Analizacalitatii Microbiologice a Apeii 333 Rev 03

ANALIZA CALITĂŢII MICROBIOLOGICE A APEI

Direcţia CalitateServiciu Controlul Calităţii

Cod: PC-333 Data intrării în vigoare:

Nr. pag.:1/7Rev. nr.: 03

Funcţia Nume şi prenume

SemnăturăData

ÎntocmitŞef laborator Control Contaminare

Biol. Elisabeta Petru

Verificat

Şef Serviciu Controlul Calităţii Analize Microbiologice si Farmacodinamice

Biol. Marcela Strungariu

AprobatResponsabil Asigurarea Calităţii pentru Controlul Calităţii

Farm. Corina Luana Ciubotaru

Scop: Stabilirea şi cunoaşterea metodelor de analiză, a responsabilităţilor şi a înregistrărilor care se efectuează pentru verificarea parametrilor de calitate microbiologică a probelor de apă.

Domeniu de aplicare: Controlul Calităţii Analize Microbiologice şi Farmacodinamice - Laborator Control Contaminare Asigurarea Calităţii

Procedura:1. ReferinţePh. Eur.„Water for injection”, „Water Purified”, cap.2.6.12 „Microbiological examination of nonsterile products: microbial enumeration tests”, cap.2.6.13 „Microbiological examination of nonsterile products: tests for specified microorganisms”, cap.5.1.4 „Microbiological quality of non-sterile pharmaceutical preparation and substances for pharmaceutical use”USP „Water for injection”, „Water Purified” cap.1231 „Water for Pharmaceutical Purpose” cap.61 „Microbiological examination of nonsterile products: microbial enumeration tests”, cap.62 „Microbiological examination of nonsterile products: tests for specified microorganisms”, cap.1111 „Microbiological atributes of nonsterile pharmaceutical products”MP-AF „Program de monitorizare a calităţii apei farmaceutice”PC-124 „Calitatea apei farmaceutice”PC-202 „Teste pentru microorganisme specifice“PC-293 „Identificarea microorganismelor cu ajutorul echipamentului VITEK 2 Compact”PC-341 „Norme de bună practică de laborator”AC-PG-032 „Investigarea rezultatelor în afara specificaţiilor”

2. DefiniţiiApa farmaceutică este apa utilizată în producerea substanţelor active şi a produselor finite.

2. Categorii de apă testate în cadrul laboratorului Control Contaminare:- apă potabilă- apă demineralizată - apă purificată - apă pentru injecţii

Cod: PC – 333 Data intrării în vigoare: Nr. pag.:2/7Rev. nr.: 03


SemnăturăData

Întocmit

Şef laborator Control Contaminare


Verificat



Aprobat

Responsabil Asigurarea Calităţii pentru Controlul Calităţii


4. Parametri de calitate microbiologică Tabel 1

Categorie de apă analizată

Parametru analizat Limită alertă Limită admisibilitate

Apă potabilă Escherichia coli nr. UFC / 100 mlEnterococi nr. UFC / 100 ml

--

absentabsent

Apă demineralizată Nr. total microorganisme aerobe UFC / ml max. 400 max. 500Apă purificată Nr. total microorganisme aerobe UFC/ ml

Microorganisme specifice / ml: Bacterii gram negative tolerante pentru bilă Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Salmonella Staphylococcus aureus Candida albicans

max. 90

NANANANANANA

max. 100

absentabsentabsentabsentabsentabsent

Apă pentru injecţii Nr. total microorganisme UFC / 100 mlMicroorganisme specifice /ml: Bacterii gram negative tolerante pentru bilă Pseudomonas aeruginosa

max. 6

NANA

max. 10

absentabsent

5. Prelevarea probelor de apă se realizează conform procedurii PC-124 „Calitatea apei farmaceutice”.Probele prelevate se transferă:- la laboratorul Controlul Sterilităţii - apa pentru injecţii - la laboratorul Control Contaminare - apa potabilă - apa demineralizată - apa purificatăProbele de apă prelevate trebuie testate în cel mult două ore de la prelevare, sau în maxim 12 ore dacă probele sunt menţinute la 2 - 8 0C (USP cap.1231 „Water for Pharmaceutical Purpose”).

6. Cerinţe pentru efectuarea analizelor 6.1.Echipamente:- hotă cu flux de aer laminar „Testare contaminare microbiană condiţii de mediu şi utilităţi”- cameră termostat de 30-35°C- cameră termostat de 20-25°C- incubator de 42-44°C- aparat de filtrare – pompă Milliflex Plus- echipament Vitek 2 Compact



SemnăturăData

Întocmit



Verificat



Aprobat



6.2. Materiale- pâlnii Milliflex sterile. Fiecare pâlnie prezintă în partea inferioară o membrană filtrantă cu porozitate nominală de 0,45µ- pense sterile- pipete gradate sterile (1ml, 5ml, 25ml)- plăci Petri sterile 90/100 mm

6.3. Medii de cultură / soluţii- mediu caseină soia agarizat - casete Milliflex cu mediu de cultură R2A, sterile- mediu caseină soia lichid- soluţie tampon cu clorură de sodiu peptonă, pH 7,0 - medii selective pentru microorganisme specifice conform procedurii PC-202 „Teste pentru microorganisme specifice“. Mediile de cultură şi soluţia tampon cu clorură de sodiu peptonă, pH 7,0 sunt preparate în cadrul laboratorului Controlul Sterilităţii şi Pregătire Medii de Cultură conform procedurilor standard de operare specifice.Fiecare lot de mediu de cultură livrat laboratorului Control Contaminare este însoţit de un „Certificat de analiză”, în care este înregistrat: aspectul macroscopic, pH-ul, sterilitatea şi valoarea nutritivă a mediului de cultură.

6.4. Soluţie alcoolică 70 % sterilă, preparată conform procedurii PC-241 „Prepararea soluţiilor de curăţire şi dezinfecţie“.

7. Divizarea mediilor de cultură în plăci PetriLaboranta:- fluidifică mediul de cultură agarizat pe baia de apă, agitând uşor- transferă cu o pipetă sterilă, în hota cu flux de aer laminar, câte 20 ml mediu fluidificat în plăci Petri sterile- împachetează plăcile Petri cu mediu de cultură în hârtie semipergament, în poziţie inversă - identifică plăcile Petri cu: data divizării mediului de cultură, denumirea şi lotul mediului nutritiv- transferă plăcile Petri cu mediile de cultură divizate în camera termostat la 30-35ºC, pentru verificarea sterilităţii.În hota cu flux de aer laminar, după 72 de ore de incubare, înainte de utilizare, biologul verifică sterilitatea mediilor de cultură divizate.

8. Analiza calităţii microbiologice a apei8.1. Apa potabilăTestul pentru enterococi- biologul, cu o pipetă sterilă transferă 1 ml de apă potabilă în 2 plăci Petri cu mediu bilă aesculin azidă agar. Identifică proba cu: numele probei, punctul de prelevare, denumirea mediului de cultură, data.



SemnăturăData

Întocmit



Verificat



Aprobat



- laboranta împachetează în hârtie semipergament plăcile Petri cu probe şi mediu de cultură, le identifică şi le transferă în camera termostat la 30-350C în vederea incubării, timp de 48 ore pentru dezvoltarea eventualilor enterococi.

Interpretarea rezultatelorBiologul vizualizează probele după 48 de ore de incubare.Creşterea coloniilor de culoare maroniu deschis până la negru, a coloniilor albastre sau albastru verzui indică posibila prezenţă a enterococilor. Aceasta se confirmă prin teste de identificare conform procedurii PC-293 „Identificarea microorganismelor cu ajutorul echipamentului VITEK 2 Compact”. Proba corespunde cu cerinţele testului dacă coloniile de tipurile descrise nu sunt prezente sau dacă testele de identificare pentru confirmare sunt negative.Biologul exprimă rezultatul ca: Enterococi - prezent sau absent / 100 ml apă potabilă.

Testul pentru Escherichia coliBiologul:- cu o pipetă sterilă transferă 10 ml de apă potabilă în 100 ml mediu caseină soia lichid şi agită uşor- incubează proba obţinută la 30-35˚C, timp de 18 - 24 de ore - după 24 de ore, cu o pipetă sterilă, transferă 1 ml din proba incubată în 100 ml mediu lichid MacConkey - incubează proba la 42-44˚C, timp de 24 - 48 ore- transferă 1 ml din proba incubată pe 2 plăci Petri cu mediu MacConkey agar- incubează plăcile Petri cu mediul de cultură şi proba de analizat la 30-35˚C, timp de 18 - 72 ore

Interpretarea rezultatelorBiologul vizualizează probele la sfârşitul perioadei de incubare.Proba corespunde cu cerinţele testului dacă nici o colonie nu este prezentă.Creşterea coloniilor indică posibila prezenţă a microorganismului Escherichia coli. Aceasta se confirmă prin teste de identificare conform procedurii PC-293 „Identificarea microorganismelor cu ajutorul echipamentului VITEK 2 Compact”. Proba corespunde cu cerinţele testului dacă testele de identificare pentru confirmare sunt negative.Biologul exprimă rezultatul ca: Escherichia coli - prezent sau absent / 100 ml apă potabilă.

8.2. Apa demineralizată- la hota cu flux de aer laminar, biologul transferă căte 1 ml apă demineralizată pe suprafaţa mediului caseină soia agarizat din 2 plăci Petri. Identifică proba cu: numele probei, punctul de prelevare, denumirea mediului de cultură, data.- laboranta împachetează în hârtie semipergament plăcile Petri cu probe şi mediu de cultură, le identifică şi le transferă în camera termostat la 30-35 0C în vederea incubării, timp de 5 zile.

Interpretarea rezultatelorBiologul: - vizualizează probele la sfârşitul perioadei de incubare



SemnăturăData

Întocmit



Verificat



Aprobat



- numără coloniile dezvoltate pe mediile de cultură din cele două plăci Petri- calculează media aritmetică a coloniilor dezvoltate pe cele două plăci Petri- exprimă rezultatul ca număr de UFC/ ml apă demineralizatăProba este corespunzătoare dacă:- numărul total de microorganisme aerobe este maxim 500 UFC / ml apă demineralizatăÎn cazul în care apar rezultate în afara specificaţiei procedează conform prevederilor procedurilor AC-PG-032 „Investigarea rezultatelor în afara specificaţiilor” şi PC–341 „Norme de bună practică de laborator”.

8.3. Apa purificată8.3.1. Determinarea numărului total de microorganisme aerobeBiologul:- decontaminează capul pompei Milliflex cu soluţie alcoolică 70 %, sterilă- deschide pompa prin acţionarea tastei „ON/OFF”- selectează meniul „Sampling”, submeniurile „Manual” şi „Volum OFF”. Confirmă selecţia prin acţionarea tastei „OK”- cu o pensă sterilă aplică pe capul pompei un separator aseptic- montează pe capul pompei pâlnia Milliflex sterilă de 100 ml şi îi scoate capacul. Aşează capacul pe masa hotei cu suprafaţa exterioară în jos - tansferă 1 ml apă purificată în pâlnia Milliflex- acţionează tasta „START” pentru filtrarea probei. După ce proba a fost filtrată spală membrana cu 100 ml soluţie tampon cu clorură de sodiu peptonă pH 7,0- acţionează tasta „START” pentru uscarea membranei- pune capacul pâlniei Milliflex- verifică integritatea şi sterilitatea unei casete Milliflex cu mediu de cultură R2A- scoate capacul alb/opalescent al casetei Milliflex - îndepărtează cu grijă de pe capul pompei pâlnia Milliflex cu membrana filtrantă şi proba de analizat şi o aplică pe caseta cu mediu de cultură. Apasă ferm cu podul palmei până la detaşarea pâlniei. Membrana trebuie să fie în contact direct cu mediul de cultură.- transferă capacul pâlniei pe caseta cu mediu de cultură, membrana filtrantă şi proba de analizat- identifică proba cu: numele probei, punctul de prelevare, denumirea mediului de cultură, data- cu o pensă sterilă îndepărtează de pe capul pompei separatorul aseptic- decontaminează capul pompei Milliflex cu soluţie alcoolică 70 %, sterilă- procedează în mod asemănător pentru filtrarea a încă 1 ml apă purificată.

Controlul negativ: Biologul:- cu o pipetă sterilă transferă 1 ml soluţie tampon cu clorură de sodiu peptonă pH 7,0 într-o eprubetă cu 10 ml mediu caseină soia lichid - pentru controlul sterilităţii acesteia- imersează pensa utilizată într-o eprubetă cu 10 ml mediu caseină soia lichid - pentru controlul sterilităţii acesteia

Laboranta:



SemnăturăData

Întocmit



Verificat



Aprobat



- împachetează casetele Milliflex cu probe şi mediu de cultură în hârtie semipergament, le identifică cu: numele probei, punctul de prelevare, denumirea mediului de cultură, data şi le transferă în camera termostat la 30-35oC pentru incubare, în poziţie inversă, timp de 5 zile. - transferă eprubetele ce constituie controalele negative în camera termostat la 30-35 oC pentru incubare, timp de 5 zile.

Interpretarea rezultatelorBiologul: - vizualizează probele la sfârşitul perioadei de incubare - numără coloniile dezvoltate pe mediile de cultură din cele două plăci - calculează media aritmetică a coloniilor dezvoltate pe cele două plăci - exprimă rezultatul ca număr de UFC / ml apă purificatăProba este corespunzătoare dacă:- controalele negative nu prezintă creşteri microbiene- numărul total de microorganisme aerobe este maxim 100 UFC / ml apă purificată

În cazul în care apar rezultate în afara specificaţiei procedează conform prevederilor procedurilor AC-PG-032 „Investigarea rezultatelor în afara specificaţiilor” şi PC–341 „Norme de bună practică de laborator”.

8.3.2. Determinarea microorganismelor specificeSe efectuează pe medii selective care permit dezvoltarea şi identificarea anumitor categorii de microorganisme specifice conform procedurii PC 202 - „Teste pentru microorganisme specifice “. Determinarea microorganismelor specifice din probele de apă purificată se realizează în funcţie de secţia care utilizează apa purificată (Tabel 2) conform criteriilor de acceptare a calităţii microbiologice pentru fiecare formă farmaceutică nonsterilă (cap. 5.1.4. – Farmacopeea Europeană).

Tabel 2Forma farmaceutică Microorganisme specifice

Produse farmaceutice solide uz oral - capsule, comprimate Escherichia coliProduse farmaceutice semisolide de uz cutanat (unguente, creme, geluri), supozitoare şi ovule

Pseudomonas aeruginosaStaphylococcus aureusCandida albicans

Substanţa farmaceutică activă vrac - nistatină Bacterii gram negative tolerante pentru bilăEscherichia coliSalmonellaPseudomonas aeruginosaStapylococcus aureus

8.4. Apa pentru injecţii8.4.1. Determinarea numărului total de microorganisme aerobe se efectuează în cadrul laboratorului Controlul Sterilităţii şi Pregătire Medii de Cultură conform procedurii PC-132 “Testarea sterilităţii prin metoda filtrării prin membrană”.



SemnăturăData

Întocmit



Verificat



Aprobat



8.4.2. Determinarea prezenţei microorganismelor Pseudomonas aeruginosa şi a bacteriilor gram negative tolerante pentru bilă se efectuează la probele care prezintă creşteri microbiene, în cadrul laboratorului Control Contaminare, conform procedurii PC-293 „Identificarea microorganismelor cu ajutorul echipamentului VITEK 2 Compact”.

9. ÎnregistrăriÎn laboratorul Control Contaminare, laboranta înregistrează probele prelevate în condica „Prelevare probe apă, abur şi rezultatele analizelor” cod CC-F-206.33 şi iniţiază fişa analitică.Biologul înregistrează analizele efectuate în condica „Rezultate testare contaminare microbiană la probe de apă, abur” cod CC-F-206.85 şi în fişa analitică.Şeful de laborator analizează rezultatele înregistrate în fişa analitică, emite concluzia analizei, semnează fişa analitică şi apoi se redactează certificatul de analiză, conform procedurii PC-022 „Eliberarea certificatelor de analiză ”.

10. ResponsabilităţiLaboranta:- prelevează probele de apă - transportă şi distribuie probele la laboratoarele Control Contaminare, Controlul Sterilităţii şi Pregătire Medii de Cultură- înregistrează probele prelevate şi iniţiază fişele analitice - pregăteşte sticlăria şi materialele necesare testelor- participă alături de biolog la efectuarea analizelorBiologul:- verifică probele predate în laborator - efectuează analiza probelor- înregistrează rezultatele obţinute în condicile specifice şi în fişa analiticăŞeful de laborator:- analizează rezultatele înregistrate în fişa analitică şi emite concluzia analizei - iniţiază redactarea certificatului de analiză pe baza fişelor analitice (şeful laboratorului Analize Materii Prime, Ambalaje Primare şi Secundare)- verifică şi semnează Certificatele de analiză- investighează rezultatele în afara specificaţiilor conform procedurii AC-PG-032 „Investigarea rezultatelor în afara specificaţiilor” şi PC-341 „Norme de bună practică de laborator”.

11. Istoricul revizuiriiCod Revizia Descrierea reviziei DataPC-333 00 Procedură nouă: „Analiza calităţii microbiologice a apei” 30.04.2010PC-333 01 Au fost modificate subcapitolele: „Apa pentru injecţii” şi

7.5. „Apa înalt purificată” (se analizează în cadrul laboratorului Controlul Sterilităţii şi Pregătire Medii de Cultură).

01.04.2011



SemnăturăData

Întocmit



Verificat



Aprobat



Subcapitolul 6.1. „Divizarea mediilor de cultură în plăci Petri” a fost reunit cu subcapitolul 6.2. „Pregătirea plăcilor cu medii de cultură”.S-au reorganizat capitolele 8. „Înregistrări” şi 9 „Responsabilităţi”.

PC-333 02 A fost modificat capitolul 7. „Analiza calităţii microbiologice a apei”. A fost modificată metoda de analiză a calităţii microbiologice a probelor de apă potabilă şi a celor de apă purificată. La probele de apă purificată se utilizează pompa Milliflex Plus în locul aparatului de filtrare tip „Millipore”. La probele de apă purificată prelevate de la secţia Unguente şi Supozitoare s-a introdus testul pentru Candida albicans.Au fost restructurate capitolele 8. „Înregistrări” şi 9. „Responsabilităţi”.

20.08.2012

PC-333 03 A fost modificat capitolul 1 „Referinţe”.A fost introdus capitolul 2 “Definiţii”.A fost introdus subcapitolul 8.4. “Apa pentru injecţii”.

Analizacalitatii Microbiologice a Apeii 333 Rev 03

Documents

Transcript of Analizacalitatii Microbiologice a Apeii 333 Rev 03