Cat

edra

Bio

chim

ie ?

i Bio

chim

ie C

linic?

CATEDRA BIOCHIMIE ?I BIOCHIMIE CLINIC?FACULTATEA STOMATOLOGIE, ANUL I

RED.: 01

DATA: 24.01.11

Pag. 1 / 4

Analizat???i aprobat? la ?edin?a catedreidin 23.04.2013, proces verbal nr. 17

?eful Catedrei Biochimie ?i Biochimie Clinic?,conf. universitar, dr. hab. n medicin?

Olga Tagadiuc

____________________

Indica?ia metodic? nr. 14

Tema: Glucidele rolul biologic, clasificarea.Digestia ?i absorb?ia glucidelor. Metabolismul glicogenului.

Experien?a 1. Determinarea activit??ii amilazei n ser (metoda cinetic?)Principiul metodei: Amilaza hidrolizeaz? substratul 2-cloro-4-nitrofenil-?-maltotriozid (CNP-G3)cu formarea polimerilor glucozei ?i 4-nitrofenolului. Viteza de cre?tere a absorban?ei datorit?acumul?rii de 4-nitrofenol n mediul de reac?ie este propor?ional? cu activitatea amilazei n serulexaminat.Reagen?i:Reagentul de lucru, con?ine:

Solu?ie-tampon MES, pH 6,0 . 90,0 mmol/lNaCl..500 mmol/lSulfocianid de potassium ...0,60 mol/lAcetat de calciu .7,2 mmol/lCNP-G3..2,7 mmol/l

Modul de lucru:Reagent de lucru 1 mlSer sangvin 0,05 ml

? se amestec???i IMEDIAT se m?soar? extinc?ia ini?ial? a probei (E0) fa?? de ap? distilat? la 405 nm, n cuva de 1cm.

? se incubeaz? EXACT 5 min la temperatura camerei se??soar? extinc?ia final? a probei (E1) fa?? de ap? distilat? la405 nm, n cuva de 0,3 cm.

Rezultatul ob?inut: E0 = ________ E1 = ________

Calculare: Activitatea amilazei = (E1 E0) / 5 x 3178 U/L =_______________________

Valori normale: 35115 U/LSemnifica?ie diagnostic?:? Valori crescute se constat? n: pancreatita acut?, leziuni inflamatorii ale pancreasului, necroza

extins? a pancreasului, cancer de pancreas, afec?iuni abdominale acute, ?oc, traumatismeabdominale ?i cerebrale;

? Valori sc?zute se constat? n atrofiile pancreatice; afectarea acut? sau cronic? hepatocelular?.

Concluzie: ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

CATEDRA BIOCHIMIE ?I BIOCHIMIE CLINIC?FACULTATEA STOMATOLOGIE, ANUL I

RED.: 01

DATA: 24.01.11

Pag. 2 / 4

ntreb?ri pentru autopreg?tire:1. Rolul biologic al glucidelor.2. Clasificarea glucidelor.3. Structura ?i propriet??ile glucidelor (ale principalelor mono-, di- ?i polizaharide).4. Digestia ?i absorb?ia glucidelor n tractul gastrointestinal. Deregl?rile digestiei ?i

absorb?iei glucidelor (intoleran?a dizaharidelor). Rolul glucidelor alimentare ndezvoltarea afec?iunilor din?ilor ?i ale ?esuturilor moi ale cavit??ii bucale.

5. Sinteza ?i degradarea glicogenului: reac?iile par?iale, enzimele, coenzimele,reglarea ?i interrela?iile reglatoare ale proceselor.

Indica?ia metodic? nr. 15Tema: Glicoliza ?i oxidarea aerob? a glucozei. Gluconeogeneza.

Experien?a 1. Dozarea glucozei - metoda cu glucozoxidaz?

Principiul metodei: Glucozoxidaza catalizeaz? oxidarea glucozei n acid gluconic (n prezen?aoxigenului): Glucoz? + O2 Acid gluconic + H2O2Peroxidul de hidrogen format reac?ioneaz? cu 4- amino-antipirina ?i fenolul, n prezen?a peroxidazei?i formeaz? chinonimina.

2H2O2 + fenol + 4-amino-antipirina chinonimina +4H2OIntensitatea culorii produsului rezultat este propor?ional? cu concentra?ia de glucoz? din proba deanalizat ?i se m?soar? spectrofotometric.Reagen?i:Reactiv enzimatic de lucru:

Tampon fosfat pH = 7,470 mmol/lFenol ..5 mmol/lGlucozoxidaza..> 10 U/mlPeroxidaza .> 1 U/ml4-amino-antipirina.0,4 mmol/l

Modul de lucru:Reactiv enzimatic de lucru (1) 1,5 ml

? se cite?te extinc?ia ini?ial? a probei (E0) fa?? de martor (ap? distilat?) la 500 nm, n cuva de 0,3 cm.

Ser sangvin 0,05 ml

? se agit???i se incubeaz? 10 min la temperatura camerei? se cite?te extinc?ia final? a probei (E1) fa?? de martor (ap? distilat?)

la 500 nm, n cuva de 0,3 cm. Colora?ia e stabil? 2 ore.

Rezultat: E0 = _________ E1 = _________

Calcul: Glicemie (mmol/l) = (E1- E0) x 30 = _________

Not?: Coeficientul 30 a fost calculat reie?ind din concentra?ia ?i extinc?ia standardului.

CATEDRA BIOCHIMIE ?I BIOCHIMIE CLINIC?FACULTATEA STOMATOLOGIE, ANUL I

RED.: 01

DATA: 24.01.11

Pag. 3 / 4

Valori normale: Ser: 3,3 5,5 mmol/l

Valoarea diagnostic? a determin?rii concentra?iei glucozei n ser.Hiperglicemia se ntlne?te la pacien?ii cu diabet zaharat, pancreatita acut?, n cazurile de exita?ie

a sistemului nervos central, n hiperfunc?ia hipofizei, glandelor suprarenale ?i tiroidei.Hipoglicemia se ntlne?te n hipofunc?ia glandelor endocrine enumerate mai sus, n hiperfunc?ia

insulelor Langerhans, la supradozarea insulinei, n bolile de rinichi cnd este dereglat procesul dereabsorb?ie al glucozei.

Concluzie: ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

ntreb?ri pentru autopreg?tire:1. Glicoliza reactiile, reglarea ?i rolul biologic. Sistemele naveta glicerolfosfat ?i malat-aspartat de transport a NADH-ului din

citozol n mitocondrie (f??? formule).2. Bilan?ul energetic al oxid?rii anaerobe ?i aerobe a glucozei.3. Gluconeogeneza substratele, etapele de ocolire (n cuvinte), enzimele,

necesit??ile energetice ?i reglarea.

Indica?ia metodic? nr. 16Tema: Metabolismul fructozei ?i galactozei. ?iclul pentozofosfa?ilor.

Reglarea metabolismului glucidic.Experien?a 1. Reac?ia Seliwanoff (Reac?ia de diferen?iere a cetozelor de aldoze)

Principiul reac?iei: Cetozele (fructoza), prin nc?lzire n prezen?a acidului clorhidric ?i a rezorcinei,coloreaz? solu?ia n ro?u-vi?iniu sau n ro?u. Fructoza prin nc?lzire n mediu puternic acid pierde treimolecule de ap? transformndu-se n oximetilfurfurol. Aceasta reac?ioneaza cu rezorcina formnd uncompus colorat n ro?u-vi?iniu sau ro?u.

Modul de lncru: n dou? eprubete se pun cu pipeta 1 ml solu?ie Seliwanoff la care se adaug? nprima eprubet? 2-3 pic?turi de fructoz?, iar n eprubeta a doua - 2-3 pic?turi solu?ie de glucoz?.Eprubetele se nc?lzesc. Se noteaz???i se explic? rezultatele reac?iilor.

Rezultatul ob?inut: ____________________________________________________________ ____________________________________________________________Concluzie: ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

ntreb?ri pentru autopreg?tire:

1. Metabolismul fructozei c?ile hepatic???i muscular?: reac?iile par?iale, enzimele,rolul biologic.

2. Metabolismul galactozei: reac?iile par?iale, enzimele, rolul biologic.

CATEDRA BIOCHIMIE ?I BIOCHIMIE CLINIC?FACULTATEA STOMATOLOGIE, ANUL I

RED.: 01

DATA: 24.01.11

Pag. 4 / 4

3. Ciclul pentozofosfa?ilor. Reac?iile par?iale ale etapei oxidative, enzimele,coenzimele, reac?ia stoichimetric? a I etape ?i a ntregului proces, rolul biologic,topizarea organic?.

4. Reglarea metabolismului glucidic n organism:? influen?a sistemului nervos simpatic ?i parasimpatic;? influen?a hormonilor pancreatici (insulina, glucagonul), structura lor,

mecanismul de ac?iune, efectele biologice;? influen?a catecolaminelor ?i glucocorticoizilor;? rolul principiului retroinhibi?iei (feed back) n reglarea metabolismului

glucidic.5. Perturb?rile metabolismului glucidic:? hiperglicemia, hipoglicemia, glucozuria;? diabetul zaharat: cauze, deregl?ri ale metabolismului glucidic, lipidic ?i proteic.? no?iuni generale despre deregl?rile ereditare ale metabolismului glucidelor:

galactozemie, fructozurie, glicogenoze ?i aglicogenoze.

Indica?ia metodica nr. 17

Totalizare pe capitolul V -Chimia ?i metabolismul glucidic