-3-

o coloraia negativ- Izolare

- pe geloz, geloz snge, geloz lactozat- crete pe medii selective i difereniale pentru enterobacterii, acestea fiind folosite pentru dg.

- Identificare- caractere morfotinctoriale (vezi examenul microscopic)- caractere de cultur

o colonii mucoase de tip M, lactozo pozitive- caractere biochimice

o pe mediul SIM H2S negativ mobilitate negativ indol variabil

o pe mediul TSI fermenteaz glucoza fr producere de gaz H2S negativ descompune lactoza i zaharoza

o pe mediul Simmons Simmons pozitiv

o pe mediul cu uree ureaz pozitiv

o pe geloza lactozat descompune lactoza

- identificare antigenico prin reacia de umflare a capsulei se determin prezena antigenului K

- determinarea patogenitiio nu se efectueaz de rutino K. pneumoniae inoculat la oareci intraperitoneal sau subcutan determin septicemie

mortalantibiograma se efectueaz la toate tulpinile izolate


-4-

GENUL PROTEUSP. vulgarisP. mirabilisP. penneriP. myxofaciensProdus patologic- fac parte din microflora tubului digestiv, produc diferite infecii n condiiile scderii

rezistenei organismului.o infecii urinare urino infecii nosocomiale (plgi postoperatorii i arsuri suprainfectate) secreie din plago infecii ORL (sinuzite, otite) puroio septicemie sngeo meningite LCRo infecii digestive (mai rare) materii fecale

1. Examen direct- se practic doar din produse biologice n mod normal sterile- bacili Gram negativi, polimorfi, cu cili peritrichi, necapsulai, nesporulai2. Izolare- pe geloz simpl, pe geloz snge- pe medii selective i difereniale pentru enterobacterii: MacConkey, Leifson- geloz lactozat3. Identificare- caractere morfotinctoriale (vezi examenul direct)- caractere de cultur

o pe medii fr bil fenomenul de crare: colonii cu caracter invadant, margini dantelate ce pot

acoperi toat suprafaa mediului.


-5-

fenomenul Dienes: dac tulpinile provin de la aceeai specie i suntnsmnate pe aceeai plac, prin cretere se suprapun, dac tulpinile suntdiferite rmnentre ele o zon de demarcaie

o pe medii cu bil colonii de tip S, lactozo negative ochi de pisic (produc H2S)

- caractere biochimiceo geloz lactozat nu fermenteaz lactozao pe mediul SIM

H2S pozitiv mobilitate pozitiv indol variabil

P. mirabilis: indol negativ P. vulgaris: indol pozitiv

o pe mediul TSI fermenteaz glucoza H2S pozitiv nu descompune lactoza i zaharoza


o pe mediul cu uree ureaz pozitiv

- identificare antigenico prin reacii de aglutinare cu seruri anti O, anti H

- lizotipiao este util n scop epidemiologic pentru stabilirea sursei unei infecii nozocomialeo n practic se poate nlocui prin nsmnarea tulpinilor izolate pe o plac de geloz i

urmrirea apariiei fenomenului de crare sau a liniei Diene- determinarea patogenitii nu are importan practicantibiograma


-6-

- este obligatorie pentru fiecare tulpin izolat, deoarece pot prezenta multirezisten, mai alescele izolate din infecii nozocomiale.

Diagnosticul de laborator al dizenteriei bacilareShigella dysenteriaeShigella flexneriShigella boydiShigella sonneiProdus patologic (dizenteria bacilar):- materii fecale

o emise spontano recoltate pe sond, de la purttori

- vrsturi- alimente- de la purttori: materii fecale cu sonda Nelaton1. Examen direct nu se practic2. Izolarea- pe medii selective i difereniale pentru enterobacterii: Leifson, MacConkey, SS3. Identificare- caractere morfotinctoriale

o bacili Gram negativi, neciliai, necapsulai, nesporulai- caractere de cultur

o colonii de tip S, mici, transparente, lactozonegative- caractere biochimice

o pe mediul SIM H2S negativ mobilitate negativ indol variabil

o pe mediul TSI fermenteaz glucoza fr producere de gaz H2S negativ


-7-

nu descompune lactoza i zaharozao pe mediul Simmons

Simmons negativo pe mediul cu uree

ureaz negativ- identificare antigenic

o reacii de aglutinare pe lam cu seruri specifice de grup- determinarea patogenitii

o testul keratoconjunctivitei la cobai testul Sereny

GENUL SALMONELLAS. enterica, subspecia enterica

serogrupuri: S. typhi, S. paratyphi A, B, S. enteritidisProdus patologic- n febra tifoid

o de la bolnavi: n prima spt. snge n a II-a spt. materii fecale, bil, suc duodenal n a III-a spt. materii fecale, snge pentru serodiagnostic n a IV-a spt. - snge pentru serodiagnostic

o de la purttor: materii fecale dup administrarea unui purgativ, bil- n gastroenterite materii fecale, vrsturi, alimente- n septicemii snge1. Examen direct: nu se efectueaz2. Izolare- pe medii de mbogire- pe medii selective i difereniale pentru enterobacterii (MacConkey, Leifson, SS)- pe geloz snge, geloz lactozat3. Identificare- caractere morfotinctoriale

o bacili Gram negativi, ciliai peritrichi, nesporulai, necapsulai


-8-

- caractere de culturo pe geloz snge colonii de tip S, mici, transparenteo pe MacConkey, Leifson colonii S, lactozo-negativeo pe SS - colonii S, lactozo-negative, n ochi de pisic

- caractere biochimiceo pe mediul SIM

H2S pozitiv mobilitate pozitiv indol negativ

o pe mediul TSI fermenteaz glucoza H2S pozitiv nu descompune lactoza i zaharoza


pe mediul cu ureeureaz negativ- identificare antigenic4. Diagnostic serologic- n febra tifoid

o detectarea i titrarea anticorpilor fa de ag O, ag H ale S. typhi i paratyphi A, B(reacia Widal)

Seruri monovalente Hstabilire serotip

Seruri monovalenteAO, BO, DO, etcstabilire serogrup

pozitiv

Ser anti Vi

negativ

Seruri aglutinante polivalente OGrupI (A, B, D, E, L)Grup II (C, F, G, H)


-9-

Diagnosticul de laborator al infeciilor cauzate de Yersiniaenterocolitica

Produs patologic- n gastroenterite - materii fecale- n apendicite, limfadenopatii mezenterice - coninut apendicular, ganglioni mezenterici- n artrite septice - lichid sinovial- snge1. Examen direct - examen microscopic nu se practic2. Izolarea- pe geloz snge- pe medii selective i difereniale pentru enterobacterii: Leifson, MacConkey3. Identificare- caractere morfotinctoriale

o bacili Gram negativi, mici, colorai bipolar, necapsulai, nesporulai, ciliai- caractere de cultur

o pe mediul Leifson, geloza lactozata - colonii de tip S, mai mici ca a altorenterobacterii, transparente, lactozonegative

o pe geloz snge colonii de tip S, mici, mate, alb-cenuii, nehemolitice- caractere biochimice

o pe mediul SIM H2S negativ mobilitate

negativ la 37 C pozitiv la 30 C

indol negativo pe mediul TSI

fermenteaz glucoza fr producere de gaz H2S negativ nu descompune lactoza descompune zaharoza

o pe mediul Simmons


-10-

Simmons negativo pe mediul cu uree

ureaz pozitivo pe geloz lactozat, Leifson, MacConkey

nu descompune lactoza- identificare antigenic

o reacii de aglutinare pe lam cu seruri specifice de grup O3 i O9.- determinarea patogenitii

o nu are importan practicantibiograma se efectueaz


-11-

Germene Boala Produs patologic Examen direct Izolare

Escherichiacoli

- infecii digestive

- infecii urinare- infecii tegumentare,

suprainfecii de plgi- meningite- septicemii

- materii fecale, bil- alimente, vrsturi- urin- puroi

- LCR- snge

- din materii fecalenu se efectueazexamenmicroscopic

- pe medii selectivei diferenialepentruenterobacterii:MacConkey,Leifson, Levine

- geloz lactozat- pe geloz snge- bulion

GenulKlebsiella

- infecii digestive- infecii digestive- infecii urinare- infecii tegumentare,

suprainfecii de plgi- meningite- n septicemii

- sput, secreii nazale- materii fecale, bil, vrsturi, alimente- urin n infecii urinare- puroi

- LCR- snge

- se efectueaz doardin produsepatologice normalsterile

- pe geloz, gelozsnge, gelozlactozat

- pe medii selectivei diferenialepentruenterobacterii:MacConkey,Leifson


-12-

Genul Proteus- infecii urinare (P.

mirabilis, vulgaris)- infecii nosocomiale (plgi

postoperatorii i arsurisuprainfectate)

- infecii ORL (sinuzite,otite)

- septicemie- meningite- infecii digestive (mai rare)

- urin

- secreie din plag

- puroi

- snge- LCR- materii fecale

- se practic doardin produsebiologice n modnormal sterile

- bacili Gramnegativi,polimorfi, cu ciliperitrichi,necapsulai,nesporulai

- pe geloz simpl,pe geloz snge

- pe medii selectivei diferenialepentruenterobacterii:MacConkey,Leifson

- geloz lactozat

Shigelladysenteriae

- dizenteria bacilar - materii fecaleo emise spontano recoltate pe sond, de la purttori

- vrsturi, alimente- de la purttori: materii fecale cu sonda

Nelaton

- nu se practic - pe medii selectivei diferenialepentruenterobacterii:Leifson,MacConkey, SS


-13-

GenulSalmonella

- febra tifoid

- n gastroenterite- n septicemii

- de la bolnavi:o n prima spt. sngeo n a II-a spt. materii fecale, bil, suc

duodenalo n a III-a spt. materii fecale, snge

pentru serodiagnostico n a IV-a spt. - snge pentru

serodiagnostic- de la purttor:

o materii fecale dup administrareaunui purgativ, bil

- materii fecale, vrsturi, alimente- snge

- nu se efectueaz - pe medii dembogire

- pe medii selectivei diferenialepentruenterobacterii(MacConkey,Leifson, SS)

- pe geloz snge- geloz lactozat

Yersiniaenterocolitica

- gastroenterite- apendicite, limfadenopatii

mezenterice- artrite septice- meningite

- materii fecale- coninut apendicular, ganglioni mezenterici

- lichid sinovial- LCR

- examenmicroscopic nu sepractic

- pe geloz snge- pe medii selective

i diferenialepentruenterobacterii:Leifson,MacConkey


-14-

Germene IdentificareCaracteremorfotincto-riale

Caractere decultur

Caractere biochimice Reacii Ag-Ac,caractere depatogenitate,lizotipie,antibiogram, etc.

GL(geloz

lactozat)

SIM TSI Simmons

M. cuureeH2S I Mo G L,Z H2S

Escherichiacoli

- bacili gramnegativi, cucapeterotunjite,cu ciliperitrichi,

- necapsulai,nesporulai

- g. sg. colonii S,mici, alb-cenuii,hemoliz (urin)

- g. l. colonii S,mici

- Leifson,MacConkey -colonii S, mici

- Levine coloniicaracteristice,(mov nchis), culuciu metalic

+ - + + + + - - - identificareantigenicreacii de

aglutinare pelam, cu seruripolivalente, apoimonovalenteEPEC, EIEC,EHEC, serotipulO157

se efectueazantibiograma


-15-


Caractere decultur


GL(geloz

lactozat)

SIM TSI Simmons


GenulKlebsiella

Col. Gram:cocobacili,Gram negativi,n diplo,ncapsulai,imobili,nesporulaiCol. negativ

Colonii de tip M(mucoase) + - +

-- + + - + + identificareantigenic - prin r.

de umflare a capsuleise determin prezenaantigenului Kdeterminareapatogenitii-nu seefectueaz de rutinK. pneumoniae inoculatla oareci intraperitonealsau subcutan determinsepticemie mortalantibiograma seefectueaz la toatetulpinile izolate


-16-


Caractere decultur


GL(geloz

lactozat)

SIM TSI Simmons


GenulProteus

- bacili Gramnegativi,polimorfi,cu ciliperitrichi,necapsulai,nesporulai

pe medii fr bil- fenomenul de

crare- fenomenul Dienespe medii fr bil- colonii de tip S,

lactozo negative,ochi de pisic(produc H2S)

- + +-

+ + - + + + identificareantigenic-r. deaglutinare cu serurianti O, anti Hlizotipia-n scopepidemiologicdeterminareapatogenitii nuare importanpracticantibiograma-obligatorie


-17-


Caractere decultur


GL(geloz

lactozat)

SIM TSI Simmons


Shigelladysenteriae

- bacili Gramnegativi,neciliai,necapsulai,nesporulai

- colonii de tip S,mici, transparente,lactozonegative

- - +-

- + - - - - identificareantigenic-r. deaglutinare pe lamcu seruri specificede grupdeterminareapatogenitii-testulkeratoconjunctiviteila cobai testulSereny


-18-


Caractere decultur


GL(geloz

lactozat)

SIM TSI Simmons


GenulSalmonella

bacili Gramnegativi, ciliaiperitrichi,nesporulai,necapsulai

- g. sg colonii detip S, mici,transparente

- MacConkey,Leifson coloniiS, lactozo-negative

- SS - colonii S,lactozo-negative,n ochi de pisic

- + - + + - + + - identificareantigenic-r. deaglutinare cu serurimono si polivalenteDiagnosticserologic-n febratifoid-detectarea ititrarea anticorpilorfa de ag O, ag Hale S. typhi iparatyphi A, B(reacia Widal)


-19-


Caractere decultur


GL(geloz

lactozat)

SIM TSI Simmons


Yersiniaenterocolitica

bacili Gramnegativi, mici,coloraibipolar,necapsulai,nesporulai,ciliai

- mediul Leifson,MacConkey- col.de tip S, maimici ca a altorenterobacterii,transparente,lactozonegative

- pe g. sg. colonii de tip S,mici, mate, alb-cenuii,nehemolitice

- - - +-

+ -+

- - + identificareantigenicreacii deaglutinare pe lamcu seruri specificede grup O3 i O9.determinareapatogenitii-nu areimportan practicantibiograma seefectueaz

Diagnostic de Laborator

Documents

Transcript of Diagnostic de Laborator