Identificarea Pesticidelor Organo

7/27/2019 Identificarea Pesticidelor Organo

1/9

IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO-FOSFORICE PRINCROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE

(7.70.)

Metoda se utilizeaz pentru identificarea pesticidelor organo-fosforice din ap,furaje,plante verzi, coninut gastric, albine.

Principiul metodei

Pesticidele organo-fosforice sunt extrase din proba de analizat cu eter de petrol, dupcare extractele obinute se purific pe coloan cu florisil, se concentreaz i se spoteaz pe placacromatografic unde compuii organo-fosforici sunt pui n eviden cu ajutorul unor reactivi deculoare specifici.

Materiale necesareReactivi- eter de petrol- acetonitril pentru cromatografie, saturat cu eter de petrol- sulfat de sodiu anhidru- cloroform- florisil (60-80 mesh), activat 2 ore la 650C- silicagel 60 G- amidon- vat de sticl

- benzen- aceton- hexan- alcool etilic- eter etilic- brom- clorur feric sol. 0,1 % n etanol 80 %- acid sulfosalicilic sol. 1 % n etanol 80 %- acid acetic glacial- tetrabromofenolftalein ethyl ester sol. 0,2 % n aceton- soluie de azotat de argint: 0,5 g azotat de argint se dizolv n 25 ml ap i se dilueaz

la 100 ml cu aceton- soluie de acid citric: 5 g acid citric se dizolv n 50 ml ap i se dilueaz la 100 ml cuaceton

- soluie de 2,6- dibromchinon-4-clorimid: 1g de 2,6 dibromchinon-4-clorimid sedizolv n 100 ml de alcool etilic, acidulat cu 1 ml acid acetic glacial

- etaloane de pesticide organo-fosforice

Sticlrie


2/9

- plnii de separare x 100 ml, 500ml, 2000 ml- plnii de filtrare- pahare Erlenmayer x 200 ml- pahare Berzelius x 100 ml- coloane cromatografice (lungimea 300 mm, = 20-25mm)

- pipete Pasteur- cilindri gradai x 25, 50, 100, 250 ml- baloane cotate x 100 ml- exicatorAparatur- echipament pentru cromatografie n strat subire- baie de ap termoreglabil- balan tehnic- balan analitic- rotavapor- etuv termoreglabil

Modul de lucru1. Extracia probelorAp: se iau pentru analiz 1000 ml ap i se trec ntr-o plnie de separare de 2 l. n

plnie se mai adaug 10 ml soluie saturat de clorur de sodiu i apoi se extrage succesiv cu eterde petrol n poriuni de 100, 50 i 50 ml. Extractul eteric se usuc pe o coloan cu 40 g Na 2SO4anhidru i se concentreaz la un volum corespunztor determinrii.

Pentru extracie se mai pot folosi i ali solveni cum ar fi: benzen, cloroform, clorur demetilen etc.

Furaje, coninut gastric: 20-25 g prob de analizat se extrag cu cca. 100 ml eter depetrol timp de 4-5 ore, agitnd energic din cnd n cnd. Extractul se filtreaz i se concentreaz

la cca. 20 ml, dup care se supune partiiei cu acetonitril.2. Partiia cu acetonitrilExtractul concentrat de la punctul A) se trece ntr-o plnie de separare de 100 ml,

transferul efectundu-se cu eter de petrol astfel ca volumul final s fie de cca. 25 ml. Se adaug25 ml acetonitril saturat cu eter de petrol, se agit energic i apoi se las n repaus pentru separeastraturilor. Partiia acetonitril-eter de petrol permite separarea reziduurilor de pesticide (care trecn acetonitril) de grsimi (care rmn n eter de petrol). Extracia cu acetonitril se repet, iarextractele reunite se trec ntr-o plnie de separare de 500 ml care conine 300 ml soluie apoasde sulfat de sodiu 2 %. Plnia de 500 ml (conine faza apoas i organic) se agit puternic 1minut i se las n repaus cel puin 30 minute. Dup separare, stratul organic care coninepesticidele se purific pe o coloan cu florisil.

3. Purificarea pe coloan cu florisilColoana de sticl, lung de 300 mm i cu un diametru de 20-25 mm, prevzut cu fritsau cu dop de vat, se umple cu un strat de 10 cm de florisil activat care se acoper cu un alt stratde 1 cm de sulfat de sodiu anhidru.

Coloana se umecteaz cu 50 ml eter de petrol, reglndu-se viteza de curgere a lichiduluiprin coloan la 5 ml/minut, dup care se introduce extractul eteric al reziduurilor de pesticide.

Eluarea reziduurilor de insecticide organo-fosforice de pe coloana cu florisil se facesuccesiv cu urmtoarele amestecuri de solveni: 200 ml 6 % eter etilic n eter de petrol; 200 ml


3/9

15 % eter etilic n eter de petrol i 200 ml 50 % eter etilic n eter de petrol. Dup eluie cele treiporiuni de eluat se concentreaz la un volum de 1-5 ml i se trece la determinarea propiu-zis ainsecticidelor.

Pentru probele de plante, furaje verzi i albine se procedeaz astfel: se introduc 20-25 gde prob mrunit ntr-un mixer peste care se adaug 350 ml amestec de 35 % ap n acetonitril.

Se omogenizeaz timp 5 minute, se iau 250 ml filtrat i se introduc ntr-o plnie de separare.Peste extractul apos se adaug 100 ml eter de petrol. Se agit amestecul 2 minute. Se adaug 10ml soluie saturat de NaCl i 600 ml ap, agitndu-se energic, dup care se las straturile s sesepare. Se arunc faza apoas, iar stratul de solvent se spal de 2 ori cu cte 100 ml ap. Fazaeteric se trece ntr-un Erlenmayer de 100 ml cu dop. Se adaug 15 g Na2 SO4 anhidru i se agit.Nu se las mai mult de o or cu Na2SO4 deoarece poate avea loc o adsorbie a reziduurilor deinsecticide pe acesta. Extractul se filtreaz i se concentreaz la un volum de civa ml.

Observaie: dac extractul este colorat, se poate purifica pe o coloan cu florisil.4. Separarea cromatograficExtractele obinute sunt supuse separrilor cromatografice pe cromatoplci cu diametrul

de 20 x 20 cm, acoperite cu silicagel G sau alumin. Grosimea stratului adsorbant este cuprins

ntre 0,25-0,50 mm. Plcile se activeaz la 110C timp de o or. Spoturile se aplic la 1,5 cm demarginea inferioar a plcii. Distana de migrare este de aproximativ 17 cm, astfel nct s seobin o separare convenabil.

Pentru aprecierea calitativ, aplicarea spoturilor se face cu pipete Pasteur bine efilate,dup care depozitul spotat se usuc sub curent de aer, pentru a mpiedica mprtiereasolventului pe o suprafa mai mare de 0,5 cm diametru, chiar dac aplicaia se repet (cazulextractelor foarte diluate).

Alturi de spoturile probei de analizat se pun spoturi dintr-o soluie etalon deinsecticide individuale sau n mixtur.

Cromatografia se execut n sistem ascendent n tancuri etane care se satureaz nprealabil pentru echilibrare, prin cptuire cu hrtie de filtru mbibat cu solveni.

Ca amestec de eluie se folosete sistemul benzen-aceton n raportul 4:1. Dup uscare,se expune placa la vapori de brom i dup 10-15 minute se spreiaz cu o soluie de clorur feric0,1 %. Dup nc 15 minute se spreiaz cu o soluie de acid sulfosalicilic 1 %, cnd apar spoturicaracteristice alb-glbui pe fondul mov-lila al plcii.

O alt posibilitate de a pune n eviden pesticidele organo-fosforice este urmtoarea: seelueaz placa cu un amestec de hexan:aceton n raport 4:1. Dup uscare, se pulverizeazuniform cu o soluie de 0,2 % ester etilic de tetrabromfenolftalein. Placa devenit albastr sepulverizeaz apoi cu o soluie de azotat de argint 0,5 %. Dup alte 2 minute plcile se spreiaz cuo soluie de acid citric 5 %. Apar spoturi albastre sau purpurii pe fond galben.

Un alt reactiv de culoare caracteristic pentru compuii organo-fosforici este 2,6-dibromchinon-4-clorimid. Dup eluarea plcii cu hexan:aceton i uscare, aceasta se

pulverizeaz cu o soluie de 2,6-dibromchinon-4-clorimid 1 % n alcool. Apar spoturi galbene,roii sau brune, caracteristice diverselor grupe de compui organo-fosforici. Pentru intensificareaculorii spoturilor placa se nclzete 5 minute la 110C.

Limita de detecie este de 1 g.


4/9

IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO - MERCURICE PRINCROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE

(7.72.)

Metoda se aplic la determinarea pesticidelor organo - mercurice din semine tratate.

Principiul metodei

Reziduurile de fungicide organo - mercurice se izoleaz din proba de analizat prinextracie n soluie de ditizon n eter etilic, se concentreaz i se spoteaz pe placacromatografic unde sunt evideniate cu reactivi de culoare specifici.

Materiale necesareReactivi- alcool izopropilic- clorhidrat de cistein- amoniac 25 %- sulfat de sodiu- eter etilic- ditizon- hexan- aceton- eter de petrol

- cloroform- sulfat de cupru- iodur de potasiu- sulfit de sodiu- silicagel 60 G- amidon- acid clorhidric 1 NSticlrie- pahare Berzelius x 150 ml- plnii de separare x 250; 1000ml- plnii de sticl = 50 mm

- pahare Erlenmayer x 150 ml- cilindri gradai x 50, 100, 1000ml- pipete 5, 10 ml- baghete de sticl- plci de sticl 20 x 20 cmAparatur- echipament pentru cromatografie n strat subire- balan tehnic


5/9

- baie de ap- etuv termoreglabil- pulverizatoare

Modul de lucru

Se iau n lucru 5 -10 g prob care se spal de dou ori cu amestec de 10 ml alcoolizopropilic i 5 ml clorhidrat de cistein alcalin (1 % n soluie amoniacal, pH 8). Soluia sesepar prin decantarei se centrifugheaz 5 minute la 2500 rotaii/minut. Supernatantul se trecentr-o plnie de separare care conine 700 ml soluie 4 % sulfat de sodiu i se spal cu 3 x 50 mleter etilic, reinnd soluia apoas. Din aceasta compuii organo -mercurici se extrag cu 3 x 25 mlsoluie de 0,005 % ditizon n eter etilic. Extractul eteric se concentreaz pe baie de ap la 2 -3ml.

Pentru cromatografie se folosesc plci acoperite cu silicagel G (grosime 0,50 mm),activate n prealabil la 1100 C timp de o or.

Probele de analizat se spoteaz pe placa cromatografic n paralel cu substane

standard. Ca sisteme de eluie se pot folosi:- hexan : aceton 9 : 1- eter de petrol : aceton 9 : 1Placa se usuc la temperatura camerei. Revelarea spoturilor se realizeaz prin:1) Pulverizare cu o soluie de ditizon 0,05 % n cloroform.2) Pulverizare cu o soluie de sulfat de cupru anhidru 20 % n acid clorhidric 1 N,

urmat de o nou spreiere a plcii cu un amestec de 5 g iodur de potasiu i 20 g sulfit de sodiudizolvat n 100 ml ap distilat. Apar spoturi roii pe fondul alb al plcii.

Limita de detecie este de 3 g.


6/9

IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO-CLORURATE PRINCROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE

(7.76.)

Metoda se utilizeaz pentru identificarea pesticidelor organo-clorurate din ap, furaje,plante verzi, coninut gastric, albine.

Principiul metodei

Pesticidele organo-clorurate sunt extrase din proba de analizat cu eter de petrol, dupcare extractele obinute se purific pe coloan cu florisil, se concentreaz i se spoteaz pe placacromatografic, unde compuii organo-clorurai sunt pui n eviden cu ajutorul unui reactiv deculoare specific.

Materiale necesareReactivi- eter de petrol- eter etilic- acetonitril pentru cromatografie, saturat cu eter de petrol- florisil (60-80 mesh), activat 2 ore la 650C- silicagel 60 G- amidon- sulfat de sodiu anhidru- amestec de eluie: 6 % eter etilic n eter de petrol; 15 % eter etilic n eter de petrol

- etaloane de pesticide organo-clorurate- alcool etilic- difenilaminSticlrie- plnii de separare 100,500 ml- plnii de filtrare- pahare Erlenmayer 200 ml- pahare Berzelius 200 ml- coloane cromatografice (lungime 300 mm, = 20-25 mm)- pipete Pasteur- cilindri gradai 25, 50, 100, 250 ml

- baloane cotate 100 ml- exicatorAparatur- echipament pentru cromatografie n strat subire- baie de ap termoreglabil- balan tehnic- balan analitic- rotavapor


7/9

- etuv termoreglabil- lamp UV

Modul de lucru

A) Extracia i purificarea probelorAp: se iau pentru analiz 200-500 ml ap; aceasta se extrage n plnie de separare, de

dou ori cu cte 20 ml eter de petrol, apoi nc o dat cu 10 ml. Extractul eteric se usuctrecndu-se pe o coloan de Na2SO4 anhidru, dup care se concentreaz la un evaporator rotativla volum de 1-5 ml.

n cazul extractelor de ape curgtoare sau de lacuri, n general nu este necesar opurificare. Dac acestea conin totui substane organice ce ar putea stnjeni determinarea, sepoate face o purificare pe coloan cu florisil sau celit.

Furaje, coninut gastric: 20-25 g prob de analizat se extrag cu cca. 100 ml eter de petroltimp de 4-5 ore, agitnd din cnd n cnd energic. Extractul se filtreaz i se concentreaz la cca.20 ml, dup care se supune partiiei cu acetonitril.

B) Partiia cu acetonitrilExtractul concentrat de la punctul A) se trece ntr-o plnie de separare de 100 ml,

transferul efectundu-se cu eter de petrol, astfel ca volumul final s fie de cca. 25 ml. Se adaug25 ml acetonitril saturat cu eter de petrol, se agit energic i apoi se las n repaus s se separestraturile. Partiia acetonitril-eter de petrol permite separarea reziduurilor de pesticide (care trecn acetonitril) de grsimi (care rmn n eter de petrol). Extracia cu acetonitril se repet, iarextractele reunite se trec ntr-o plnie de separare de 500 ml care conine 300 ml soluie apoasde sulfat de sodiu 2 %. Plnia de 500 ml (care conine faza apoas i organic) se agit puternic 1minut i se las n repaus cel puin 30 minute. Dup separare, stratul organic care coninepesticidele se purific pe o coloan cu florisil.

C) Purificare pe colana cu florisil:Coloana de sticl cu o lungime de 300 mm i cu un diametru de 20-25 mm, prevzut

cu o frit sau cu un dop de vat, se umple cu un strat de 10 cm florisil activat care se acoper cuun alt strat de 1 cm de sulfat de sodiu anhidru.

Coloana se umecteaz cu 50 ml eter de petrol, reglndu-se viteza de curgere a lichiduluiprin coloan la 5 ml/minut, dup care se introduce extractul eteric al reziduurilor de pesticide.

Eluarea coloanei se face cu 200 ml amestec 6 % eter etilic n eter de petrol. Eluatulastfel obinut se concentreaz la 5-10 ml. Acest eluat conine n general toate reziduurile depesticide organo-clorurate cu excepia dieldrinului si endrinului.

Dup colectarea primului eluat se mai poate face o eluie a coloanei cu 200 ml 15 % eter

etilic n eter de petrol. Acest din urm eluat conine dieldrin i endrin i se reunete cu primuleluat.Plante, furaje verzi, albine: se introduc 20-25 g prob mrunit ntr-un mixer peste care

se adaug 350 ml amestec de 35 % ap n acetonitril. Se omogenizeaz timp de 5 minute, se iau250 ml filtrat i se introduc ntr-o plnie de separare. Peste extractul apos se adaug 100 ml eterde petrol. Se agit amestecul 2 minute. Se adaug 10 ml soluie saturat de clorur de sodiu i600 ml ap, agitndu-se energic, dup care se las s se separe straturile. Se scurge apa, iarstratul de solvent se spal de dou ori cu cte 100 ml ap. Faza eteric se trece ntr-un pahar


8/9

Erlenmayer de 100 ml cu dop. Se adaug 15 g Na2SO4 anhidru i se agit. Nu se las mai mult deo or cu Na2SO4 deoarece poate avea loc o adsorbie a reziduurilor de insecticide organo-clorurate pe acesta. Extractul se filtreaz i se concentreaz la un volum de civa ml.

Observaie: dac extractul este colorat, se poate purifica pe o coloan cu florisil.

D. Separarea cromatograficExtractele obinute sunt supuse separrilor cromatografice pe cromatoplci cudimensiuni de 20 x 20 cm, acoperite cu silicagel G sau alumin. Grosimea stratului de adsorbanteste cuprins ntre 0,25-0,50 mm. Plcile se activeaz la 110C timp de o or. Spoturile se aplicla 1,5 cm de marginea inferioar a plcii. Distana de migrare este de aprox. 17 cm, n careinterval se obine o separare convenabil.

Pentru o apreciere calitativ aplicarea spoturilor se face cu o pipet Pasteur bine efilati uscarea consecutiv a depozitului spotat, pentru a mpiedica mprtierea solventului pe osuprafa mai mare de 0,5 cm diametru, chiar dac aplicaia se repet (cazul extractelor foartediluate).

Alturi de spoturile probei de analizat se pun spoturi dintr-o soluie etalon de insecticide

individuale sau n mixtur.Cromatografia se execut n sistem ascendent n tancuri etane care se satureaz nprealabil pentru echilibrare, prin cptuire cu hrtie de filtru mbibat cu solveni.

Ca amestec de eluie se folosete sistemul eter de petrol : eter etilic n raportul 2 : 1.Dup eluie plcile se usuc la temperatura camerei. Revelarea se face prin stropirea plcilor cu osoluie alcoolic 0,5 % de difenilamin, urmat de iradiere n ultraviolet timp de cteva minute.

Limita de detecie este de 0,5 g.


9/9

Identificarea Pesticidelor Organo

Documents

Transcript of Identificarea Pesticidelor Organo