Cultivarea bacteriilor: medii de cultur, cultura pur, studiul caracterelor de cultivare

4. Etapele identificrii unei bacterii: cultivarea si caracterele de cultivare; caractere biochimice si antigeniceOBIECTIVE:

1. De a discuta scopurile cultivrii bacteriilor.

2. De a prezenta mediile de cultur utilizate pentru cultivarea bacteriilor: definiie, condiiile de baz ale unui mediu de cultur, criterii de clasificare, exemple.

De a discuta indicaiile utilizrii mediilor de cultur solide vs. lichide

mbogite vs. simple

difereniale/selective vs. simple

3. Tehnica nsmnrii n 4 cadrane. Obinerea culturii pure. Descrierea caracterelor de cultur ale bacteriilor pe diferite medii.

1. Scopurile cultivrii: Medical- diagnosticul etiologic al infeciilor bacteriene

- testarea sensibilitii la antibioticeSe discut cu studenii necesitatea obinerii culturii pure

Cultur pur = constituit din bacterii de acelai fel

= etapa indispensabil identificrii i testrii sensibilitii la antibiotice Industrial - obinerea de antigene, vaccinuri, produse de biosintez, bioconversie sau fermentare2. DefiniieMediul de cultur = soluie apoas a unor substane nutritive (nutrieni, factori de cretere).Nutrieni = substane ale cror soluii pot traversa membrana citoplasmatic. (Alimente = material crud din care deriv nutrienii, prin digestie.

Factori de cretere = metabolii eseniali pentru cretere: aminoacizi, baze azotate, vitamine.Bacterii fastidioase = dependente de numeroi factori de cretereCondiii pe care trebuie s le ndeplineasc un mediu de cultur:

s fie nutritiv. s asigure presiunea osmotic (n general, medii izotone) i pH (n general, 7-7,5) (similare celor din mediul intern). s fie steril, pentru a cultiva exclusiv microorganismele din produsul investigat. s fie transparent faciliteaz urmrirea culturii. s permit separarea, unele de altele, a microorganismelor dintr-un produs microbian. Condiiile fizico-chimice necesare cultivrii:

presiunea osmotic - majoritatea bacteriilor patogene cresc n medii izotone cu mediul intern al organismului gazd

- bacterii halofile ( >2 % NaCl) pH - majoritatea bacteriilor necesit un pH optim n jur de neutralitate (7-7,5)

- bacterii acidofile (5-5,5) / bazofile (8,5-9) temperatura: bacterii psihrotrofe se multiplic rapid la 20-30C i cultiv lent la temperatura frigiderului bacterii psihrofile (0-20C) bacterii mezofile (25-45C) bacterii termofile (5070C).- atmosfera de incubare: bacterii strict aerobe = se dezvolt doar n prezena oxigenului bacterii strict anaerobe = se dezvolt doar n absena oxigenului bacterii facultativ anaerobe = cultiv att aerob, ct i anaerob bacterii microaerofile = cultiv numai n prezena unor concentraii reduse de O2 (5%) bacterii carboxifile = necesit pentru cretere cantiti de CO2 mai mari dect cele din aer (5-10%)Clasificarea mediilor de cultur (criterii, repartizarea mediilor, exemple)

a. dup proveniena nutrienilor: - empirice ingrediente de origine animal sau vegetal- sintetice ingrediente chimic pure studiul necesitilor nutritive ale bacteriilorb. n raport de valoarea nutritiv: -simple - bacterii nepretenioase nutritiv

- mbogite - bacterii pretenioase nutritivc. dup consisten: - lichide produse patologice monobacteriene

- solide produse patologice pluribacteriene

- semisolide studiul mobilitii i conservarea tulpinilor bacteriene.d. dup scopul utilizrii: - de izolare uzuale - satisfac exigenele nutritive pentru o gam larg de specii bacteriene difereniale - conin substratul pentru anumite enzime bacteriene i un indicator care atest atacarea acestui substrat ( un caracter metabolic difereniaz ntre ele bacterii cu aspect al culturii identic pe mediile simple. selective - medii solide

- inhib dezvoltarea bacteriilor de contaminare a prelevatelor

- frecvent sunt i difereniale de mbogire - medii lichide

- favorizeaz multiplicarea bacteriilor a cror izolare o urmrim

- inhib selectiv flora de asociaie. - de identificare studiul activitii biochimice a bacteriilor n scopul ncadrrii ntr-un gen/specie.- de conservare.3. Cultivarea i izolarea bacteriilor n cultur pur

Tehnicile uzuale de cultivare a bacteriilor: nsmnarea bacteriilor pentru obinerea culturii pure se efectueaz demonstrativ nsmnarea prin epuizare n 4 cadrane, pe geloz simpl .nsmnare = depunerea n mediul de cultur a materialului bacterian, inoculum.Cultur = totalitatea bacteriilor acumulate prin multiplicareColonie = mas de cultur, vizibil cu ochiul liber pe suprafaa unui mediu de cultur solid, rezultat prin multiplicarea unei singure celule bacteriene sau a unui grup de celule, numit unitate formatoare de colonii/UFC.Colonie = clon bacterian, DECI cultur purDescrierea caracterelor de cultur: condiii optime de cultivare: bacterii cultivabile vs. necultivabile;

exigene nutritive: bacterii pretenioase vs. nepretenioase nutritiv;

temperatura optim de cultivare: psihrotrofe / psihrofile / mezofile / termofile;

atmosfera optim de cultivare: strict aerobe / strict anaerobe / facultativ anaerobe / microaerofile / carboxifile; pH: neutru / bacterii acidofile / bacterii bazofile;

presiune osmotic: bacterii care cultiv pe medii izotone/ bacterii halofile. aspectul culturii pe medii lichide / solide (sublinierea diferenelor): forma de cultur S i forma de cultur R pe mediu lichid / solid:Forma de culturMediu lichidMediu solid

S- tulbur omogen mediile lichide- suprafaa neted, lucioas

- contur circular

R- cultiv sub form de grunji, lsnd mediul supernatant clar suprafaa uscat, rugoas

margini neregulate

aspectul coloniilor: diametru, circumferina, relief, suprafa, culoare, transparena, consisten, aderena la mediu; modificri ale mediilor de cultur induse de cultivare (se prezint comparativ mediile sterile cu cele nsmnate)

hemoliza pe agar-snge: alfa / beta / gamma

reacii pe medii difereniale zaharate

producerea de pigment difuzibil n mediu producerea unui miros particular.PAGE 3