Coloraii i coloraniCOLORAREA Etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul coloranilor . Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm. COLORANTUL HISTOLOGIC substan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani! COLORANI - grupri cromofore purttoare de culoare - grupri auxocrome capacitatea de a colora GRUPARILE AUXOCROME 1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul

2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului. CLASIFICAREA COLORANILOR - natura lor - caracterele chimice CLASIFICAREA COLORANILOR Dup natura lor Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil

CLASIFICAREA COLORANILOR Dupa caracterele chimice

Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ

Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie MECANISMUL COLORRII PROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen. In funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 2 3 acide bazice neutre

Colorant bazic substrat (=proteina) acid (ex: hemalaunul)

Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet MECANISMUL COLORRII Colorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou

Evidentierea componentelor celulare ( hemalaun-eozin)

ETAPELE COLORRII METODE DE COLORARE 1. In funcie de momentul colorrii 2. Dupa nr. de coloranti utilizai 3. Dup mecanism 4. Dup metoda de obinere a coloraiei optime 5. In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului Momentul colorrii Numr de colorani a b Simple folosete un singur colorant Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. ii. Mecanism - direct simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare. Succesiv Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan

Metoda de obinere a coloraiei optime - progresive prin adugri succesive pna se ajunge la momentul optim de colorare - regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl). Rezultatul colorrii i culoarea colorantului - Ortocromatic substratul se coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului - Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare ca cea a colorantului IMPREGNARI METALICE PRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani. - cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg. IMPREGNARE ARGENTIC - folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos . Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru.

COLORAIA HEMALAUN EOZIN

2 colorani: 1 2 - hemalaunul colorant bazic - eozina colorant acid REZULTATE - nuclei albastru - violet - citoplasma roz- rosu

COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL

- coloratie tricrom 1. 2. 3. hemalaun eozina albastru de metil

REZULTATE 1. 2. 3. Nuclei violet Citoplasma albastru cenusiu Fibrele de colagen albastru intens

COLORATIA VAN GIESON

- coloratie tricrom 1. 2. 3. hematoxilina feric acidul picric fuxina acid

REZULTATE 1. 2. 3. Nuclei negri Citoplasma galben Fibre de colagen rou intens

COLORATIA MASSON

- coloratie tricrom 1. 2. 3. hematoxilin feric soluia colorant A ce conine fuxin acid soluia colorant B ce conine albastru de anilin

REZULTATE 1. 2. 3 Nuclei negru Citoplasma rou violet deschis Fibrele de colagen albastru intens

COLORATIA MALLORY

Se utilizeaz : 1. 2 fuxin acid albastru Mallory ( contine albastru de anilina i orange G )

REZULTATE 1. 2. 3. 4. 5. Nuclei - rou intens Citoplasma roie Fibre de colagen i reticulin albastru esut muscular neted - violet esut muscular striat - rou portocaliu

COLORATIA AZAN

- azocarmin C - albastru Heidenhein , cu anilin i orange G REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben

COLORATII CITOLOGICE - utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare

METODA CAJAL DA FANO

- evidenierea complexului Golgi REZULTATE Nuclei necolorai Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr Citoplasma aurie

METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD

- evidenierea mitocondriilor REZULTATE Nucleu necolorat Nucleol negru Mitocondrii puncte negre

TEHNICI DE EXAMINARE A TESUTULUI EPITELIAL IMPREGNAREA ARGENTICA RANVIER

- evidentierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr IMPREGNARE ARGENTICA ESUT EPITELIAL TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV

COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN - granulaiile din mastocite prin coloraie metacromatic n rou violet

TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE 1. Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. a. b. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu Rezorcin fuxina - albastre Orcein cafeniu - roscate Fibre reticulin

Fibre elastice orcein impregnare argentic

TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULAR METODA HEIDENHEIN (cu hematoxilina ferica) - evidentiaz structura periodic a miofibrilelor. Se remarc alternana de zone clare i ntunecate.

Metode speciale pentru evidenierea esutului nervos - metoda Nissl impregnare argentic Evidenierea tecii de mielin prin fixare cu tetraoxid de osmiu Impregnare Ag Nissle