LP 6. Dozarea hemoglobinei / 2 ore

Hemoglobina

Derivatii hemoglobinei

Hemoglobina reprezinta componentul principal al eritrocitelor (95 % din proteinele

citoplasmatice eritrocitare) si serveste ca vehicul pentru transportul oxigenului si

dioxidului de carbon.

Hemoglobina este o proteina conjugata constand dintr-un tetramer format din 2

perechi de lanturi polipeptidice (globine 96%), fiecare dintre acestea fiind conjugat cu

un grup hem (4%), un complex al unui ion de fier cu pigmentul rosu, porfirina, care

confera sangelui culoarea rosie. Fiecare gram de hemoglobina poate transporta 1.34

mL oxigen per 100 mL de sange.

Rol

Hemoglobina fixeaza reversibil oxigenul molecular la nivelul plamanilor, cu formarea

oxihemoglobina HbO2 si dioxidul de carbon cu formarea carbhemoglobinei HbCO2,

forma de transport a CO2 de la tesuturi la plamani.

Hemoglobina serveste de asemenea ca tampon in lichidul extracelular. In tesuturi, la

pH scazut, oxigenul se disociaza de Hb; Hb deoxigenata se leaga de ionii de hidrogen;

in eritrocite anhidraza carbonica converteste dioxidul de carbon in bicarbonat si ioni

de hidrogen. Pe masura ce ionii de hidrogen se leaga de hemoglobina, ionii bicarbonat

parasesc celula; pentru fiecare ion bicarbonat care paraseste celula intra un ion de

clor.

Formele de hemoglobina prezente in mod normal in circulatie includ:

deoxihemoglobina (HHb), oxihemoglobina (O2Hb), carboxihemoglobina (COHb) si

methemoglobina (MetHb), toate acestea fiind determinate impreuna in sangele total.

In anumite situatii clinice diferitele forme de Hb pot fi determinate individual.

Dozarea Hb ca cianmethemoglobina prin metoda Drabkin

Este metoda standard de hemoglobinometrie.

Principiul metodei

Fericianura de potasiu oxideaza ferul feros (2+) din hemoglobina la fer 3+ si toate

tipurile de hemoglobina se transforma n methemoglobina. Aceasta se combin cu cianura de potasiu transformndu-se n cianmethemoglobina - compus stabil.

Reactivi

1. Reactiv Drabkin - 0,14 g fosfat monopotasic - 0,2 g cianura de potasiu - Apa distilata pana la 1000 ml (pH 6,4)

Se filtreaza prin hartia de filtru, se pastreaza la frigider in flacoane de sticla bruna,

bine inchise, aprox 2 luni.

Parametri obligatorii pt rv Drabkin:

- pH 7,3 7,5 - claritate - stabilitate

2. Standard de cianmetHb

Proba Sange capilar sau venos recoltat pe anticoagulant EDTA

Tehnica de lucru In 2 eprubete de hemoliza se adauga 5 ml rv Drabkin.

Intro eprubeta se pune cu o micropipeta de hemoglobina, 0,02 ml sange, al carei

exterior se sterge cu o hartie de filtru.

In cealalta eprubeta se adauga 0,02 ml standard.

Se lasa 30 min in repaus.

Se citesc Ep si Es fata de apa distilata la = 540 nm in cuve de 1 cm.

Calcul

Cp = Ep / Es x Cs (g Hb /100 ml ser)

Conditii de analiza

Spekol

- lungimea de unda - cuve de 1 cm

Standard

- se utilizeaza o singura data (fiola de standard are valabilitate 1 ora de la deschidere)

- se pastreaza la rece

Reactiv Drabkin

- cianura de potasiu ,f toxica, daca este umeda se pastreaza in exicator 24 48 ore

- pH 7,3 7,5 - pH apa distilata 6 6,5 - pastrare la frigider in sticle brune cu dop de plastic sau sticla

Pipete

- curate, uscate, intacte

Proba, esantion de sange

- se recolteaza fara bule de aer pana la semn

Tehnica de lucru

- micropipeta se introduce la fundul eprubetei cu reactiv - nu se introduc bule de aer - se spala micropipeta in reactiv de 2-3 ori - omogenizarea reactivului se face printr-o singura scuturare - se respecta cu strictete timpul de reactie de 30 min.

Valori normale nou nascut 17 20 g/100 ml copii 0 - 1 an 12 - 19 g/100 ml

copii 1 - 15 ani 11,2 - 13,4 g/100 ml

barbati 14 18 g/100 ml femei 12 16 g/100 ml

Variaii patologice scaderi anemii, hemoragii cresteri poliglobulii, deshidratare, insuf. pulmonar i cardiac, tumori