GENUL BRUCELLA

Brucelozaeste o boala infectioasa, avand o raspandire importanta in intreaga lume, reprezentand inca o problema de sanatate publica importanta in tarile dezvoltate printre care si Romania. Bruceloza face parte din grupul zooantroponozelor, infectia fiind data de speciile genuluiBrucella abortus, prezenta la vite,Brucella melitensis, la oi, Brucella suis, la porcine si Brucella canis, la caini, acestea reprezentand infectii mai frecvente.Bruceloza este predominanta in regiunea Mediteraneana. Aceasta boala a fost elucidata de Sir David Bruce, Hughes si Zammit ce lucrau in Malta. Brucella abortus este bacteria implicata in infertilitatea si avortul la vite in special. Brucella suis a fost descoperita de catre Traum, iar ca agent al brucelozei la om de catre Hudden. Buddle si Boyce a descoperit B. ovis, Carmichael si Bruner- B. canis la caini si mai nou B. pinnipediae si B. cetaceae s-au descoperit la mamiferele marine (Shon et al 2003, McDonald et al 2006)(3).

Genul Brucella cuprinde mai multe specii care infecteaz animalele i se pot transmite omului. CARACTERE GENERALE Habitat Sunt patogeni primari ai multor animale habitatul principal al brucellelor fiind reprezentat de organismul infectat. Germenii pot rezista i n mediul extern datorit unor mecanisme care le asigur persistena (posibilitatea transformrii n condiii nefavorabile n forme L). Caractere morfotinctoriale Sunt cocobacili Gram-negativi, imobili, nesporulai, izolai sau mai rar prezeni n grmezi neregulate. Se coloreaz bipolar. n produsul patologic sunt prezeni special intracelular. Cu tehnici speciale de colorare se poate evidenia o capsul fin. n culturi vechi prezint un mare grad de polimorfism.

Rezistena fa de factorii fizici i chimici Rezistena n mediul extern este mare, mai ales dac sunt protejate de un strat de material organic. n esuturile fetale infectate eliminate pot rezista sptmni de zile. Supravieuiesc 2-3 luni n gunoiul de grajd, 3-60 zile n brnzeturi, 15-40 de zile n pulberi. Sunt moderat sensibile la temperatur i aciditate, sunt sensibile la dezinfectantele uzuale. Pasteurizarea laptelui le distruge. Rspuns imun Bruceloza acut, la fel ca i administrarea de vaccinuri cu tulpini vii atenuate, determin un rspuns imun att umoral ct i celular. n principiu, o dat cu apariia semnelor i simptomelor se pot detecta anticorpi, dar prezena lor nu previne bacteriemia i nici reinfecia (care este relativ frecvent). n primele sptmni ale infeciei acute crete titrul anticorpilor de tip IgM care poate persista n infecia cronic sau chiar dup terapia antimicrobian, pe durata a 2 ani. Dup 3 sptmni de la debutul bolii apar anticorpi IgG, ating valoarea maxim dup 6-8 sptmni i persist pe durata infeciei latente. Dup stadiul acut al brucelozei apar anticorpi blocani de tip IgA care intefereaz activitatea aglutinant a anticorpilor IgM i IgG. Anticorpii blocani persist muli ani n infecia cronic i latent. Brucellele sunt fagocitate de macrofage, distruse cu eliberarea de antigene i endotoxine dar pot la fel de bine s se multiplice rapid n interiorul fagocitelor, Brucella fiind o bacterie facultativ intracelular. Imunitatea mediat celular este esenial n rezistena fa de o nou mbolnvire. Rspunsul imun celular este n mod cert necesar pentru eradicarea brucellelor situate intracelular. Limfocitele T stimuleaz activitatea bactericid a macrofagelor care distrug bacteriile n interiorul unui granulom specific. n unele cazuri Brucella rezist i persist n interiorul macrofagelor ducnd la reactivri ale bolii cu 115 instalarea unei stri de hipersensibilizare ntrziat caracteristic pentru forma cronic a brucelozei.

Caractere de patogenitate Caracterele de patogenitate se manifest prin capacitatea germenilor de a se multiplica i de a invada organismul. Nu s-au detectat exotoxine i nu s-au pus n eviden constitueni antifagocitari capsulari sau ai peretelui celular care s fie implicai n patogenitatea Brucellei. Au afinitate pentru placenta i esuturile fetale ale animalelor receptive avnd capacitatea de a metaboliza un hidrocarbonat (eritritol) prezent n aceste structuri.La animalele gestante provoac avort, dup care infecia se localizeaz la nivelul glandei mamare, Brucella eliminndu-se timp ndelungat prin lapte.PATOGENIE. BOALA LA OM Bruceloza este o zooantroponoz. La animale bruceloza are evoluie asimptomatic, cu afectarea aparatului genital la femel nsoit de avort i cu leziuni testiculare la mascul. Boala este caracteristic pentru ovine, caprine, bovine, porcine dar poate afecta i alte animale domestice care vor prezenta simptomatologie necaracteristic. n formele latente de infecie caprele, oile sau vacile elimin Brucella prin lapte. Brucella este eliminat i prin urin, secreii produse de sarcin (placent, lichide fetale, avortoni). Bruceloza este o boal specific animalelor, omul contaminndu-se accidental. Poarta de intrare este tractul digestiv sau tegumentul lezat, mai rar bacteria ptrunznd prin conjunctiv sau pe cale respiratorie.Incubaia este n medie de 2-3 sptmni (maxim 1-6 sptmni), ns uneori pot trece cteva luni ntre momentul infectrii i apariia fenomenelor clinice.Debutul este de obicei insidios, manifestat prin astenie, indispoziie, cefalee, artralgii, febr moderat, transpiraii abundente.n perioada de stare simptomele sunt polimorfe, bruceloza fiind una din bolile extrem de greu de recunoscut clinic. Febra ondulant (care crete n cursul dup amiezei i scade n timpul nop_ii) nso_it de frisoane are mai mult o valoare istoric, n realitate, curba febril are un aspect variabil: ondulat, neregulat, remitent i intermitent.Transpiraiile abundente nocturne, cu un miros caracteristic, astenia, durerile sub diverse forme reprezint elemente comune n cursul bolii.S-au descris circa 200 de semne clinice care pot apare n bruceloz.Durata bolii poate fi de 3-4 sptmni, dar cel mai frecvent depete 3 luni, ajungnd n formele cronice la ani de zile. n formele cronice diagnosticul se stabilete foarte dificil. n formele cronice ale bolii, din focarele de infec_ie se descarc periodic germeni n torentul sanguin unde sunt prezen_i anticorpi bactericizi anti-Brucella. Distrugerea unui numr mare de microorganisme n urma reac_iilor antigenanticorp cu eliberarea de endotoxin poate cauza stri de oc endotoxic.

Forme clinice ale brucelozei umane:_ forma inaparent: infec_ia este depistat doar prin determinarea anticorpilor specifici, fr nici un semn clinic de boal;_ forma septicemic: incuba_ie 2-3 sptmni, debut insidios. n perioada de stare se instaleaz febra, transpira_iile abundente, astenie, artralgii, mialgii toate cuprinse sub denumirea de febr ondulant sudoro-algic. Se asociaz hepato-splenomegalie i adenopatii.Investiga_iile de laborator eviden_iaz neutropenie i se pot eviden_ia anticorpi specifici. n acest stadiu hemocultura sau medulocultura permit izolarea bacteriei;_ formele localizate apar dup o form inaparent sau septicemic de boal. Localizrile pot fi multiple dar mai frecvent sunt afectate osul i articula_iile: spodilit lombosacrat, sacro-ileit, artrite. Se mai ntlnesc afectri neuropsihice, pulmonare, hepatice, splenice, cutanate, meningoencefalit, orhit, endocardit;_ recderi sau forme cu evolu_ie prelungit semnele clinice sau afectrile locale persist peste 1 an, tratamentul antibacterian este ineficient, hemocultura sau serodiagnosticul sunt adesea pozitive. Este greu de diferen_iat recderea de formele trenante la persoanele cu risc profesional de contaminare;_ forma cronic fr un tablou clinic caracteristic, cu manifestri polimorfe: subfebrilitate prelungit (sptmni, luni, ani), astenie, artralgii, transpira_ii, cefalee, tulburri neuro-psihice, splenomegalie. Hemocultura i serodiagnosticul sunt negative. Intradermoreac_ia este pozitiv stabilind diagnosticul etiologic al manifestrilor clinice.Formele cele mai grave apar ca urmare a infec_iei cu Brucella melitensis, urmat de infec_ia cu Brucella suis, Brucella abortus i respectiv Brucella canis.Brucella melitensis determin febra de Malta sau febra ondulant, o infec_ie sever cu bacteriemie bine exprimat, granuloamele formate la nivelul organelor parenchimatoase evolund spre cazeificare i abcedare.Brucella abortus i Brucella canis determin forme uoare de boal, frecvent inaparente, fr complica_ii supurative ale granuloamelor iar Brucella suis determin forme cronice de bruceloz caracterizate prin supura_ii ale granuloamelor.DIAGNOSTIC DE LABORATORn realizarea diagnosticului se pornete de la aspect clinice i epidemiologice, ns diagnosticul de laborator este esen_ial, reprezentnd unica metod cert de diagnostic.Metodele de diagnostic amintite au utilitate n raport cu stadiul de evolu_ie al bolii (tabel X).n cadrul diagnosticului bacteriologic, produsele patologice sunt reprezentate de snge, mduv osoas, material recoltat prin punc_ie hepatic, splenic sau ganglionar, urin, bil, lapte, materiale necroptice etc., n func_ie de localizarea procesului infecios.I. Diagnosticul direct1. Microscopia direct i chiar colora_ia imunofluorescent rmne frecvent negativ.2. Izolarea bacteriei impune utilizarea mediilor speciale, bogate n substan_e nutritive, a mediilor bifazice pentru hemoculturi. Pentru produsele patologice bogate n flor de asocia_ie mediile sunt suplimentate cu amestecuri selective. Incubarea se face aerob n atmosfer de 10%CO2, timp de 10 zile (3 sptmni pentru hemoculturi), timp n care culturile sunt urmrite zilnic.3. Identificarea bacteriei se bazeaz pe caracterele de cultur, pe aspectul microscopic al culturii, pe teste biochimice preliminare i pe aglutinarea pe lam cu seruri anti-brucella forma S:- fermentarea glucozei i lactozei prin metode clasice;- producerea de oxidaz;- hidroliza semicantitativ a ureei.Testele specifice de identificare sunt efectuate n laboratoare speciale:- producere de H2S;- necesitatea CO2;- creterea n prezen_a tioninei i fucsinei bazice;- aglutinarea cu antiseruri monospecifice;- sensibilitatea la fagul Tbilisi;- sonde ADN.II. Diagnosticul indirect1. Diagnosticul serologic cuprinde aglutinarea pe lam (Huddleson, reac_ie calitativ, de screening) care trebuie confirmat prin cuantificarea aglutininelor anti- Brucella n tuburi (reac_ia de aglutinare Wright). Se preleveaz cantitatea necesar de snge naintea efecturii intradermoreac_iei cu brucelin/melitin. Fiecare reac_ie utilizat n serodiagnostic identific anumite categorii de anticorpi i de aceea rezultatele ob_inute pot fi discordante.n primele sptmni ale infec_iei crete titrul anticorpilor de tip IgM. Acest titru rmne ridicat n infec_ia cronic i poate persista pn la 2 ani chiar dup tratamentul antimicrobian eficient.Anticorpii de tip IgG apar la 3 sptmni de la infec_ie, ajung la valori maxime la 6-8 sptmni i persist pe toat durata infec_iei latente.Dup stadiul subacut al infec_iei, persistnd ani de zile n infec_ia cronic i latent, apar anticorpi tip IgA (anticorpi blocan_i) care interfereaz activitatea aglutinant a anticorpilor IgM i IgG. Din acest motiv dup stadiul acut al brucelozei diagnosticul serologic este dificil ntruct se ob_in deseori rezultate fals negative prin reac_ia Wright. Anticorpii tip IgA se eviden_iaz prin testul de blocare sau testul Coombs.Reacia Wright este o reacie de aglutinare n tuburi care eviden_iaz anticorpii aglutinan_i de tip IgG i IgM. Este prima reac_ie care devine pozitiv dar se negativeaz repede. Este pozitiv doar n faza acut a bolii. Un titru 80 este semnificativ. Pot aprea reac_ii fals pozitive sau fals negative.Reac_iile fals pozitive se datoreaz reac_iilor ncruciate cu Yersinia enterocolitica, Francisella tularensis,Vibrio cholerae.Posibilitatea unor reac_ii fals negative impune determinarea anticorpilor blocan_i care apar la unii pacien_i, n special n faza cronic a infec_iei. Sunt IgA i IgG care se fixeaz la nivelul situsurilor antigenice fr a determina aglutinare. Pentru a exclude un rezultat fals negativ, ntuburile negative se adaug o pictur de martor pozitiv n eprubeta de reac_ie. Dac nu se produce aglutinare nseamn c sunt prezen_i anticorpi blocan_i fixa_i pe celula bacterian i astfel reac_ia de aglutinare este inhibat.Reacia cu antigen tamponat este un test rapid, simplu i specific de aglutinare pe lam, n mediu acid, utiliznd o suspensie de Brucella inactivat i colorat cu roz bengal. Prin aceast reac_ie se eviden_iaz anticorpi de tip IgG. Devine pozitiv mai trziu dar este mai sensibil i rmne mai mult timp pozitiv comparativ cu reac_ia Wright.Reacia de fixare a complementului este dificil de efectuat.Imunofluorescen_a indirect detecteaz tardiv anticorpi anti-Brucella comparativ cu reac_ia Wright. Este foarte util n diagnostic ntruct prin aceast reac_ie sunt detecta_i anticorpi specifici n fazele n care alte teste serologice s-au negativat.2. Intradermoreac_ia la brucelin/melitin permite testarea sensibilit_ii de tip ntrziat. Se inoculeaz intradermic, pe fa_a anterioar a unui antebra_, 0,1 ml filtrate de cultur de B.abortus/B.melitensis iar la cellalt antebra_ se inoculeaz 0,1 ml bulion care s-a utilizat la ob_inerea brucelinei/melitinei (martor). Rezultatul testului se citete dup 24-48 de ore. Lipsa reac_iei la testul martor permite citirea rezultatului. Prezen_a eritemului i a edemului la locul inoculrii filtratului de cultur indic o reac_ie pozitiv.Intradermoreac_ia este pozitiv n formele cronice de boal uneori fiind unicul semn pozitiv al infec_iei.TRATAMENT Tratamentul brucelozei este dificil din cauza localizrii intracelulare a microorganismului. Trebuie deci administrat un antibiotic activ pe Brucella care n acelai timp s penetreze intracelular. Ciclinele, rifampicina, cotrimoxazolul, fenicolii ndeplinesc aceste cerine. Brucella poate fi sensibil la tetraciclin sau ampicilin. Se poate administra o asociere de antibiotice. Ameliorarea simptomatologiei se poate produce n cteva zile de la nceperea tratamentului. Totui, datorit localizrii intracelulare a germenului, tratamentul trebuie s fie prelungit (mai multe sptmni). Sunt posibile recderi chiar i sub antibioterapie. n bruceloza cronic sau latent antibioticoterapia este ineficient.EPIDEMIOLOGIE. PREVENIRE. CONTROL Sursa de microorganisme din genul Brucella este reprezentat de animalele bolnave. Transmiterea infec_iei la om se realizeaz prin ingestia de lapte sau de produse contaminate provenite de la animalele bolnave, prin contactul cu _esuturile avortonului, blegar, pulberi, apecontaminate cu Brucella la nivelul leziunilor tegumentare, la nivelul conjunctivei sau prin inhalarea aerosolilor contamina_i cu Brucella, degaja_i n cursul avortului. Bruceloza este n principal o boal profesional, aprnd la lucrtorii din sectorul zootehnic, veterinari, fermieri, mcelari etc. Elementul esen_ial pentru eliminarea brucelozei umane este eradicarea bolii la animale. Acest lucru s-ar putea realiza folosind un vaccin viu atenuat, care determin imunitate i prin sacrificarea animalelor bolnave. n unele _ri vaccinarea animalelor este interzis pentru c mpiedic diagnosticarea serologic a bolii: testele serologice vor eviden_ia anticorpii post-vaccinali. ntre metodele de prevenire a infeciei umane cu Brucella se pot aminti i pasteurizarea laptelui, evitarea contactului cu produsele animale contaminate i aplicarea msurilor de protecie a personalului aflat la risc pentru contractarea bolii. Personalul expus riscului infeciei are obligaia de a purta echipament de protecie: mti, mnui, oruri, cizme de cauciuc.

Vaccinarea selectiv a personalului care vine n contact cu animalele se poate realiza cu vaccin viu atenuat.Multe ri nu au acceptat vaccinarea la om ci doar un control serologic i prin IDR la personalul expus infeciei.