Prescurtari Milf mobilitate indol lizindecarboxilaza fenilalanindezaminaza Aabtl agar cu lactoza Cled cystine lactose electrolyte deficient

5.3.1.1. Diagnosticul faringitelor streptococice

Identificare definitivaIdentificarea definitiva a streptococilor patogeni se realizeaza utilizand

testul de latex aglutinare.Lancefield a demonstrat faptul ca majoritatea streptococilor patogeni poseda antigene polizaharidice specifice care permit clasificarea acestora in grupuri. Prezenta acestor antigene specifice de grup, poate fi demonstrata cu ajutorul particulelor de latex acoperite in prealabil cu anticorpi specifici de grup. Aceste particule vor aglutina in prezenta antigenului omolog sau vor ramane sub forma unei suspensii fine uniforme in absenta antigenului corespunzator.

Kit-ul ,,Prolex Streptococcal Grouping Latex” se bazeaza pe eliberarea antigenului specific din celulele bacteriene cu ajutorul extractului de acid nitros. Antigenul rezultat reactioneaza cu particulele de latex oferind o metoda specifica si rapida de identificare agrupurilor de streptococi A, B, C, D, F si G.

Reactivi din trusa- reactiv latex de grup A- reactiv latex de grup B- reactiv latex de grup C- reactiv latex de grup D- reactiv latex de grup F- reactiv latex de grup G- reactiv de extractie 1- reactiv de extractie 2- reactiv de extractie 3- control polivalent pozitiv- carduri pentru efectuarea testelor- betisoare de amestecare

Pregatirea culturii pentru efectuarea testuluiTulpinile de streptococ ce vor fi suspuse testului trebuie sa provina din culturi pure crescute pe geloza-sange la 37 grade C, timp de 18-24h. se vor selectiona 4 colonii mari sau mai multe colonii mici, dupa caz.

Etapele de lucru1. Toate componentele trebuie aduse la temperatura camerei (22-28°C) si se

agita tubutile pentru a obtine o suspensie omogena de latex inainte de a fi utilizate.

2. se utilizeaza cate o eprubeta pentru fiecare proba testata3. se adauga o picatura din reactivul de extractie 1 in fiecare eprubeta

4. se selectioneaza 1-4 colonii β-hemolitice utilizand o ansa de unica folosinta si se suspenda in reactivul de extractie 1. in cazul in care coloniile sunt mici, se selecteaza ma multe, pana cand reactivul de extractie devine tulbure. Coloniile trebuie selectate dintr-o zona in care gradul de contaminare este redus.

5. se adauga 1 picatura din reactivul de extractie 2 in fiecare eprubeta6. se amesteca solutia timp de 5-10 secunde7. se adauga 5 picaturi din rectivul de extractie 3 in fiecare eprubeta. Se

amesteca solutia conform punctului 6.8. pe cardul de testare se adauga in fiecare cerc cate o picatura de latex ce

se doreste a fi testat9. cu ajutorul unei pipete se adauga in fiecare serc cate o picatura din

extractul obtinut in eprubete10.cu ajutorul betisoarelor din kit se disperseaza fiecare picatura de amestec

pe toata suprafata cercului in care se afla11.se agita usor cardul timp de 1 minut. In conditiile unei iluminari normale se

observa aglutinarea prin formarea unor grunji. Controlul pozitiv polivalent se foloseste in acelasi fel pentru a verifica performantele latexurilor utilizate

12.cardurile utilizate sunt inactivate si distruse

Interpretarea rezultatelorRezultate pozitive: aparitia aglutinarii cu unul din latexurile de grup. In cazul aparitiei unei aglutinari slabe se repeta testul utilizand un inocul mai mare.Rezultate negative: lipsa aglutinarii

5.3.1.4. Exudatul nazal

Identificarea definitivaIdentificarea rapida a speciei Staphylococcus aureus se realizeaza cu ajutorul testului de aglutinare ,,Prolex Staph Latex Kit”. Reactivii din kit contin fibrinogen si imunoglobuline G care se cupleaza cu coagulaza legata, respectiv proteina A din peretele celulalar al Staphylococcus aureus, ceea ce determina aglutinarea amestecului dintre reactiv si cultura de Staphylococcus aureus.

Reactivi din trusa- reactiv latex pentru testarea stafilococului- reactiv latex de control negativ- carduri test- betisoare pentru a amesteca

Etapele de lucru:1. se aduce reactivul latex la temperatura camerei pentru 10 minute inainte

de utilizare2. se agita puternic tubul pentru a obtine o suspensie omogena de latex

3. pe cardul de testare se adauga pentru fiecare proba in cate un cerc cate o picatura de latex

4. cu ajutorul unei anse se preleveaza colonii suspecte si se descarca in reactivul latex din cerc, amestecand si dispersand amestecul pe toata suprafata cercului

5. se agita usor cardul timp de 20 de secunde. In conditiile unei iluminari normale se observa aglutinarea prin formarea unor grunji.

6. daca rezultatul este pozitiv, se repeta pasii 2-5 utilizand reactivul latex de control negativ

Interpretarea rezultatelorRezultatele pozitive: aparitia aglutinarii in 20 de secunde de agitare utilizand reactivul latex pentru testare si lipsa aglutinarii utilizand reactivul latex de control negativRezultatele negative: lipsa aglutinarii

5.3.1.3. Diagnosticul candidozelor bucalede pe mediul Sabouraud se face identificare cu ajutorul trusei candifast vezi il 29

5.3.1.5. secrectie otica Geloza sange, cled

A. Identificare bacili Gram negativi – familia Enterobacteriaceae

Mediul MILF - se însămânţează folosind tehnica însămânţării coloanei de mediu solid astfel – cu ansa cu fir drept se inteapa mediul pana in partea inferioara a tubului retrăgând ansa pe acelaşi traiect. Se urmăreşte:

- decarboxilarea lizinei- dezaminarea fenilalaninei

5.4.3.1. Coprocultura pentru germenii din grupul Shigella

TSI -fermenteaza glucoza fara producere de gaz (partea in coloana a mediului)

-nu produce H2S-nu produce acid din lactoza, zaharoza (partea inclinata a mediului)

MIU -imobila-indol variabila-ureaza negativa

MILF -lizin-decarboxilaza negativa-fenil-alanin-dezaminaza negativa

CS - negativ

5.4.3.2. Coprocultura pentru germenii grupului Salmonella

TSI -fermenteaza glucoza cu producere de gaz (partea in coloana a mediului)

-produce H2S-nu produce acid din lactoza – zaharoza (partea inclinata a mediului)

MIU -mobila-indol negativa-ureaza negativa

MILF -lizindecarboxilaza pozitiva-fenilalanindezaminaza negativa

CS – isi schimba culoarea spre albastru

5.4.3.3. Coprocultura pentru E. coli

TSI -fermenteaza glucoza cu producere de gaz (partea dreapta)-nu produce H2S-produce acid din lactoza-zaharoza (partea inclinata)

MIU -mobila / imobila-indol pozitiva

-ureaza negativaMILF -lizindecarboxilaza pozitiva / negativa

-fenilalanindezaminaza negativa CS - negativ