Lp. 14: Diagnosticul de laborator al infeciilor tractusului urinar. Identificarea unui bacil gram-negativ fermentativ: Escherichia coli.

OBIECTIVE: nsuirea etapelor diagnosticului etiologic n infeciile urinare; examenul bacteriologic al urinei n infecii produse de ageni oportuniti; rolul microscopiei n triajul probelor de urin i orientarea investigaiei microbiologice ulterioare; tehnicile curent utilizate pentru nsmnarea urinei: urocultura cantitativ cu pipeta gradat, urocultura cu ansa calibrat; rolul antibiogramei difuzimetrice n orientarea terapiei antimicrobiene n infeciile urinare; diagnosticul tuberculozei renale.

Condiia microbiologic a tractului urinar: rinichii, ureterele, vezica urinar = normal sterile; uretra distal = normal colonizat.Microbiota uretrei distale: stafilococi coagulazo negativi; enterococi; enterobacteriacee; difterimorfiITU se realizeaz pe:-cale ascendent (bacterii oportuniste);-cale hematogen, cu bacterii cu patogenitate primar;-cale limfatic.

Etiologia ITU:1) Bacterii - oportuniste (flora intestinal, regiunea perineal, vagin, uretra distal): bacili gram negativi (E. coli; Proteus mirabilis; Enterobacter cloacae; Klebsiella pneumoniae i Pseudomonas aeruginosa); coci gram pozitivi (Staphylococcus saprophyticus; S. aureus; Enterococcus faecalis; Streptococcus agalactiae); bacili gram pozitivi: Corynebacterium urealyticum. - patogeni primari: Mycobacterium tuberculosis.2) Virusuri: adenovirus (cistita hemoragic la copil).

Etapele diagnosticului de laborator:

1) Prelevarea produsului patologicPrelevate utile diagnosticului de ITU:- urina pentru sumar de urin i pentru examen bacteriologic al urinei;- snge la pacienii cu pielonefrit, pentru hemocultur, leucogram, VSH, fibrinogen, uremie, creatininemie;- LCR la nou-nscui.Prelevarea urinei pentru examenul cito bacteriologic: Prelevri uzuale: proba curat prins n zbor din jetul mijlociu (prima urin de diminea sau dup cel puin 3 ore de la miciunea anterioar, dup toaleta local cu ap i spun, urmat de uscarea zonei decontaminate; volum: 20 ml pentru izolarea cantitativ a microorganismelor condiionat patogene i 50 ml pentru izolarea patogenilor primari); Prelevri speciale: aspiraia suprapubian, prelevri prin cateter.Transportul probelor la laborator nu trebuie s depeasc mai mult de o or.

2) Examen microscopic n diagnosticul de laborator al ITU cu microorganisme oportuniste urmrete:A) aprecierea calitiii probei: - frotiu urin colorat Gram (leucocite, celule vezicale, celule bazinetale): prezena PMN pledeaz pentru ITU; prezena CES (celule epiteliale scuamoase) = markerii contaminrii vaginale.B) aprecierea piuriei (preparat umed, camera Fuchs Rosenthal): >10 leucocite / mm3 = PIURIE; < 3 leucocite / mm3 = lipsa piuriei; ntre 3 i 10 leucocite / mm3 = zon incert.C) aprecierea bacteriuriei : 1 2 bacterii/cmp microscopic = BACTERIURIE SEMNIFICATIV (>105 UFC/ml); prezena a mai mult de 3 categorii morfologice = marker de contaminare.

3) Izolarea bacterieiUROCULTURA CANTITATIV = nsmnarea pe geloz snge i pe agar MacConkey a unui volum fix de 0,1 ml din diluia 10-2 a urinii omogenizate, incubarea i aprecierea numeric a coloniilor dezvoltate.Bacteriuria se calculeaz dup formula:Nr. UFC / ml = N x D x 1/volumul nsmnatN = numrul coloniilor de pe plac;D = inversul diluiei.Interpretarea rezultatelor:O singur specie de bacili gram-negativi izolat n concentraie de 104-5 UFC/ml, de stafilococi 5x104 UFC/ml sau levuri 104 UFC/ml reprezint: - n prezena piuriei = ITU; n absena piuriei = colonizare abortiv a urinii ori prob examinat tardiv fr refrigerare imediat.

4) Identificarea bacteriei izolate- caractere microscopice

Frotiu cultur colorat Gram 100X(http://atlas.microumftgm.ro/bacteriologie/bactsp/coli.php)- caractere de cultivare- caractere biochimice

Teste de identificare biochimica E. coli(http://atlas.microumftgm.ro/bacteriologie/bactsp/coli.php)

5) Testarea sensibilitii la antibiotice.

Antibiogram difuzimetric E. coli(http://anamedex.ro/recipe/show/135/antibiograma)

Diagnosticul tuberculozei renale Prelevare: 3 probe matinale de urin, consecutive, din jetul mijlociu, n volum de 50 ml fiecare. Transport i conservare: cu aceleai precauii ca i pentru urocultura cantitativ. Concentrare prin centrifugare. Decontaminarea chimic a sedimentului cu NaOH 4%. Examen microscopic al frotiului din sedimentul urinar colorat Ziehl Neelsen. Frotiul din sediment urinar difer ca interpretare n raport cu sputa, deoarece pot exista BAAR, alii dect M. tuberculosis, prezeni n proba recoltat (M. smegmatis) Izolare pe mediu Lwenstein Jensen. Urmrirea culturilor pn la 8 sptmni. Antibiotice antituberculoase: de linia nti: hidrazida acidului izonicotinic (HIN), rifampicina, etambutolul, pirazinamida, streptomicina de linia a doua : cicloserina, etionamida, fluorochinolone, capreomicina, kanamicina, acidul para - aminosalocilic (PAS), rifabutin, viomicina