87019832-ELECTROFOREZA

8/10/2019 87019832-ELECTROFOREZA

1/9

Universitatea Valahia din Targoviste

Proiect la Chimie

Electroforeza

Paximadi Nicolae

Targoviste 201


2/9

E!ECT"#$#"E%& P"#TE'NE!#" (E"'CE

Electroforeza este o metoda fizico)chimica de analiza ce *ermitese*ararea *roteinelor *e +aza diferentelor intre vitezele de de*lasare intr),ncam* electric a*licat medi,l,i res*ectiv- Ca ,rmare a caracater,l,i lor amfoter.

*roteinele *oseda o sarcina electrica ce de*inde de nat,ra molec,lei. */ si decom*ozitia medi,l,i- olec,lele incarcate electric. aflate in sol,tie si s,*,seacti,nii ,n,i cam* electric. vor migra catre electrod,l de *olaritate o*,sa-

Viteza c, care se de*laseaza o *artic,la intr),n cam* electric de*inde demai m,lti factori densitatea de sarcina electrica la s,*rafata *artic,lei f,nctie demarimea sarcinii si de vol,m,l *artic,lei3. densitatea *artic,lei. gradient,l de*otential re*rezentat de ra*ort,l dintre diferenta de *otential dintre electrozi sidistanta dintre acestea3. forta ionica a medi,l,i. vascozitatea l,i. tem*erat,ra- 4eaceeasi factori de*inde si grad,l de rezol,tie al ,nei metode electroforetice.nat,ra s,*ort,l,i folosit si */),l medi,l,i fiind decisive-

4e)a l,ng,l tim*,l,i s)a, folosit mai m,lte s,*ort,ri electroforetice. gel,lde agaroza fiind cel care asig,ra cea mai +,na rezol,tie-

(e c,nosc mai m,lte ti*,ri de electroforeza in gel de agaroza tehnicastandard. electroforeza in gel de (4()agaroza la care ada,garea (4( ) sodi,mdodecil s,lfat in com*ozitia s,*ort,l,i electroforetic *ermite se*ararea fracti,nilor*e +aza masei molec,lare3 si focalizarea izoelectrica-

Electroforeza in gel de agaroza *rezinta cateva avanta5e. cele mai im*ortantefiind

grad,l mare de rezol,tie. s*ecificitate si sensi+ilitate

ra*iditatea. conferita de *osi+ilitatea analizei sim,ltane a mai m,ltor*arametri. ca ,rmare a inde*endentei totale a celor do,a mod,le demigrare si colorare3

grad,l mare de re*rod,cti+ilitate *rin im*licarea minima a factor,l,i ,manla metodele man,ale3

diversificarea *arametrilor investigati *roteine. li*o*roteine. izoenzime.

hemoglo+ine normale si *atologice3

a*lica+ilitatea in caz,l mai m,ltor lichide +iologice ser dar si ,rina. !C" sialtele3. *rec,m si fa*t,l ca *entr, aceste lichide n, mai este nevoie deconcentrarea lor. fiind astfel inlat,rat ,n nea5,ns im*ortant care facea. dem,lte ori. im*ractica+ila metoda *entr, electroforeza *roteinelor ,rinare.din !C" si din alte fl,ide hi*o*roteice


3/9

E!ECT"#$#"E%& P"#TE'NE!#" (E"'CE

Permite se*ararea *roteinelor serice in fracti,ni al+,mina. alfa1. alfa2.+eta. gama glo+,line3 la */ 6-2 sa, in 7 fracti,ni al+,mina. alfa1. alfa2. +eta 1.+eta2. gama glo+,line3 la */ 8-- Utilizarea amidosch9arz),l,i dre*t colorantconfera rezol,tie. s*ecificitate si sensi+ilitate metodei. *,tand fi detectate. chiarsi +enzi monoclonale sla+ re*rezentate-

'nter*retarea *rinci*alelor modificari *e electroforeza *roteinelor serice

odificari la nivel,l al+,minelor

bisalbuminemiitranzitorii sa, *ermanente

analbuminemiecongenitala

hipoalbuminemiaa*are in

o ins,ficienta a*ort,l,i al+,minelor in alimentatie maln,tritie cronicasevera3

o dimin,area sintezei ins,ficienta he*atica ciroze. he*atite3 siinflamatii

o *ierderea lor accent,ata *e cale ,rinara sindrom nefrotic3.digestiva gastroentero*atie ex,dativa3 sa, c,tanataars,ri3

o hi*ercata+olism sindroame inflamatorii severe. endocrino*atiidiverse tireotoxicoza. sindrom C,shing3


4/9

hiperalbuminemiafara semnificatie *atologica im*ortanta a*are frecventla *acientii c, hemoconcentratie locala sa, sistemica sa, in ,rma*erf,ziilor c, al+,mina

Alfa-1 globulinele si Alfa-2 globulinele

Cresc in

sindrom nefrotic

dia+et zaharat

miocardoscleroza

endocardite +acteriene

ars,ri

+oli infectioase

re,matism

reactii inflamatorii

'n reactii de faza ac,ta se intesifica atat +anda alfa)1 cat si alfa)2-

Cresterea exclusiva a componentelor alfa-1*oate fi o+servata in

he*atita cronica

reactii de faza ac,ta insotite de hemoliza

tera*ie c, estrogeni

sarcina

Cresterea predominanta a componentelor alfa-2se intalneste in

*oliartrita re,matoida

+oli c, com*lexe im,ne circ,lante

Scaderea alfa-1 globulinelora*are

in ,rma ,nei ins,ficiente he*atocel,lare. maln,tritiei sa, *ierderii de*roteine


5/9

in caz,l deficit,l,i congenital de alfa)1 antitri*sina

Beta globulinele cresc in:

anemia feri*riva

disli*idemii

+oala C,shing

gama*atii monoclonale'g &. 'g :. lant,ri ,soare ;a**a sa, !am+da3

he*atite toxice

ciroze. incl,siv alcoolice

sindrom nefrotic

Scaderi ale beta globulinelor*ot a*are in

ins,ficienta he*atica. maln,tritie. *ierderi *roteice corelate c, dimin,areavalorii transferinei in mo+ilitatea electroforetica in zona +eta)1

scaderea fracti,nii C< a com*lement,l,i. asociata c, o scadere a fracti,nii+eta)2

Gama globulinele cresc in:

infectii +acteriene

*arazitoze

colagenoze

*oliartrita re,matoida

o+str,ctie +iliara

he*atita ac,ta sa, cronica

ciroza he*atica

le,cemii

mielom m,lti*l,


6/9

+oli inflamatorii

Estom*area sa, a+senta +enzii gama s,gereaza ,n deficit im,nagamaglo+,linemie3-

od,l de conservare si *astrare a *ro+elor *entr, electroforeza

Parametru Proba de analiat Conservare

Electroforeza *roteinelor serice ser 1 sa*tamana la 2)8=C

1 l,na la congelator

$actori de interferenta *entr, determinarile electroforetice

Parametru !actori de interferenta "fect


7/9

Electroforeza*roteinelor sericestandard si /"3

*lasma ca *ro+a deanalizat

tratament c,

anticoag,lante

hemoliza ser,l,i

decongelarea*ro+elor

*rezenta fi+rinogen,l,ic, mo+ilitate +eta)gama

d,+larea *ea>),l,i in

zona alfa)2 sa, +eta)glo+,linica

+anda s,*limentara in*,nct,l de a*licare a*ro+ei

Despre electroforezDei cunoscut nc de la sfritul secolului XIX, electroforeza se afirmac o metoda analitic de separare n urma lucrrilor referitoare lastadiul unor proteine (1937 ela!orate de "rne #iselius, laureat al

premiulu i $o!el, numi t i %printe le elect rofo rezei&'

Denumirea de electroforez proine din asocierea cuntului )recelectron (electric cu cel latin p*ore (purtator, eidenindu+se astfelrolul esenial al cmpului electric n procedeul descris'lectroforeza este o metod de analiz i separare !azat, n principal

pe cri teri i de sarc in elect ric i mas molecu lar ' -i)rarea

diferenial a particulelor ncrcate electric se face su! aciunea unuicmp electric continuu'lectroforeza proteinelor pe )el de a)aroz este te*nica cea maiuoar i mai puin costisitoare, implicnd o cantitate limitat demateriale, un timp de lucru scurt i o reproducti!ilitate foarte !un'.epararea electroforetic a proteinelor serice prezint un interes ma/orn testele clinice, datorit importantelor informaii pe care le oferacestea n dierse afeciuni, precum i asupra modalitilor de tratarea acestoralectroforeza proteinelor serice a/ut la dia)nosticarea diferitelorcazuri clinice, cum ar fi cazuri de mielom multiplu, macro)lo!ulinemie,

amiloidoz, sindrom nefrotic, afectiuni *epatice, infecii acute icronice sau cazuri n care nu se pot e0plica anumite simptome(o!oseal, creterea itezei de sedimentare a eritrocitelor, dureri despate, osteoporoz, leziuni osoase, deficiene de imuno)lo!uline,creterea calciului, proteinuria ence 2ones, insuficiene renale 4 5ul solutiei de mi)rare /oac un rol important n preluarea sarcinilorelectrice' 6n cazul proteinelor, p4+ul la care sarcina )lo!al este nulase numete p4 izoelectric'


8/9

P"'NC'P'U! E!ECT"#$#"E%E'

# *rotein? @n sol,Aie care are ,n */ inferior *,nct,l,i sa, izoelectric se vacom*orta ca o +az? Bi va acce*ta *rotonii /- Ea va deveni astfel @nc?rcat?*ozitiv

@n medi, acid

# *rotein? @n sol,Aie care are ,n */ s,*erior *,nct,l,i s?, izoelectric se vacom*orta ca ,n acid Bi va ceda *rotonii /- Ea va deveni astfel @nc?rcat? negativ

@n medi, +azic

rin urmare sta!ilirea p4+ului electrolitului purttor constituie condiia esenialapentru o!inerea separrilor'

Prin electroforeza ser,l,i. @n condiAiile amintite mai s,s. se o+Ain saBe fracAi,nial+,mina. D1). D2). ) si F) glo+,line- (e *oate realiza astfel Bi oelectroforegram? a fiec?rei migr?ri- # electroforegram? normal? estere*rezentat? @n mod,l ,rmator


9/9

#epreentarea grafic$ %electroforegram$& ob'inut$ (n urma separ$rii proteinelorunui ser normal)Valori normale. ex*rimate *rocent,al Bi @n gGdl. ale fracAiilor *roteice-

87019832-ELECTROFOREZA

Documents

Transcript of 87019832-ELECTROFOREZA