Lp. 12 Diagnosticul de laborator al infectiei HIV/SIDA

Obiective:1. Precizarea etiologiei virale a bolilor cu transmitere sexuală (pentru cele mai frecvente virusuri).2. Precizarea etapelor diagnosticului de laborator al infecţiei HIV/SIDA.3. Descrierea metodelor de diagnostic ale infecţiei HIV/SIDA si a criteriilor de diferentiere HIV versus SIDA 4. Precizarea metodelor diagnosticului de laborator al infectiei cu VHS si HPV

1. Etiologie: - HIV- Herpes simplex tip 2- HPV- VHB,VHC Diagnosticul de laboralor al infecţiei HIV/SIDA

2. Etape de diagnostic :a) Depistarea infecţiei HIV –teste de triajb) Confirmarea infecţiei HIV –teste de confirmare (WB, IF)c) Stadializarea clinico-epidemiologică a pacientului seropozitiv (numărul

limfocitelor CD4/mmc)d) Monitorizarea eficienţei terapiei antiretrovirale ( CD4/mmc, ARN/HIV)

3. Diagnosticul direct

!Se vor face precizări legate de structura HIV.Colectarea şi transportul probelor-sânge (atât pentru diagnosticul direct cât şi pentru cel indirect)-LCR, salivă, lacrimi, urină, secreţii vaginale, produse de biopsie (intestin)Probele se stochează la -20-70º C.

Diagnosticul direct propriu-zis: -izolarea virusului pe culturi de limfocite – în cercetare - evidentierea Ag p24 în ser (ELISA)-evidenţierea ADN proviral în limfocite (PCR)-evidentierea sau si cuantificarea ARN HIV (RT-PCR)

4. Diagnosticul indirect a) Teste tip screening -Teste rapide tip immunodotAvantaje : sunt rapide, nu necesită personal calificat sau aparatură electronicăDezavantaje: trebuie confirmate (specificitate redusa)-Latexaglutinarea -ELISA- (indirect sau competitiv)

1

Rezultate fals (+) –contaminarea preparatului obţinut pe culturi cu material faţă de care apar Ac non HIV); posibilitate practic inexistenta (nu se mai obtin antigenele prin cultivarea HIV pe culturi de limfocite – se obtin prin recombinare)Rezultate fals (-) – când testul se efectuează înaintea seroconversiei - la pacienţii imunosupresaţi - tardiv, în stadiul SIDA

b)Teste de confirmare -Western Blot –evidenţiază categoria Ac prezenţi Interpretare : prezenta a cel putin doua benzi

Pozitiv- prezenţa a cel puţin 2 din cele 3 benzi majore: env (gp 160/120,gp 41), +/- gag (p24) +/- pol (p 55)Negativ : absenţa benzilorIndeterminat : benzi prezente, dar nu se întruneşte criteriul de pozitivitate.Teste imunologice -nr limfocitelor CD4/mmc – parametru pentru stadializare, prognostic, monitorizarea terapiei antiretroviraleN: 500-1400/mmcPentru aprecierea eficienţei terapiei se folosesc: nr limfocitelor CD4, evaluarea Ag p24, nivelul viremiei plasmatice.

Diagnosticul SIDA - infectii cu oportunisti, sarcoame, leucemii, impun demonstrarea urmatoarelor criterii de laborator:-dispariţia Ac anti p24-reapariţia Ag p24-scăderea CD4 < 200/µL

Diagnosticul de laborator al infecţiei cu VHS tip 2

Produse patologice: lichid din secreţiile veziculare, frotiu cito vaginal, Diagnostic direct : - izolarea virusului în culturi de fibroblaşti sau celule epiteliale- evidenţierea –efect citopatic ( rotunjirea şi balonizarea celulelor, incluzii Cowdry)- identificarea – reacţii de neutralizare, imunofluorescenta (IF)Metode rapide : detectarea de antigene virale in proba prin IF sau detectarea genomului prin PCR

Diagnosticul indirect: nu este util pentru diagnosticul propriu-zis ci pentru studii seroepidemiologiceMetode: ELISA sau RN, RFC cind se foloseasc criteriile pe doua probe de ser (seroconversia sau dinamica semnificativă)

2

Diagnosticul de laborator al infecţiei cu HPV

Produs patologic: celule cervicale, biopsie col;-screening: testul Papanicolau - identificarea celulelor anormale (ASCUS, ASCH, LSIL, HSIL);- identificarea prin PCR a tipurilor HPV cu risc oncogen înalt (genotipare tip specifica – Linear Array Genotyping Test sau detectia simultana a genotipurilor HPV inalt oncogene, fara diferentierea intre genotipuri – Hybrid Capture II) - determinarea incarcaturii virale (Real Time PCR) – corelarea încărcăturii virale cu gradul leziunii intraepiteliale.

3